一种检测抗PrelaminA/C-IgG抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测抗Prelamin A/C

【技术实现步骤摘要】
一种检测抗Prelamin A/C
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IgG抗体的试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种检测抗Prelamin A/C
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IgG抗体的试剂盒。本专利技术首次为免疫性肾病综合征提供了一种快速简便且高灵敏地定性或定量分析血清中抗Prelamin A/C
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IgG水平的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]免疫性肾病综合征的诊断和治疗是生物医学科学中的一项持续的挑战。肾病综合征是一类因肾小球滤过膜的通透性增加，导致血浆蛋白的滤出增多，从而引发大量的蛋白尿的一系列特征性的病理变化的临床综合症。在很大程度上所表现出的许多症状可以由多样的原因引发(包括先天遗传原因、肾功能损害与功能不全、泌尿生殖道的感染与疾病、药物滥用、食欲不振及营养不良、糖尿病、高血压、感染、损伤、免疫的缺陷和癌症)。
[0003]肾病综合征的早期诊断与预测尤为重要。原发性肾病综合征的年发病率因种族和国籍而异，大约在1.15～16.9/10,0000。微小病变性肾病综合征是最为常见的病理类型，这类病人绝大多数对激素治疗敏感，但是10％～20％左右的患儿会出现激素耐药，此类患儿在诊断后的5年内进展为终末期肾病的概率为8％～35％，在诊断后的15年内进展为终末期肾病的概率为24％～66％。
[0004]Ali等学者观察发现难治性微小病变的病人的肾脏被移植到受者体内后，肾脏功能转为正常并未出现蛋白尿，由此发生蛋白尿的可能主要是供者的内环境出现了某些方面的问题。除部分因基因缺陷而发病的患儿，大部分原发性肾病综合征的患儿在接受了激素和免疫抑制剂的治疗后，病情都发生了明显的好转，因此原发性肾病综合征的发生可能与患者的自身免疫状况密切相关。
[0005]抗原结合B细胞表面的BCR，而后通过Igα/Igβ转导到B细胞内，这是B细胞活化的第一信号。同时Th细胞上表达的CD154分子与B细胞表面的CD40分子的相互作用为B细胞的有效活化提供第二信号。这是B细胞增殖、生发中心反应以及最终分化为浆细胞的至关重要的信号。此类浆细胞能够合成并分泌针对上述抗原的特异抗体。近年来的研究发现B细胞功能异常在原发性肾病综合征中发挥了重要的作用。激素敏感型肾病综合征患者疾病复发时，其外周血中的B细胞的数量会显著增加，激素依赖型肾病综合征病人体内检测到大量的被活化的B细胞，而处于缓解期的激素敏感型肾病综合征患者体内B细胞的数量则明显下降。同时发现糖皮质激素不能有效的抑制激素敏感型或激素依赖型肾病综合征患者体内B细胞的活化。
[0006]环磷酰胺和利妥昔单抗能在激素依赖性的疾病患者体内通过清除B细胞而达到停药后诱导病人的长期缓解。利妥昔单抗可以与前B细胞和成熟B细胞表面的跨膜抗原CD20特异性地结合，通过激活补体，抗体依赖的细胞毒性作用，及诱导细胞凋亡的三种途径来清除B细胞，从而发挥免疫抑制作用。此外，记忆B细胞(特别是转换的记忆B细胞数量)可以预测利妥昔单抗治疗后的复发情况。虽然全球多个多中心的临床研究发现利妥昔单抗能成功的用于微小病变肾病综合征的治疗，但有研究发现利妥昔单抗在治疗激素依赖性肾病综合征
的过程中，其清除B细胞的作用能维持大约5个月左右，继后在6到7个月左右随着B细胞的数量回升，病情也会复发。由此可知原发性肾病综合征的患者体内有病理性B细胞的克隆，这些病理性B细胞的克隆的鉴别和精准清除显得尤为重要。
[0007]Prelamin A/C是一种较长的前体，在体内会经历一系列的翻译后修饰，从而形成成熟的Lamin A。Lamin A/C基因中的多种突变与不同的疾病相关联，包括肌肉营养不良，扩张型心肌病，早衰综合症等。
[0008]迄今为止，有报道表明Prelamin A/C与营养不良，早衰症等明显相关。但在泌尿系统中的研究未涉及。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的是提供一种检测抗Prelamin A/C
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IgG抗体的试剂盒，主要包括抗原蛋白Prelamin A/C、固相载体、标准品、阳性质控品、阴性质控品、酶标记或化学发光剂标记或生物素标记的抗人IgG、底物显色液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、抗原稀释液、洗涤液、终止液。
[0010]所述抗原蛋白Prelamin A/C的序列如SEQ ID NO.1所示：GLGHGSTSRGGPWVGTGLAAALAGLVGLATAAFGHVQRAEMLPKTSGTRATSLGRPEEEEDELAHRCSSFMAPPVTDLGELRRRPGDMKTKMELLILETQAQVCQALAQVDGGANFSVDRWERKEGGGGISCVLQDGCVFEKAGVSISVVHGNLSEEAAKQMRSRGKVLKTKDGKLPFCAMGVSSVIHPKNPHAPTIHFNYRYFEVEEADGHKQWWFGGGCDLTPTYLNQEDAVHFHRTLKEACDQHGPDLYPKFKKWCDDYFFIAHRGERRGIGGIFFDDLDSPSKEEVFRFVQSCARAVVPSYIPLVKKHCDDSFTPQEKLWQQLRRGRYVEFNLLYDRGTKFGLFTPGSRIESILMSLPLTARWEYMHSPSENSKEAEILEVLRHPRDWVR。
[0011]所述抗原蛋白Prelamin A/C固定于固相载体上，载体包括硅或玻璃表面、纸、聚苯乙烯、膜、金属、微流控通道、珠粒(磁珠)、柱色谱法介质、聚丙烯酰胺凝胶、生物芯片等等，优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜(NC膜)、酶标微孔板。
[0012]所述阳性质控品或标准品可以为重组人抗标签肽免疫球蛋白G或其片段、或是从病人血清中提取抗Prelamin A/C
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IgG抗体；健康体检者的血清为阴性质控品。
[0013]所述显色剂可以为吖啶酯、AMPPD、TMB和4
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MUP；所述抗原稀释液为1x PBS pH7.4、NaCl 163mM和1％TritonX
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100；所述样品稀释缓冲液为0.01M PBS pH7.4+10％新生牛血清；所述抗体稀释液为取1M D
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glucose和2％甘油加入含0.35％Tween2的0.01M PBS定容至100ml；所述洗涤液为：1x PBS pH7.4、NaCl 163mM、1％TritonX
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100和甘油10％；所述终止液为：2M盐酸。
[0014]所述的抗原蛋白Prelamin A/C上带有标签肽，所述的标签肽包括：c
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Myc标签、GST标签、Flag标签、His标签或生物素标签。
[0015]根据本专利技术，抗原Prelamin A/C对应的血清自身抗体的相对滴度定量采用统一的标签肽和抗标签肽抗体之间的特异性免疫反应和标准曲线的回归进行计算。
[0016]根据本专利技术，所述抗原蛋白Prelamin A/C可表达于真核或原核细胞，优选真核细胞，更优选为哺乳动物细胞，更优选人细胞例如HE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测抗Prelamin A/C
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IgG抗体的试剂盒，其特征在于，由抗原蛋白Prelamin A/C、固相载体、标准品、阳性质控品、阴性质控品、标记抗体、底物显色液、抗体稀释液、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、洗涤液、以及终止液组成。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗原蛋白Prelamin A/C的序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标记抗体选用酶标记、化学发光剂标记或生物素标记的抗人IgG。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品和阳性质控品为重组的人抗标签肽免疫球蛋白G或其片段，或是血清中提取的抗Prelamin A/C
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IgG抗体；阴性质控品选择健康体检者的血清。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体为硅或玻璃表面、纸、聚苯乙烯、膜、金属、微流控通道、珠粒或磁珠、柱色谱法介质、聚丙烯酰胺凝胶或生物芯片。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述固相载体选用硝酸纤维素膜、酶标微孔板。7.根据权利要求1所述的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，毛建华，韩秀翠，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：