【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测，具体涉及一种封闭剂及其在免疫检测中的应用，尤其是用于制备胶乳免疫比浊检测试剂，比如该封闭剂用于制备rbp或者bmg这2种胶乳免疫比浊快速检测试剂盒。
技术介绍
1、在涉及固相介质的免疫反应中，无论是免疫层析或是板式elisa，胶乳免疫比浊或是磁微粒化学发光，或是更新的微流控技术，待测临床样本成分的复杂性可能会影响整个免疫检测反应发生非特异性反应，从而产生假阳性或假阴性的检测结果。为了阻止待测样本中非代表性的蛋白质或生物分子与固相介质之间发生非特异性结合，一般使用不会参与反应的物质对固相介质表面进行封闭，这种物质被称为封闭剂。常用bsa、酪蛋白等动物来源的封闭剂，属于氨基酸、多肽或蛋白质类物质，由于成分复杂、批间差难以控制、且临床样本与封闭剂存在或多或少非特异结合反应从而导致假阳性，这类封闭剂存在信噪比低、交叉反应及不稳定等问题，比如不同厂家和不同批次的bsa差异巨大，使用前需要通过检测筛选到合适批次bsa，该类检测筛选工作不仅操作繁琐而且耗费时间较长。已知胶乳偶联封闭中，主要封闭剂包括蛋白封闭、荧光有机物封闭(fica)等。常见封闭剂的这些问题给所应用的免疫反应尤其是本申请验证的胶乳免疫比浊中胶乳颗粒偶联的制备中带来了很多不便，导致胶乳试剂灵敏度低、重复性差、稳定性低等问题，从而不能满足急诊和临床病人对胶乳免疫比浊用于poct及时诊断的需要。因此，急需一种组分简单、结构稳定、通用性强的封闭剂，既能够对抗体特异性反应具有保护性，又能够满足不干扰抗体与抗原结合、且使用操作简便。
2、胶乳免疫比浊检测方
3、视黄醇结合蛋白(retinol binding protcin，rbp)为血液中视黄醇(维生素a)的转运蛋白，rbp可辅助用于高血压及糖尿病早期肾病进行临床检测的参考指标。β2微球蛋白（β2-microglobulin，bmg）是一种内源性低分子量血清蛋白质，bmg可辅助用于肾功能、肾移植成活、糖尿病肾病、重金属镉、汞中毒以及某些恶性肿瘤进行早期临床检测的参考指标。rbp和bmg常用胶乳免疫比浊法进行检测，然而目前对rbp和bmg胶乳免疫比浊检测都存在由于非特异性反应带来的检测线性范围窄、灵敏度低等问题。
技术实现思路
1、本专利技术为了克服上述问题，提供一种组分简单、性能稳定的通用封闭剂及由该封闭剂制备的封闭液，可以用于胶乳免疫比浊检测方法，尤其是应用于制备胶乳试剂中试剂r2的制备。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术通过以下技术方案实现：
3、第一方面，本专利技术提供了一种封闭剂，该封闭剂的化学名称为羟基-聚乙二醇-氨基oh-peg-nh2，是一种高分子聚合物，分子量为4000～6000，该封闭剂oh-peg-nh2可以应用在免疫检测中固相介质表面的封闭，该封闭剂oh-peg-nh2用于封闭时的使用浓度为0.05%～1%。
4、第二方面，本专利技术提供了一种封闭液，包括封闭剂oh-peg-nh2和封闭缓冲液，将封闭剂oh-peg-nh2溶解于封闭缓冲液中制备而成，该封闭缓冲液为5～45mmol/l pb缓冲液、5～45mmol/lpbs缓冲液、5～45mmol/l mes缓冲液；可以应用的免疫检测为胶乳免疫比浊检测，该固相介质为胶乳颗粒；该封闭液的ph值为6.0～9.0；当目标抗体和胶乳颗粒偶联完成后使用该封闭液进行封闭反应，该封闭反应的条件为置于25～30℃反应1h～3h。
5、第三方面，本专利技术提供了一种试剂r2的制备方法，应用于胶乳免疫比浊检测方法，试剂r2的制备步骤如下：s1：活化缓冲液中，用活化剂使10～100g/l胶乳颗粒的表面羧基被修饰，得到羧基被活化剂修饰的胶乳颗粒溶液；s2：加入50～100mg/l目标抗体，反应1～3h完成偶联，得抗体-胶乳颗粒偶联体系，离心弃上清，保留沉淀；s3：加入封闭液完成封闭，得抗体-胶乳颗粒混合体系，离心弃上清，保留沉淀；s4：加入pbs缓冲液后超声1～5min，均匀分散抗体-胶乳颗粒混合体系；s5：取保存缓冲液，依次添加稳定剂、防腐剂，混合均匀后制备得到保存剂；s6：将s4超声后的抗体-胶乳颗粒混合体系置于s5制备得到的保存剂中，得到含有目标抗体包被的胶乳颗粒的混合溶液，即为胶乳免疫比浊检测中的试剂r2，分装后4℃保存待用。
6、根据本专利技术的一个优选实施例，所述制备方法中，步骤s1中，该活化剂为5% edc和/或0.2%～1.0%nhs，将该活化剂和胶乳颗粒共同置于活化缓冲液中完成活化，活化缓冲液为5～15mmol/l缓冲液；步骤s2中，目标抗体的浓度为50～100mg/l；步骤s5中，保存缓冲液为100～150mmol/l pipes-naoh缓冲液、或者90～150mmol/l hepes-naoh缓冲液，稳定剂包括0.1～0.6%酪蛋白、50～120mmol/l nacl、30～50%甘油和10%～15%乳糖；防腐剂为0.05～0.1%的二氯乙酰胺溶液。
7、根据本专利技术的一个优选实施例，所述制备方法中，步骤s1中，该胶乳颗粒的粒径为100～200nm；该活化缓冲液为pb缓冲液、或者pbs缓冲液、或者mes缓冲液。
8、第四方面，本专利技术提供了一种试剂r2，根据试剂r2的制备方法制备而成。
9、第五方面，本专利技术提供了一种试剂盒，采用胶乳免疫比浊检测方法，该试剂盒包括试剂r1和试剂r2，试剂r1和试剂r2的容积比可以为2：1～4：1；其中试剂r1包含缓冲液、表面活性剂、稳定剂、防腐剂，该试剂r1的ph值被ph调节剂调至7.0～7.8；试剂r2包含目标抗体偶联的胶乳颗粒、封闭液和保存剂，该试剂r2的ph值被ph调节剂调至7.2～8.0，其中，保存剂包括保存缓冲液、稳定剂、防腐剂；稳定剂包括酪蛋白、nacl、甘油和乳糖，甘油和乳糖作为悬浮剂。
10、根据本专利技术的一个优选实施例，所述试剂盒，在试剂r1中，缓冲液为100～150mmol/l pipes-naoh缓冲液、或者100～150 hepes-naoh缓冲液，表面活性剂为0.01～0.05% emulgen a90，稳定剂包含0.1～0.6% bsa和100～120mmol/l nacl，防腐剂为0.01～0.05% pc300溶液；在试剂r2中，在目标抗体偶联的胶乳颗粒中，目标抗体为视黄醇结合蛋白rbp或者β2微球蛋白bmg。
11、根据本专利技术的一个优选实施例，所述试剂盒，目标抗体为视黄醇结合蛋白rbp时，在试剂r1中，该缓冲液为100～150mmol/l pipes-naoh缓冲本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种封闭剂，其特征在于，化学名称为羟基-聚乙二醇-氨基OH-PEG-NH2，是一种高分子聚合物，分子量为4000～6000，所述封闭剂OH-PEG-NH2可以应用在免疫检测中固相介质表面的封闭，所述封闭剂OH-PEG-NH2用于封闭时的使用浓度为0.05%～1%。
2.一种封闭液，包括权利要求1所述的封闭剂和封闭缓冲液，将权利要求1所述的封闭剂溶解于封闭缓冲液中制备而成，所述封闭缓冲液为5～45mmol/L PB缓冲液、5～45mmol/LPBS缓冲液、5～45mmol/L MES缓冲液；可以应用的所述免疫检测为胶乳免疫比浊检测，所述固相介质为胶乳颗粒；
3.一种试剂R2的制备方法，应用于胶乳免疫比浊检测方法，试剂R2的制备步骤如下：
4.根据权利要求3所述的试剂R2的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求3所述的试剂R2的制备方法，其特征在于，
6.一种试剂R2，其特征在于，根据权利要求3-5任一项中所述的制备方法制备而成。
7.一种试剂盒，采用胶乳免疫比浊检测方法，所述试剂盒包括试剂R1和权利要求6
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，
10.权利要求1所述的封闭剂，权利要求2所述的封闭液，权利要求3-5任一项中所述的试剂R2的制备方法，权利要求6所述的试剂R2，权利要求7-8任一项中所述的试剂盒，在制备胶乳试剂相关产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种封闭剂，其特征在于，化学名称为羟基-聚乙二醇-氨基oh-peg-nh2，是一种高分子聚合物，分子量为4000～6000，所述封闭剂oh-peg-nh2可以应用在免疫检测中固相介质表面的封闭，所述封闭剂oh-peg-nh2用于封闭时的使用浓度为0.05%～1%。
2.一种封闭液，包括权利要求1所述的封闭剂和封闭缓冲液，将权利要求1所述的封闭剂溶解于封闭缓冲液中制备而成，所述封闭缓冲液为5～45mmol/l pb缓冲液、5～45mmol/lpbs缓冲液、5～45mmol/l mes缓冲液；可以应用的所述免疫检测为胶乳免疫比浊检测，所述固相介质为胶乳颗粒；
3.一种试剂r2的制备方法，应用于胶乳免疫比浊检测方法，试剂r2的制备步骤如下：
4.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪，李正，司大雷，
申请(专利权)人：北京万泰德瑞诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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