一种小牛血清中生物胺的检测方法技术

本发明专利技术属于医药检测领域，具体涉及一种小牛血清中生物胺的检测方法，所述方法包括采用高效液相色谱法，其中所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A超纯水，流动相B乙腈，梯度洗脱；所述生物胺为腐胺、尸胺。本发明专利技术能提供一种专属性高、检出限低、耐用性好，能够用于日常检验的小牛血清中生物胺的检测方法。用于日常检验的小牛血清中生物胺的检测方法。用于日常检验的小牛血清中生物胺的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种小牛血清中生物胺的检测方法


[0001]本专利技术属于医药检测领域，具体涉及一种小牛血清中生物胺的HPLC检测方法。

技术介绍

[0002]小牛血清去蛋白注射液是一种用于缺血性脑血管病的脑保护和痴呆症治疗的药物，具有抑制血小板聚集和血栓形成的作用，起到保护细胞在缺血缺氧环境下的生存能力的作用，研究表明该类药物能够在缺氧情况下刺激并增加机体对葡萄糖和氧的吸收与利用，改善代谢平衡。它能够刺激细胞呼吸活性，对缺氧环境下的诱导神经细胞有保护作用。
[0003]小牛血清去蛋白注射液为小牛血清经去蛋白、浓缩、超滤等工艺制得，主要含有小分子多肽、核苷酸、低聚糖多种生物活性成份，小牛血清是小牛血清去蛋白注射液以及其他制剂的主要生产原料，小牛血清质量也直接关系到最终小牛血清去蛋白注射液以及其他制剂的质量。
[0004]生物胺是一类含氮的脂肪类、芳香族或杂环类低分子量化合物，主要包括尸胺、腐胺等，在活体内含量很低，但机体死亡后，体内生物胺含量在一定时间范围内随时间延长呈规律性变化，小牛血清中生物胺的含量以直接用来判断小牛血清的新鲜程度，其含量也直接关系到小牛血清原料的产品质量。
[0005]任丽萍等人发表了“采用HPLC、CZE、LC/MS法对国内外小牛血及小牛血清去蛋白注射液的特征图谱分析”(《药物分析杂志》，2009年，第029卷第002期，第209
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211页)，所述方法包括对小牛血及小牛血清去蛋白提取物注射液进行了RP
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HPLC检测和特征图谱分析。该方法主要侧重于成品制剂中主要成分的鉴别对比分析，并未提及生物胺的含量检测方法及限度，若用于小牛血清中生物胺的限度检测具有检测时间过长，浪费检测成本的缺陷。
[0006]孙艳妮等人发表了“高效液相色谱法鉴别及测定中药吴茱萸中的生物胺”(《分析化学》，2014年，第42卷第002期，第273
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277页)，所述方法包括DAD
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HPLC法测定中药吴茱萸中的生物胺。但该方法若用于小牛血清中生物胺的检测样品前处理过程复杂，且其检测样品为固体，并没有证明液体样品也适用。
[0007]张艳林等人发表了“反相高效液相色谱法检测生物胺的法医学应用初探”(《中国法医学杂志》，2013年，第02期，第89
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91页)，所述方法包括采用反相高效液相色谱法(RP
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HPLC)检测大鼠肌肉组织中7种生物胺。但该方法用于小牛血清中生物胺的检测试验过程中有在60℃且置于黑暗中反应的条件过于苛刻，且不方便操作。
[0008]为了更为有效的检测小牛血清的质量情况，开发一种专属性高、检出限低、耐用性好的小牛血清中生物胺的检测方法是非常必要的。

技术实现思路

[0009]针对以上技术现状，本专利技术提供一种小牛血清中生物胺的检测方法，所述方法包括采用高效液相色谱仪对待测样品中的生物胺进行检测，其中所述高效液相色谱条件包括：
[0010]色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
[0011]流动相A为超纯水，流动相B乙腈；
[0012]进行梯度洗脱；
[0013]所述生物胺为腐胺、尸胺。
[0014]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的规格为5μm，4.6
×
250mm或5μm，4.6
×
300mm，优选5μm，4.6
×
250mm。
[0015]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括洗脱梯度如下：
[0016]时间(min)流动相B％060～70，优选60～65765～75，优选65～701470～80，优选70～752070～80，优选70～752785～95，优选85～90301003510035.160～70，优选60～654060～70，优选60～65
[0017]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括洗脱梯度如下：
[0018]时间(min)07142027303535.140流动相B％60657070851001006060
[0019]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待测样品进行检测时，柱温为27
‑
33℃、优选29
‑
31℃、最佳30℃，流速为每分钟1.0ml，进样量为30μl。
[0020]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待测样品进行检测时，检测器为荧光检测器或二极管阵列检测器；优选荧光检测器，激发波长350nm，发射波长520nm。
[0021]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括如下步骤：
[0022](1)内标溶液制备：取1，7
‑
二氨基庚烷加盐酸溶液溶解、定容、稀释；
[0023](2)生物胺系列标准曲线溶液制备：取生物胺标准品，加盐酸溶液溶解、定容、稀释制成生物胺标准品溶液，分别取生物胺标准品溶液混合、加盐酸溶液稀释作为混合生物胺标准储备液，精密量取混合生物胺标准储备液加盐酸溶液制成生物胺系列标准曲线溶液；
[0024](3)生物胺标准溶液预处理：精密量取步骤(2)得到的生物胺系列标准曲线溶液进行预处理；
[0025](4)测定法：取小牛血清，过滤，取滤液，离心过滤，取滤液，照步骤(3)生物胺标准溶液预处理方法处理；分别精密量取经处理后的生物胺系列标准溶液(浓度依次递增)及供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法计算。
[0026]本专利技术方法中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括以下步骤：
[0027](1)内标溶液制备：取1，7
‑
二氨基庚烷100mg，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至100ml，稀释制成1mg/ml的溶液，作为内标储备液；吸取2.0ml内标储备液置于100ml量瓶中，
加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液(20μg/ml)，于4℃冰箱储存；
[0028](2)生物胺系列标准曲线溶液制备：取腐胺、尸胺标准品100mg，各加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至100ml，稀释制成1mg/ml的腐胺标准品溶液和1mg/ml尸胺标准品溶液；取腐胺标准品溶液1ml，尸胺标准品溶液0.1ml，加0.1mol/L盐酸溶液定容至100ml，稀释制成含腐胺10μg/ml、尸胺1μg/ml的溶液，作为混合生物胺标准储备液，分别精密量取混合生物胺标准储备液0.1ml、0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml，分别置于10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度，作为生物胺系列标准曲线溶液；
[0029](3)生物胺系列标准曲线溶液预处理：精密量取步骤(2)得到的生物胺系列标准曲线溶液各500μl分别置适宜容器中，精密加入内标溶液25μl，再分别精密加入0.2mol/L碳酸钠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小牛血清中生物胺的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱法对待测样品中的生物胺进行检测，其中所述高效液相色谱条件包括：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相：流动相A为超纯水，流动相B为乙腈；进行梯度洗脱；所述生物胺为腐胺、尸胺。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，规格为5μm，4.6
×
250mm或5μm，4.6
×
300mm；优选规格为5μm，4.6
×
250mm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括洗脱梯度如下：时间(min)流动相B％060～70，优选60～65765～75，优选65～701470～80，优选70～752070～80，优选70～752785～95，优选85～90301003510035.160～70，优选60～654060～70，优选60～65。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括洗脱梯度如下：时间(min)07142027303535.140流动相B％60657070851001006060。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待测样品进行检测时，柱温为27
‑
33℃、优选29
‑
31℃、最佳30℃，流速为每分钟1.0ml，进样量为30μl。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待测样品进行检测时，检测器为荧光检测器或二极管阵列检测器；优选荧光检测器，激发波长350nm，发射波长520nm。7.根据权利要求1～6所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括如下步骤：(1)内标溶液制备：取1，7
‑
二氨基庚烷加盐酸溶液溶解、定容、稀释；(2)生物胺系列标准曲线溶液制备：取生物胺标准品，加盐酸溶液溶解、定容、稀释制成生物胺标准品溶液，分别取生物胺标准品溶液混合、加盐酸溶液稀释作为混合生物胺标准储备液，精密量取混合生物胺标准储备液加盐酸溶液制成生物胺系列标准曲线溶液；(3)生物胺标准溶液预处理：精密量取步骤(2)得到的生物胺系列标准曲线溶液进行预处理；(4)测定法：取小牛血清，过滤，取滤液，离心过滤，取滤液，照步骤(3)生物胺标准溶液
预处理方法处理；分别精密量取经处理后的生物胺系列标准溶液(浓度依次递增)及供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法计算。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤：(1)内标溶液制备：取1，7
‑
二氨基庚烷100mg，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至100ml，稀释制成1mg/ml的溶液，作为内标储备液；吸取2.0ml内标储备液置于100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液(20μg/ml)，于4℃冰箱储存；(2)生物胺系列标准曲线溶液制备：取腐胺、尸胺标准品100mg，各加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至100ml，稀...

【专利技术属性】
技术研发人员：白洋，刘翠秀，聂丽，杜宏明，孟祥熙，
申请(专利权)人：锦州奥鸿药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：