本发明专利技术公开了一种COVID-19核酸检测引物组及COVID-19等温扩增核酸检测试剂盒，涉及病毒核酸检测方法技术领域。本发明专利技术提供一种COVID-19的检测试剂盒，利用所述的COVID-19核酸检测引物组构建检测试剂盒，无需进行核酸提取，通过特异性的显色反应，在等温条件下，1小时内可准确、快速检测COVID-19病毒，方便直观地进行筛查COVID-19病毒感染情况，具有广阔的前景和较大的社会效益。前景和较大的社会效益。前景和较大的社会效益。
【技术实现步骤摘要】
一种COVID-19核酸检测引物组及COVID-19等温扩增核酸检测试剂盒
[0001]本专利技术涉及病毒核酸检测方法
，尤其涉及一种COVID-19核酸检测引物组，以及一种COVID-19等温扩增核酸检测试剂盒。
技术介绍
[0002]2019新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，2020年2 月11日被WHO世界卫生组织命名为COVID-19。COVID-19所引起的肺炎疾病已成为全球性的公共卫生问题，严重危害人类安全和健康。
[0003]实时荧光RT-PCR检测COVID-19病毒核酸已成为诊断COVID-19的标准诊断方法，但存在局限性，假阴率较高。因此一种具有免核酸提取，缩短检测时长，防止二次污染等优点的准确、可视化快速鉴定出大量感染者和无症状携带者的试剂盒，实现COVID-19大量感染者和无症状携带者的快速筛查，对防止病毒传播，保证患者得到及时治疗具有重大意义。
技术实现思路
[0004]为提高COVID-19病毒的准确、快速筛查，本专利技术的第一目的是提供 COVID-19病毒的N基因核酸检测引物组，实现对COVID-19的检测。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供一种COVID-19的检测试剂盒，对鼻咽拭子样本免核酸提取，利用N基因核酸检测引物组，实现可视化COVID-19快速检测。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。
[0007]本专利技术提供的四种COVID-19病毒的检测引物组，根据目前发布的新型冠状病毒的序列，(GenBank:MN908947.3)全长为29903bp，通过对其基因序列blast之后筛选出特异性序列设计环介导等温扩增引物，应用Primer Explorer 软件设计COVID-19病毒N端特异性引物组，利用逆转录等温扩增技术扩增靶基因的特定区域，从分子水平上实现快速检测，对仪器要求低，可通过肉眼观察检测结果，适合现场、基层的快速检测COVID-19病毒，方便筛查COVID-19 病毒感染者。
[0008]第一方面，本专利技术提供一种COVID-19核酸检测引物组，包括一对外引物 F3-1和B3-1、一对内引物FIP-1和BIP-1、以及一对环引物LF-1、LB-1；
[0009]所述F3-1、B3-1、FIP-1、BIP-1、LF-1、LB-1的核苷酸序列SEQ ID No如下：
[0010]F3-1：TGGACCCCAAAATCAGCG；
[0011]B3-1：GGAACGCCTTGTCCTCGA；
[0012]FIP-1：CCACTGCGTTCTCCATTCTGGT-AAATGCACCCCGCATTACG；
[0013]BIP-1：GCGATCAAAACAACGTCGGCC-TCCTTGCCATGTTGAGTGAG；
[0014]LF-1：CCAGTTGAATCTGAGGGTCCAC；
[0015]LB-1：TGCGTCTTGGTTCACCGC。
[0016]第二方面，本专利技术提供一种COVID-19核酸检测引物组，包括一对外引物 F3-2和
B3-2、一对内引物FIP-2和BIP-2、以及一对环引物LF-2、LB-2；
[0017]所述F3-2、B3-2、FIP-2、BIP-2、LF-2、LB-2的核苷酸序列SEQ ID No如下：
[0018]F3-2：TGGACCCCAAAATCAGCG；
[0019]B3-2：GCCTTGTCCTCGAGGGAAT；
[0020]FIP-2：CCACTGCGTTCTCCATTCTGGT-AATGCACCCCGCATTACG；
[0021]BIP-2：CAACGTCGGCCCCAAGGTTT-GGTCTTCCTTGCCATGTTGA；
[0022]LF-2：ACTGCCAGTTGAATCTGAGGG；
[0023]LB-2：GCGTCTTGGTTCACCGCT。
[0024]第三方面，本专利技术提供一种COVID-19核酸检测引物组，包括一对外引物 F3-3和B3-3、一对内引物FIP-3和BIP-3、以及一对环引物LF-3、LB-3；
[0025]所述F3-3、B3-3、FIP-3、BIP-3、LF-3、LB-3的核苷酸序列SEQ ID No如下：
[0026]F3-3：CACCCGCAATCCTGCTAAC；
[0027]B3-3：CCAGCCATTCTAGCAGGAGA；
[0028]FIP-3：TGCTCCCTTCTGCGTAGAAGC-GCTGCAATCGTGCTACAACT；
[0029]BIP-3：GGCGGCAGTCAAGCCTCTTC-CCTACTGCTGCCTGGAGTT；
[0030]LF-3：TGGCAATGTTGTTCCTTGAGG；
[0031]LB-3：ATCACGTAGTCGCAACAGTTC。
[0032]第四方面，本专利技术提供一种COVID-19核酸检测引物组，包括一对外引物 F3-4和B3-4、一对内引物FIP-4和BIP-4、以及一对环引物LF-4、LB-4；
[0033]所述F3-4、B3-4、FIP-4、BIP-4、LF-4、LB-4的核苷酸序列SEQ ID No如下：
[0034]F3-4：AGATCACATTGGCACCCG；
[0035]B3-4：CCATTGCCAGCCATTCTAGC；
[0036]FIP-4：TGCTCCCTTCTGCGTAGAAGC-CAATGCTGCAATCGTGCTAC；
[0037]BIP-4：GCGGCAGTCAAGCCTCTTCTC-CCTACTGCTGCCTGGAGT；
[0038]LF-4：TTGGCAATGTTGTTCCTTGAGG；
[0039]LB-4：CACGTAGTCGCAACAGTTCAA。
[0040]第五方面，本专利技术提供一种COVID-19等温扩增核酸检测试剂盒，包括反应预混液A、反应预混液B、检测管、阳性质控、阴性对照，主要包括以下物质： 1)Bst DNA大片段聚合酶；2)AMV逆转录酶；3)10X反应缓冲液；4)第一至第四任一方面所述的COVID-19的核酸检测引物组；5)dNTPs；6)硫酸镁； 7)甜菜碱；8)甲酰胺；9)DEPC水。
[0041]其进一步地技术方案为，所述反应预混液A包括Bst DNA大片段聚合酶 2-10U、AMV逆转录酶2-10U；
[0042]所述反应预混液B包括10X反应缓冲液、第一至第四任一方面所述的 COVID-19的核酸检测引物组、dNTPs 1-5mM、硫酸镁1-12mM、甜菜碱0.2-1.2mM、甲酰胺和DEPC水。
[0043]其进一步地技术方案为，所述甲酰胺选用体积分数50％以下的甲酰胺溶液。
[0044]优选地，所述甲酰胺选用体积分数2-30％的甲酰本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种COVID-19核酸检测引物组，其特征在于，包括一对外引物F3-1和B3-1、一对内引物FIP-1和BIP-1、以及一对环引物LF-1、LB-1；所述F3-1、B3-1、FIP-1、BIP-1、LF-1、LB-1的核苷酸序列SEQ ID No如下：F3-1：TGGACCCCAAAATCAGCG；B3-1：GGAACGCCTTGTCCTCGA；FIP-1：CCACTGCGTTCTCCATTCTGGT-AAATGCACCCCGCATTACG；BIP-1：GCGATCAAAACAACGTCGGCC-TCCTTGCCATGTTGAGTGAG；LF-1：CCAGTTGAATCTGAGGGTCCAC；LB-1：TGCGTCTTGGTTCACCGC。2.一种COVID-19核酸检测引物组，其特征在于，包括一对外引物F3-2和B3-2、一对内引物FIP-2和BIP-2、以及一对环引物LF-2、LB-2；所述F3-2、B3-2、FIP-2、BIP-2、LF-2、LB-2的核苷酸序列SEQ ID No如下：F3-2：TGGACCCCAAAATCAGCG；B3-2：GCCTTGTCCTCGAGGGAAT；FIP-2：CCACTGCGTTCTCCATTCTGGT-AATGCACCCCGCATTACG；BIP-2：CAACGTCGGCCCCAAGGTTT-GGTCTTCCTTGCCATGTTGA；LF-2：ACTGCCAGTTGAATCTGAGGG；LB-2：GCGTCTTGGTTCACCGCT。3.一种COVID-19核酸检测引物组，其特征在于，包括一对外引物F3-3和B3-3、一对内引物FIP-3和BIP-3、以及一对环引物LF-3、LB-3；所述F3-3、B3-3、FIP-3、BIP-3、LF-3、LB-3的核苷酸序列SEQ ID No如下：F3-3：CACCCGCAATCCTGCTAAC；B3-3：CCAGCCATTCTAGCAGGAGA；FIP-3：TGCTCCCTTCTGCGTAGAAGC-GCTGCAATCGTGCTACAACT；BIP-3：GGCGGCAGTCAAGCCTCTTC-CCTACTGCTGCCTGGAGTT；LF-3：TGGCAATGTTGTTCCTTGAGG；LB-3：ATCACGTAGTCGCAACAGTTC...
【专利技术属性】
技术研发人员：张雷，王小明，李杉，李俊敏，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。