本发明专利技术提供了一种检测2019-nCoV中orf1ab基因的RT-LAMP试剂盒及其专用引物和应用。本发明专利技术提供的用于检测2019-nCoV即新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物为引物组，其包括具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物，能够实现对2019-nCoV的特异性检测，本发明专利技术提供的RT-LAMP试剂盒的检测操作简单、特异性强、灵敏度高，可以快速且高效对2019-nCoV进行检测，可以用于基层医疗卫生单位和各疾病预防控制中心筛查和检测2019-nCoV。nCoV。
【技术实现步骤摘要】
检测2019-nCoV中orf1ab基因的RT-LAMP试剂盒及其专用引物和应用
[0001]本专利技术是关于生物
中病毒的分子生物学检测方法，具体涉及一种用于检测2019-nCoV(或称为“2019新型冠状病毒”或“新型冠状病毒SARS-CoV-2”)中orf1ab基因的RT-LAMP检测专用引物和检测试剂盒及相关应用。
技术介绍
[0002]2019年12月以来，新型冠状病毒SARS-CoV-2(或称为“2019-nCoV”或“2019新型冠状病毒”)感染的肺炎疫情已引起全球重视。针对SARS-CoV-2病毒的监测、检测相关技术已成为应对疫情的紧急重点研究方向之一。
[0003]冠状病毒的实验室诊断主要有血清学检测、核酸检测以及病毒分离。血清学检测灵敏度和特异性不如核酸检测高，在一些基层单位无法满足检测需要；病毒分离对环境要求高、周期长且影响因素多，不适宜在基层实验室开展；核酸检测主要有RT-PCR及Real-time RT-PCR，但需要特殊仪器，一些设备条件相对简陋的基层单位无法进行。
技术实现思路
[0004]本专利技术的一个目的在于提供一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供所述引物及试剂盒用于检测检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的相关应用。
[0007]一方面，本专利技术提供了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物组，其包括具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物。
[0008]另一方面，本专利技术还提供了一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒，其包含本专利技术所述的引物组。
[0009]本专利技术提供的用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物组，是RT-LAMP专用引物，能够实现高效、快速、高特异性地检测新型冠状病毒SARS-CoV-2，且操作简单，灵敏度高，结果鉴定简便。
[0010]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒中，还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
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Thermopol反应缓冲液、MgSO4、betaine、dNTP，Bst DNA聚合酶，WarmStart RTx反转录酶。
[0011]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒中，还包含阳性对照和/或阴性对照；优选地，所述阳性对照包含新型冠状病毒SARS-CoV-2基因组RNA，所述阴性对照为不含新型冠状病毒SARS-CoV-2基因组RNA的反应体系。
[0012]另一方面，本专利技术还提供了所述的引物组或所述的试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用。
[0013]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的引物组或试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用中，所述引物组是用于RT-LAMP反应。优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为2-8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物的终浓度独立地为24-36pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度为12-18pmol。更优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物的终浓度独立地为32pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度为16pmol。
[0014]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的引物组或试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用中，RT-LAMP反应体系还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
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Thermopol反应缓冲液2.5μl、100mM MgSO
4 1.5μl、5mMbetaine 4μl、10mM dNTP 3.5μl，Bst DNA聚合酶1μl，WarmStart RTx反转录酶0.5μl，ddH2O补至25μl。优选地，所述基础反应试剂在25μl反应体系中的使用量为：12.5μl。
[0015]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的引物组或试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用中，检测包括以下步骤：
[0016]S1：提取待测样品RNA；
[0017]S2：反应体系配制：25μl反应体系包含2μl待测样品RNA、10
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Thermopol反应缓冲液2.5μl、100mM MgSO
4 1.5μl、5mM betaine 4μl、10mM dNTP 3.5μl，Bst DNA聚合酶1μl，WarmStart RTx反转录酶0.5μl，引物加入量为：100μM FIP/BIP引物各0.8μl(终浓度32pmol)，100μM F3/B3所示引物各0.1μl(终浓度4pmol)，100μM LF/LB引物0.4μl(终浓度16pmol)，ddH2O补至25μl；
[0018]S3：将反应体系置62℃-63℃条件下恒温扩增反应45-60min，获得反应液；
[0019]S4：结果分析：使用钙黄绿素颜色指示剂或浊度仪对所述反应液进行检测分析。
[0020]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的引物组或试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用中，主要是应用于体外检测。所述样品可以是来自于人或动物的离体样本，也可以是来自自然环境中的空气取样、食物取样、水源取样、人或动物的日常用品或其他接触物表面取样、或人或动物的排泄物等环境样本。
[0021]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的引物组或试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用中，步骤S3中将反应体系置63℃条件下恒温扩增反应60min。
[0022]根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的引物组或试剂盒在检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用中，步骤S4中所述结果分析的具体方法为：
[0023]当使用钙黄绿素颜色指示剂进行检测时，在反应液中添加1μl的钙黄绿素颜色指示剂，呈现绿色表示待测样品中存在新型冠状病毒SARS-CoV-2(阳性)，呈现橙色表示待测样品中不存在新型冠状病毒SARS-CoV-2(阴性)；
[0024]当使用浊度仪进行检测时，浊度上升(>0.1)表示待测样品中存在新型冠状病毒SARS-CoV-2(阳性)，浊度无变化表示待测样品中不存在新型冠状病毒SARS-CoV-2(阴性)。
[0025]具体而本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物组，其包括具有SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物。2.一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的试剂盒，其包含权利要求1所述的引物组。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
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Thermopol反应缓冲液、MgSO4、betaine、dNTP，Bst DNA聚合酶，WarmStart RTx反转录酶。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其中还包含阳性对照和/或阴性对照；优选地，所述阳性对照包含新型冠状病毒SARS-CoV-2基因组RNA，所述阴性对照为不含新型冠状病毒SARS-CoV-2基因组RNA的反应体系。5.权利要求1所述的引物组或权利要求2-4任一项所述的试剂盒在体外检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其中，所述引物组是用于RT-LAMP反应；优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为2-8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物的终浓度独立地为24-36pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度为12-18pmol；更优选地，引物组在每25μl反应体系中的使用浓度为：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示序列的引物的终浓度独立地为8pmol，SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示序列的引物的终浓度独立地为32pmol，SEQ ID NO:6所示序列的引物的终浓度为16pmol。7.根据权利要求6所述的应用，其中，RT-LAMP反应体系还包含基础反应试剂，所述基础反应试剂包括：10
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Thermopo...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁静，闫超，崔晶花，李少丽，陈浪，薛冠华，赵汉青，冯燕玲，
申请(专利权)人：首都儿科研究所，
类型：发明
国别省市：
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