本发明专利技术公开了一种提高人体内高分子量脂联素检测能力的胶乳免疫比浊试剂盒及其制备方法，其中试剂R2中胶乳颗粒包被的抗人腊联素单克隆抗体可特异性地与单独的高分子量(HMW)腊联素反应，能够选择性地定量检测HMW ADPN；并通过改善试剂R1及R2的配方提高抗体与HMW ADPN结合能力，提升了试剂的检测精确性以及稳定性；最终提供用于分析HMw ADPN的高精度、方便通用的试剂。便通用的试剂。便通用的试剂。
【技术实现步骤摘要】
一种提高高分子量脂联素检测能力的胶乳免疫比浊试剂盒
[0001]本专利技术属于医学检验领域，具体涉及一种提高人体内高分子量脂联素检测能力的胶乳免疫比浊试剂盒及其制备方法。
技术介绍
[0002]脂联素(Adiponectin/ADPN)是脂肪细胞分泌的一种激素蛋白，是迄今为止唯一的一种在脂肪容量增大时分泌反而减少的白色脂肪组织蛋白产物。脂联素在体内的生理作用主要是增加胰岛素敏感性，促进糖脂代谢。此外，脂联素还具有重要的血管保护作用，还可以激活内皮细胞一氧化氮合酶，改善血管的舒张功能。正常情况下，人血循环中含有丰富的脂联素，发挥较强的血管保护作用。在肥胖患者血中脂联素浓度明显下降，导致胰岛素敏感性下降、血压升高、动脉粥样硬化等。
[0003]人类脂联素单体由244个氨基酸组成，在人体内以0.5～30μg/ml的浓度出现在循环血液中，约占人体血浆蛋白0.01％。脂联素以多种亚型存在于人体内，包括三聚体(低分子量LMW)、六聚体(中分子量MMW)、多聚体(高分子量HMW)。对各种多聚体的结构研究表明，三聚体形成一个球状和棒状结构，六聚体由两个三聚体以平行头对头的方式排列组成，而多聚体分为平面扇形构型及花束形构型两种。临床分析表明，高分子量脂联素(HMW 脂联素)是最具生物活性的形式，靶向多种组织和细胞类型，并调节重要的代谢过程。研究证明，体重下降后，HMW脂联素显著增加，此外HMW脂联素与胰岛素增敏作用关系也最为密切。另外，脂联素三聚体的体内半衰期约32min，多聚体则相对稳定，约为83min，因此提高对人体内HMW脂联素检测能力，不仅有助于提高对脂联素含量检测的稳定性，也有助于提升对相关疾病的辅助诊断能力。
[0004]目前，脂联素常用的检测方法有：放射免疫法(RIA)、酶联免疫法(ELISA)、胶乳颗粒增强免疫比浊法、化学发光法等，检测方法主要集中在对总脂联素水平进行检测。选择性对HMW脂联素的检测采用的方法包括对脂联素进行预处理例如过滤层析或蛋白酶处理。前者就是根据分子量大小利用亲和层析或凝胶过滤层析将其分离，并对每个峰进行检测，该方法各个环节都极为繁琐、耗时也长。蛋白酶处理就是利用酶消化特定的脂联素分子并检测剩余的HMW脂联素，但是酶的预处理时间大约需要几十分钟，还需要根据靶抗原的类型选择最佳消化酶，而且如果预处理超过最佳时间，目标分子本身有可能被共存的蛋白酶消化，因此必须严格控制培养时间。综之，上述两种方法，均不是医学检验领域通用的方法。
[0005]后来进一步发展了一种无需预处理的酶联免疫法及胶乳免疫比浊法，前者就是利用酶免疫抗体进行HMW脂联素的检测。胶乳增强免疫比浊法的基本原理是利用一定粒径胶乳颗粒的表面交联单克隆或多克隆抗与抗原结合后，来检测抗原的浓度。目前，对于识别HMW 脂联素的常规抗体，不仅同时识别HMW脂联素，而且还同时识别其它多聚体(LMW和 MMW)。研究已发现脂联素受体的3种形式，即AdipoR1、AdipoR2及T
‑
黏钙蛋白；AdipoR1 对脂联素球形结构域有高亲和性，但对全长脂联素的亲和性较低；AdipoR2对脂联素球形结构域和全长脂联素均有中度亲合力，但是二者均对HMW没有特异性；T
‑
黏钙蛋白则是脂联素六聚
体和高分子质量多聚体的受体，不与脂联素球状结构域、脂联素三聚体结合。
[0006]目前关于脂联素的检测，已公布的专利技术专利主要集中在两方面，一是对总脂联素水平进行检测，二是对HMW脂联素进行选择性检测。目前市场上已经有进行应用的脂联素检测试剂盒，对总脂联素水平的检测专利主要从胶乳颗粒、单克隆抗体等方面提高其检测性能，具体专利部分列举如下。
[0007]专利公开号CN102721819A(专利技术名称：纳米胶乳增强免疫比浊法测定脂联素的试剂盒；申请人：深圳市安之酶生物技术有限公司)，采用胶乳免疫比浊技术平台；专利技术点为胶乳颗粒是由苯乙烯和丙烯酸聚合而成的共聚物，表面存在羧基基团，平均粒径范围为80～100nm，且脂联素抗原校准品溶液中包被抗人脂联素多克隆抗体的胶乳颗粒的浓度为0.01～10％，脂联素抗原校准品溶液包含脂联素和稳定剂；技术特点为专利技术的纳米胶乳增强免疫比浊法检测脂联素的试剂盒具有稳定准确、省时省力的优点，与传统免疫比浊试剂相比灵敏度增加10倍以上。
[0008]专利公开号CN102721819A(专利技术名称：一种脂联素的竞争抑制性酶联免疫检测试剂盒及方法；申请人：广州瑞博奥生物科技有限公司)，采用酶联免疫技术平台；专利技术点为述脂联素多肽为氨基酸序列如NH2
‑
CTGWMAGIPGHPGHNG(SEQ ID NO：1)所示的多肽，标准脂联素多肽是由该脂联素多肽与KLH钥蓝蛋白螯合而成；技术特点为通过采用能竞争结合抗脂联素抗体配体的脂联素多肽，充分结合抗原抗体反应的特异性和酶反应的快速及敏感性，建立和发展起的一种可以精确测定脂联素的酶免疫检测方法。
[0009]专利公开号CN108570104A(专利技术名称：重组脂联素抗原、抗体及脂联素纳米胶乳增强免疫比浊法试剂盒；申请人：广东英诺生物科技有限公司)，采用胶乳免疫比浊技术平台；专利技术点为重组人全长脂联素蛋白采用的表达载体骨架为pRSETA，脂联素抗原由高表达重组人全长脂联素蛋白的细胞株获得，采用哺乳动物表达系统生产的脂联素作为校准品；技术特点为特异性抗体能识别人体循环中各种形式的脂联素，以及高糖基化后的脂联素，能准确反映真实脂联素水平，特异性及灵敏度高，对糖尿病前期及2型糖尿病的预测效果好。
[0010]专利公开号CN101968492A(专利技术名称：检测脂联素的颗粒增强免疫透射比浊试剂盒及其制备方法；申请人：厦门大学附属中山医院)，采用胶乳免疫比浊技术平台；专利技术点为胶乳悬液瓶包括盒体、应用液瓶和包被抗人脂联素单克隆抗体，采用抗人脂联素单克隆抗体包被醛基微球；技术特点为通过颗粒增强的方式，放大了抗原抗体反应，弥补了普通透射比浊法灵敏度不高的不足，灵敏度可高达0.2μg/ml。
[0011]专利公开号CN104237522A(专利技术名称：脂联素含量检测试剂盒及其制备方法；申请人：武汉生之源生物科技有限公司)，采用胶乳免疫比浊技术平台；专利技术点为包被脂联素抗体的胶乳颗粒粒径为80～200nm，采用化学交联法制备致敏胶乳颗粒，脂联素抗体与胶乳颗粒结合紧密，不易从胶乳颗粒上脱落；技术特点为提高了抗体结合的稳定性，检测的灵敏度及线性范围要明显优于其它粒径的胶乳颗粒。
[0012]专利公开号CN111337692A(专利技术名称：一种脂联素测定试剂及制备方法；申请人：江西乐成生物医疗有限公司)，采用胶乳免疫比浊技术平台；专利技术点及技术特点为第一试剂和第二试剂采用不同的磷酸盐，提高了脂联素测定试剂的灵敏度，海藻糖、丙三醇和表面活性剂提高了脂联素测定试剂的稳定性。
[0013]专利公开号CN102517256A(专利技术名称：人脂联素ELISA试剂盒；申请人：陶凌)，采用
固相酶联免疫吸附技术平台；专利技术点为采用杂交瘤细胞株XA187No.1和杂本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种提高高分子量脂联素检测能力的胶乳免疫比浊试剂盒，包含试剂1、试剂2、校准品、低值质控品和高值质控品，其各组分及浓度范围为：试剂1：pH为7.2～7.8试剂2：pH为7.0～7.8校准品：低值/高值质控品：。2.如权利要求1所述试剂盒，其特征在于试剂1和试剂2的容积比为4∶1。3.如权利要求2所述试剂盒，其特征在于所述抗人脂联素单克隆抗体是由如下方法制备：由GS115毕赤酵母表达，并用琼脂糖凝胶层析，纯化获得人脂联素，进而免疫家兔，获取抗人脂联素单克隆抗体。其纯化筛选依据为：层析分离在118～127U质量的蛋白。4.如权利要求2或3所述试剂盒，其特征在于所述试剂2中抗人脂联素单克隆抗体包被的胶乳颗粒平均粒径为30～80nm。5.如权利要求4所述试剂盒，其特征在于所述试剂2中抗人脂联素单克隆抗体包被的胶乳颗粒是聚苯乙烯制成的胶乳颗粒。...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪，于洪远，邵燕，
申请(专利权)人：北京万泰德瑞诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。