ScAAV-DJ/8装载的精炼凝血因子IX载体的制备及用途制造技术

本发明专利技术公开了ScAAV‑DJ/8装载的精炼凝血因子IX载体的制备方法，具体步骤为：设计精炼凝血因子IX基因(F9)装载入ScAAV‑DJ/8，并在F9基因前加人脂蛋白肝控制区和人抗胰蛋白酶α1基因启动子，及SV40小T抗原内含子形成能稳定高表达具有FIX活性的ScAAV‑DJ/8‑LP1‑hFIXco载体；所述ScAAV载体的提供，ScAAV‑LP1‑hFIXco的合成均由有关商业公司完成；使用AAV‑DJ/8Helper Free Bicistronic expression system kit试剂盒完成ScAAV‑DJ/8‑LP1‑hFIXco的组装，扩增。本发明专利技术首次合成ScAAV‑DJ/8装载的精炼F IX能成功诱导肝细胞合成F IX，并在细胞层面检测到F IX的稳定表达，在F IX敲除小鼠的实验中能显著改善其凝血功能。有望进一步应用于血友病乙基因治疗中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物载体制备，尤其涉及scaav-dj/8装载的精炼凝血因子ix载体的制备及用途。

技术介绍

1、血友病乙是x联锁隐性遗传性单基因病，为f9基因突变造成血浆中ix因子(factorix，f ix)缺乏或功能障碍，导致凝血功能异常。占全部血友病的15％-20％，发病率大约为1/25000。目前预防性使用重组f ix(1-2周/次)的终身替代为治疗血友病乙的主要方法，但因用药过于频繁，给患者特别是儿童患者的依从性带来一定的影响，且价格昂贵。另一方面，使用重组f ix治疗后，机体尚可能产生抗fix抗体或称抑制物，约占病人总数的1–5％，且在有抗f ix抑制物的患者中再次使用重组f ix经常会发生过敏反应，因此限制了重组fix的应用。

2、使用aav系列的基因治疗有彻底治愈血友病乙的可能。重组腺相关病毒载体(recombinant adeno-associated vector，raav)的构建通常是将rep和cap基因的剔除和将感兴趣的基因插入itrs序列之间。产生的载体质粒随后与包装质粒(能表达aav rep和cap基因的质粒)一起共本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.ScAAV-DJ8装载的精炼凝血因子IX载体，其特征在于，所述载体为双链腺相关病毒载体ScAAV-DJ/8-LP1-hFIXco载体，已于2023年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉)，其保藏编号为CCTCC NO：V2023112。

2.根据权利要求1所述的ScAAV-DJ/8装载的精炼凝血因子IX载体的制备方法，其特征在于，具体步骤为：设计精炼凝血因子IX基因(F9)装载入ScAAV-DJ/8，并在F9基因前加人脂蛋白肝控制区和人抗胰蛋白酶α1基因启动子，及SV40小T抗原内含子形成能稳定高表达具有FIX活性的ScAAV-DJ/8-LP1-hFIXco载体...

【技术特征摘要】

1.scaav-dj8装载的精炼凝血因子ix载体，其特征在于，所述载体为双链腺相关病毒载体scaav-dj/8-lp1-hfixco载体，已于2023年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉)，其保藏编号为cctcc no：v2023112。

2.根据权利要求1所述的scaav-dj/8装载的精炼凝血因子ix载体的制备方法，其特征在于，具体步骤为：设计精炼凝血因子ix基因(f9)装载入scaav-dj/8，并在f9基因前加人脂蛋白肝控制区和人抗胰蛋白酶α1基因启动子，及sv40小t抗原内含子形成能稳定高表达具有fix活性的scaav-dj/8-lp1-hfixco载体。

3.根据权利要求2所述的scaav-dj/8装载的精炼凝血因子ix载体的制备方法，其特征在于，所述scaav载体的提供，scaav-lp1-hfixco...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤永民，卜梓斌，徐晓军，徐卫群，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：