【技术实现步骤摘要】
实时荧光定量检测四种猪腹泻病毒的多重RT
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PCR引物探针组、试剂盒及其检测方法
[0001]本专利技术涉及实时荧光RT
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PCR检测
,尤其涉及一种实时荧光定量检测四种猪腹泻病毒的多重RT
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PCR引物探针组与试剂盒,以及试剂盒的检测方法。
技术介绍
[0002]病毒性腹泻是严重危害养猪业的一类疫病,其中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)是4种主要病原。由于PEDV、PDCoV、TGEV和PoRV所致疫病在临床症状上相似,而且经常存在混合感染、继发感染的问题,故增加了猪群的发病率和死亡率,严重危害养猪业的健康发展,进一步加强病原监测,做好疫苗免疫、饲养管理、生物安全等综合防控,是持续降低猪群病毒性腹泻的有效途径。
[0003]常规的病原学和血清学检测很难将这些疾病同时加以区别鉴定,同时又存在操作繁琐、费时费力、敏感度低等缺陷,尤其是多种病毒感染时,难以有效进行早期检测,容易产生误判错判。特别是当猪腹泻病毒混合感染的现象严重时,检测更需要一个准确有效的方法来区分不同病毒。普通RT
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PCR检测以其简单高效等优点被广泛使用,多重RT
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PCR在减少工作量的基础上,一次加样检测多种病毒能大大减小实验加样带来的污染。但现有的多重普通RT
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PCR检测灵敏度都在104~103copies左右,这种灵敏度不能满足低拷贝病毒量的早 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一组实时荧光定量检测四种猪腹泻病毒的多重RT
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PCR引物探针组,其特征在于:包括猪流行性腹泻病毒M基因的上游引物PEDV
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F、下游引物PEDV
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R和猪流行性腹泻病毒特异性荧光探针PEDV
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P;猪传染性胃肠炎病毒S基因的上游引物TGEV
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F、下游引物TGEV
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R和猪传染性胃肠炎病毒特异性荧光探针TGEV
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P;猪轮状病毒VP6基因的上游引物PoRV
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F、下游引物PoRV
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R和猪轮状病毒特异性荧光探针PoRV
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P;猪丁型冠状病毒M基因的上游引物PDCoV
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F、下游引物PDCoV
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R和猪丁型冠状病毒特异性荧光探针PDCoV
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P;所述PEDV
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F的序列如SEQ ID NO:1所示;所述PEDV
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R的序列如SEQ ID NO:2所示;所述PEDV
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P的序列如SEQ ID NO:3所示,其中5
’
端标记有FAM荧光报告基因,3
’
端标记有BHQ1荧光淬灭基因;所述TGEV
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F的序列如SEQ ID NO:4所示;所述TGEV
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R的序列如SEQ ID NO:5所示;所述TGEV
‑
P的序列如SEQ ID NO:6所示,其中5
’
端标记有HEX荧光报告基因,3
’
端标记有BHQ1荧光淬灭基因;所述PoRV
‑
F的序列如SEQ ID NO:7所示;所述PoRV
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R的序列如SEQ ID NO:8所示;所述PoRV
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P的序列PoRV
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P如SEQ ID NO:9所示,其中5
’
端标记有Cy5荧光报告基因,3
’
端标记有BHQ2荧光淬灭基因;所述PDCoV
‑
F的序列如SEQ ID NO:10所示;所述PDCoV
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R的序列如SEQ ID NO:11所示;所述PDCoV
‑
P的序列如SEQ ID NO:12所示,其中5
’
端标记有ROX荧光报告基因,3
’
端标记有BHQ2荧光淬灭基因。2.一种实时荧光定量检测四种猪腹泻病毒的多重RT
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PCR试剂盒,其特征在于:包括如权利要求1所述的引物探针组、荧光RT
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【专利技术属性】
技术研发人员:韩冬梅,王方方,元娜,安川叶,马腾壑,
申请(专利权)人:河北工程大学,
类型:发明
国别省市:
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