一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术提供了两种半抗原：半抗原1和半抗原2，半抗原1的结构式如式(I)所示；半抗原2的结构式如式(II)所示。应用半抗原2制备得到用于检测马来酸氯苯那敏的抗体，应用半抗原1制备得到用于包被的人工抗原1，该抗体对马来酸氯苯那敏具有高灵敏度和高特异性的识别能力，最低检测限为0.06ng/mL，满足市场监管所需的检出限，为建立特异性检测马来酸氯苯那敏的免疫检测方法提供了核心原材料，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于食品安全检测
，具体涉及一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]马来酸氯苯那敏(Chlorphenamine maleate)，又名扑尔敏，化学名为N，N
‑
二甲基
‑7‑
(4
‑
氯苯基)
‑2‑
吡啶丙胺顺丁烯二酸盐，是一种组胺Hl受体拮抗剂，能对抗过敏反应所导致的毛细血管扩张，具有明显的中枢抑制作用，能增加麻醉药、镇痛药、催眠药和局麻药的作用，临床上多用于皮肤过敏症，也常用于过敏性鼻炎、药物及食物过敏等。但是过量使用马来酸氯苯那敏，可能出现心悸、皮肤瘀斑、出血倾向。在市场监督管理局公布的检测公告中，部分不法商家受利益驱使，往凉茶中非法添加马来酸氯苯那敏，对消费者的身体带来潜在危害。
[0003]目前，我国并没有建立针对马来酸氯苯那敏的标准检测方法。而国内外相关文献中，对马来酸氯苯那敏的检测技术，主要包括有光谱法、非水酸碱滴定法、质谱法、色谱法及其联用技术等(李建定,王沛.马来酸氯苯那敏的检测方法[J].科技视界,2015(17):176+205.)。这些方法虽然准确度高，但仪器设备昂贵、样品前处理复杂繁琐、检测成本高且需要专业人员操作，不符合现场即时检测的要求，中国专利技术专利CN101865857A公开了利用沉淀作用检测非生物材料中的马来酸氯苯那敏的检测方法，该方法虽然适用于现场快速检测，但是仅仅使用于样品中马来酸氯苯那敏含量稍高的样品检测；中国专利技术专利CN102565042A公开了一种中成药和保健食品中掺杂马来酸氯苯那敏的快速筛查方法和快速半定量测定方法，该方法虽然可实现快速筛查，但仅仅能实现半定量的检测样品中的马来酸氯苯那敏的浓度，难以满足现场快速检测的食品监管需求。因此，急需开发一种快速、准确、高效、稳定的检测食品中马来酸氯苯那敏的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中马来酸氯苯那敏检测方法的缺陷和不足，提供一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。
[0005]本专利技术的目的在于提供两种检测马来酸氯苯那敏的半抗原，半抗原1和半抗原2。
[0006]本专利技术的目的还在于提供所述半抗原1、半抗原2在制备用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原中的应用。
[0007]本专利技术的目的还在于提供用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原1和人工抗原2。
[0008]本专利技术的目的还在于提供半抗原1、人工抗原1、半抗原2或人工抗原2在制备用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗体中的应用。
[0009]本专利技术的目的还在于提供一种检测马来酸氯苯那敏的抗体。
[0010]本专利技术的目的还在于提供用于免疫检测马来酸氯苯那敏的人工抗原组。
[0011]本专利技术的目的还在于提供一种检测马来酸氯苯那敏的试剂盒。
[0012]本专利技术的目的还在于提供一种检测马来酸氯苯那敏的免疫分析方法。
[0013]本专利技术的上述目的通过以下技术手段实现：
[0014]本专利技术提供了一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原1，所述半抗原1的结构式如式(I)所示：
[0015][0016]所述半抗原1采用系统命名法为：4
‑
((4
‑
氯苯基)(吡啶
‑2‑
基)甲氧基)
‑4‑
氧代丁酸。
[0017]本专利技术所述半抗原1的制备方法为：
[0018]将(4
‑
氯苯基)(吡啶
‑2‑
基)甲醇、三乙胺、4
‑
二甲氨基吡啶溶于溶剂无水吡啶中，然后添加丁二酸酐，搅拌反应后分离纯化即可得到半抗原1。
[0019]优选地，所述搅拌反应的温度为80～90℃，时间为3～5h。
[0020]所述半抗原1在制备用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原中的应用也在本专利技术的保护范围之内。
[0021]本专利技术还提供了一种检测马来酸氯苯那敏的半抗原2，其结构式如式(II)所示：
[0022][0023]所述半抗原2采用系统命名法为：4
‑
((4
‑
氯苯基)(吡啶
‑2‑
基)甲氧基)甲基)苯甲酸。
[0024]本专利技术所述半抗原2的制备方法为：
[0025]S1.将(4
‑
氯苯基)(吡啶
‑2‑
基)甲醇、氢化钠溶于溶剂无水乙腈中，搅拌反应后加入4
‑
溴甲基苯甲酸甲酯，继续搅拌反应后分离纯化；
[0026]S2.将步骤S1分离纯化的产物溶于溶解于溶剂甲醇中，然后加入氢氧化钠/碱性水溶液搅拌反应，反应结束后调酸即得半抗原2。
[0027]优选地，所述步骤S1中溶于溶剂无水乙腈的溶解液先在常温下搅拌反应30min，加
入4
‑
溴甲基苯甲酸甲酯后搅拌反应1h，然后升温至75℃继续反应2h。
[0028]优选地，所述步骤S2中氢氧化钠水溶液浓度为1mol/L。
[0029]优选地，所述步骤S2中搅拌反应为室温下搅拌反应3～5h。
[0030]优选地，所述步骤S2中调酸是利用1mol/L盐酸调节pH为6～7。
[0031]所述半抗原2在制备用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原中的应用也在本专利技术的保护范围之内。
[0032]本专利技术还提供了两种用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原，人工抗原1和人工抗原2，所述人工抗原1结构式如式(III)所示：
[0033][0034]所述人工抗原2结构式如式(IV)所示：
[0035][0036]所述人工抗原1的制备方法，由所述半抗原1(PEO)通过碳二亚胺法偶联载体蛋白得到。
[0037]所述人工抗原2的制备方法，由所述半抗原2(PB1)通过活泼酯法偶联载体蛋白得到。
[0038]优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)、钥孔血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)、乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)或者鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)任意一种或几种。
[0039]作为上述方法的一个具体实施方式，人工抗原1的制备方法，包括如下步骤：
[0040]S1.将载体蛋白溶解于PBS缓冲液(0.01moL/L，pH＝7.4)中，得到载体蛋白溶液；
[0041]S2.将半抗原1(PEO)溶解于N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)中，得到半抗原PEO溶液；
[0042]S3.将步骤S2的半抗原PEO溶液与步骤S1载体蛋白溶液混合，在加入1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)干粉，室温下避本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.两种检测马来酸氯苯那敏的半抗原，其特征在于，包括半抗原1和半抗原2，所述半抗原1的结构式如式(I)所示：所述半抗原2的结构式如式(II)所示：2.权利要求1所述半抗原在制备用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原中的应用。3.两种用于检测马来酸氯苯那敏的人工抗原，其特征在于，包括人工抗原1和人工抗原2，所述人工抗原1结构式如式(III)所示：所述人工抗原2结构式如式(IV)所示：
4.权利要求3所述人工抗原的制备方法，其特征在于，所述人工抗原1由所述半抗原1通过碳二亚胺法偶联载体蛋白得到；所述人工抗原2由所述半抗原2通过活泼酯法偶联载体蛋白得到。5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、乳铁蛋白或者鸡卵清白蛋白任意一种或几种。6.一种检测马来酸氯苯那敏的人工抗原组，其特征在于，以载体蛋白为钥孔血蓝蛋白的人工抗原1或人工抗原2或以载体蛋白为乳铁蛋白的人工抗原1作为免疫原；以载体蛋白为牛血清白蛋白或乳铁蛋白的人工抗原1作为包被原。7.一种检测马来酸氯苯那...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷红涛，林建浩，赖玮，王锦，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：