检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9-IgG抗体的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9

【技术实现步骤摘要】
检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9
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IgG抗体的试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医学
，涉及检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9
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IgG抗体的试剂盒，是一种用于检测患者样本中的抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9
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IgG抗体的试剂盒。

技术介绍

[0002]自身免疫性疾病是由人体对正常存在于体内的物质和组织的异常免疫反应引起的疾病。可能仅限于某些器官，涉及不同位置的特定组织，也可能是全身性的。自身免疫性疾病的治疗通常涉及免疫抑制，即降低免疫反应的药物。
[0003]原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)的特征是患者水肿，尿液中蛋白质增加，血液中蛋白质减少，血液中脂肪增加(Roth KS,Amaker BH,Chan JC:Nephrotic syndrome:pathogenesis and management.Pediatr Rev(2002)23(7):237
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48)。90％以上儿童原发性肾病综合征的病理类型是以足细胞损伤为主要特征的微小病变或局灶节段性肾小球硬化。足细胞的炎症会增加对蛋白质的渗透性，导致分泌的蛋白质增加。当尿液中排泄的蛋白质量超过肝脏的补偿能力时，血液中检测到的蛋白质就更少了，特别是白蛋白，而白蛋白占了循环蛋白的大部分。随着血液中蛋白质的减少，血液中的渗透压会降低。由于组织中的渗透压保持不变，因此会导致水肿。肾上腺分泌醛固酮会加剧这种情况，它是根据循环血液的减少而分泌的，导致钠和水滞留。高脂血症被认为是肝脏活动增加的结果(Brinkkoetter PT,Ising C,Benzing T:The role of the podocyte in albumin filtration.Nat Rev Nephrol(2013)9(6):328
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36)。已有证据表明，儿童绝大多数激素敏感型肾病综合征和2/3的激素耐药型肾病综合征的发病与自身免疫功能紊乱有关(Li J,Wang L,Wan L,Lin T,Zhao W,Cui H,et al:Mutational spectrum and novel candidate genes in Chinese children with sporadic steroid
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resistant nephrotic syndrome.Pediatr Res(2019)85(6):816
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21)。我们在部分原发性肾病综合征患者中筛查到针对富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9蛋白(Serine/arginine
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rich splicing factor 9)的自身抗体。富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9是一种剪接因子参与选择性剪接中的剪接位点选择(Matsumoto E,Matsumoto Y,Inoue J,Yamamoto Y,Suzuki T.AMP
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activated protein kinase regulates beta
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catenin protein synthesis by phosphorylating serine/arginine
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rich splicing factor 9.Biochem Biophys Res Commun(2021)534:347
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52)。
[0004]但目前富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9和富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9的自身抗体在泌尿系统疾病，特别是在肾病综合征中未有报道。另外现有的技术中，没有涉及基于靶点富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9或其自身抗体作为一种血清学标志物在自身免疫性肾病综合征中的应用。通过检测血清抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9
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IgG抗体鉴别出自身免疫性肾病综合征的研究是空白的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9
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IgG抗体的试剂盒，是一种基于靶点富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9及其相应自身抗体的检测试剂盒。所述试剂盒可通过与抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9(特别根据序列识别号SEQ ID NO.1所示)的抗原抗体反应对来自组织(肾活检组织)或体液(特别是血液、血浆、血清)中的自身抗体进行检测。
[0006]本专利技术涉及用于检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9自身抗体的检测试剂盒，该试剂盒包含抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9、固相载体、标记抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、终止液、标准品、阳性质控品、阴性质控品。
[0007]根据本专利技术，所述抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9可表达于细菌如大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞中。
[0008]根据本专利技术，抗原蛋白可以是融合蛋白，使用具有某些生物学或物理功能的标签，这些标签的存在有利于抗原蛋白纯化，固定，沉淀或鉴定本专利技术多肽的其他序列基序或多肽。在一个更优选的实施方案中，标签是能够特异性结合配体的序列或结构域，例如，选自：GST标签、c
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Myc标签、His标签、Flag标签或生物素标签。
[0009]根据本专利技术，所述抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9固定于固相载体上，优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜、磁珠、酶标微孔板。
[0010]本专利技术一个实施方案中，所述标准品和阳性质控品，标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽IgG或其片段、或从病人血清中提取抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9抗体作为阳性质控品和标准品，健康体检者血清为阴性质控品。
[0011]根据本专利技术，所述抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9经Ni柱亲和层析、分子筛层析、离子交换层析、疏水柱纯化。
[0012]本文中的样品是待检的体液或组织的样品。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰和胸腔积液。此外，在分离或纯化程序之后，例如将全血分离成血清或血浆成分，将更容易分析某些测试样品。因此，在本专利技术的优选实施方案中，样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品和尿液样品或任何上述样品的提取物。优选地，样品是血液样品，更优选血清样品或血浆样品。
[0013]所述检测试剂盒还包括底物显色剂、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、洗涤液和终止液。所述底物显色剂为TMB、BCIP、AMPPD、4
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MUP；所述抗原稀释液为pH7.41x PBS、163mM NaCL、1％TritonX
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100；所述样品稀释缓冲液为pH7.4含有10％BSA的0.01M PBS缓冲液；所述抗体稀释液为取1M Dglucose(19.82g)、2％甘油(2ml)加入含0.2％Tween20的0.01M PBS至100ml；所述洗涤液为：1x PBS pH7.4、NaCL 163mM、1％TritonX
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测抗富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9
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IgG抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9、固相载体、标记抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、终止液、标准品、阳性质控品、阴性质控品组成。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9抗原蛋白序列如SEQ ID:1所示。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标记抗体为酶标记、化学发光剂标记或生物素标记的二抗。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗原蛋白富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9上带有标签肽，所述的标签肽包括：GST标签、c
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Myc标签、His标签、Flag标签或生物素标签。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述富含丝氨酸/精氨酸剪接因子9抗原蛋白经镍柱亲和层析、分子筛层析、凝胶过滤层析、离子交换柱层析、疏水柱纯化。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽IgG或其片段，或从血清中提取抗富含丝氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶青，毛建华，周希，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：