一种用于小牛血清动物源性成分种属检测的实时荧光PCR方法技术

本发明专利技术涉及生化药物的检测领域，具体提供一种小牛血清动物源性成分种属鉴别的实时荧光PCR方法，所述动物源性成分为牛源性成分、猪源性成分或羊源性成分，所述方法包括：(1)样品基因组DNA提取；(2)测定步骤(1)所得基因组DNA提取液浓度；(3)PCR反应：取步骤(1)所得基因组DNA提取液，用水稀释制成每1ml中约含基因组DNA 0.62～5μg、优选5μg的溶液，作为供试品模板DNA；使用牛源性成分实时荧光检测试剂盒、猪源性成分实时荧光检测试剂盒或羊源性成分实时荧光检测试剂盒进行实时荧光PCR检测。本发明专利技术方法专属性好、灵敏度高、操作简便、检测通量高。量高。量高。

【技术实现步骤摘要】
一种用于小牛血清动物源性成分种属检测的实时荧光PCR方法


[0001]本专利技术涉及生化药物检测领域，具体涉及一种用于小牛血清动物源性 成分种属检测的实时荧光PCR方法。

技术介绍

[0002]小牛血清去蛋白注射液是小牛血清经乙醇沉淀去蛋白、浓缩、多次超 滤除菌等工艺制得的无菌水溶液，为我国原创独家产品，其标准现收载于 国家药品标准WS1‑
(X
‑
398)
‑
2004Z
‑
2013，其起始原材料为小牛血清，是 在洁净环境下采集经齿龄判断不满18个月的小牛现场屠宰后并经物理机械 搅拌过滤去除纤维蛋白后新鲜血液，再经离心去除血浆后的血清速冻分装 制得。小牛血清去蛋白注射液的质量标准虽规定了的动物种属来源，但并 未提出具体的种属检测鉴别方法。由于鉴别小牛血清的种属来源，可以有 效提高小牛血清去蛋白注射液的产品质量，从而提高产品的一致性评价的 水平，因此，亟需一种针对小牛血清的牛、猪及羊源性成分的检测鉴别方 法。
[0003]聚合酶链式反应法(Polymerase Chain Re本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小牛血清动物源性成分种属鉴别的实时荧光PCR方法，其特征在于，所述动物源性成分为牛源性成分、猪源性成分或羊源性成分，所述方法包括如下步骤：(1)样品基因组DNA提取；(2)测定步骤(1)所得基因组DNA提取液浓度；(3)PCR反应：取步骤(1)所得基因组DNA提取液，用水稀释制成每1ml中约含基因组DNA 0.62～5μg、优选5μg的溶液，作为供试品模板DNA；使用牛源性成分实时荧光检测试剂盒、猪源性成分实时荧光检测试剂盒或羊源性成分实时荧光检测试剂盒进行实时荧光PCR检测；其中从牛、猪或羊源性成分实时荧光PCR检测试剂盒中取出相应的实时荧光PCR反应用试剂，融化后，2000r/min离心5s，向每个实时荧光PCR反应管中分装2X预混液、引物混合液、探针混合液、模板DNA、无菌纯化水共25ul，盖紧盖，离心5～10秒。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(1)进一步包括：使用Magnetic DNA Purification System for Food试剂盒进行提取。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(3)中牛源性成分实时荧光检测试剂盒为Takara Realtime PCR Bovine DNA Detection Kit。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(3)中猪源性成分实时荧光检测试剂盒为Takara Realtime PCR Porcine DNA Detection Kit。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法步骤(3)中羊源性成分实时荧光检测试剂盒为Takara Realtime PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜宏明，聂丽，靳美霞，陈珊，刘翠秀，
申请(专利权)人：锦州奥鸿药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：