【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外诊断试剂，具体涉及补体c1q参考物质的制备方法及其在校准品、质控品及c1q检测试剂盒等体外诊断试剂中的应用。
技术介绍
1、补体c1q是构成补体c1的一个重要成分，成人补体c1q的正常值范围为50～130mg/l，c1q分子量为390000，由6个相同的亚单位组成对称的六聚体，是补体经典途径的始动分子，当两个以上的c1q与免疫复合物中的igm或igg的fc段结合后，c1q构型发生改变，导致c1r和c1s的相继活化，启动补体经典激活途径，此外，补体c1q在固有免疫和特异性免疫之间发挥了主要的连接作用，调节各种免疫细胞，不但参与启动机体防御病原体的第一道防线，同时介导单核巨噬细胞对凋亡细胞和循环免疫复合物等的清除，在维持自身免疫耐受及调控炎性反应等方面发挥重要作用。研究显示，补体c1q亦可通过调节巨噬细胞炎性两极分化的过程，参与动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)的发生、发展，因此，推测血清补体c1q水平的变化与动脉粥样硬化等高风险自身免疫性疾病、心脑血管等疾病的发生、发展存在相关性，测定补体c1q有助于辅助医生对炎性反应进行相关诊断和评估。
2、参考物质是在体外诊断试剂定量检验中广泛应用的一类标准物质，其定值后可作为参考量值，用于评估试剂检测结果的偏倚，而测定人血清中补体c1q的方法多样，实际最常用单向免疫扩散法检测补体c1q，但用于评估任何一种补体c1q试剂的检测结果，都需要依赖参考物质，本专利技术所述补体c1q常见参考物质的应用包括但不限于校准品、质控品，比如用于定量检测时对检测项
3、补体c1q的高值参考物质稀有，不易获得，通常采用分段式分别提供2个至多个不同浓度水平，一般情况下低浓度水平的赋值范围在140～200mg/l内，高浓度水平的赋值范围在240～300mg/l内，如果能够提供140～300mg/l范围内连续赋值，就可以覆盖c1q正常值和c1q异常高值的检测范围。补体c1q参考物质的制备通常采用重组表达或者牛血清样本为原料，或是由于宿主不同重组表达的补体c1q特异性差，或是由于牛源样本制备的补体c1q的批间特异性差，目前尚无法克服。补体c1q参考物质还存在稳定性差的问题，通常会考虑将补体c1q通过制成冻干粉剂来保持其参考物质的稳定性，但是也会因此导致使用前需要增加复溶操作步骤，并因而存在批间差不一致的风险。此外，不同厂家自行生产的参考物质赋值范围常常不统一，也不利于市场化。目前，急需一种稳定的液态的补体c1q参考物质，还需要赋值准确、稳定性高，以及赋值范围能够一次覆盖正常测试范围及异常测试范围，从而解决现有补体c1q参考物质差异大，冻干粉剂使用不方便，液体2～8℃保存不稳定等问题。
技术实现思路
1、本专利技术为了克服上述不足，提供了一种更稳定、更准确、使用更简便且能一次性提供更广赋值范围的c1q参考物质，及其制备方法和应用。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术主要涉及补体c1q参考物质及其在普通免疫比浊法试剂中的配套应用，通过以下技术方案实现：
3、第一方面，本专利技术提供了一种补体c1q参考物质，为人血清来源的液体制品，其中，该补体c1q参考物质采用体系稀释液制备成补体c1q一系列不同的目标浓度；其中，体系稀释液包括保护剂、防腐剂、10~100mmol/l 缓冲液、0.1～2g/l氯化钠和水，目标浓度的赋值范围为60～560mg/l。
4、根据本专利技术的一个优选实施例，所述补体c1q参考物质中，保护剂为乳糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、甘油、牛血清蛋白、甘氨酸或者精氨酸中的任意三种；防腐剂为硫酸庆大霉素、krovin-500、proclin30或者苯甲酸钠中的任意一种；缓冲液为pbs、hepes、tris、mes或者甘氨酸缓冲液中的任意一种。
5、根据本专利技术的一个优选实施例，所述补体c1q参考物质中，保护剂包括5~10g/l牛血清白蛋白、10~20g/l乳糖和15%~30%甘油；防腐剂为0.4~0.8g/l硫酸庆大霉素；缓冲液为pbs、hepes、tris中的任意一种，缓冲液浓度为50mmol/l 。
6、优选地，所述补体c1q参考物质置于2～8℃保存的有效期为15个月。
7、优选地，所述保护剂包括5g/l牛血清白蛋白、20g/l乳糖和30%甘油。
8、第二方面，本专利技术提供了一种补体c1q参考物质的制备方法，能够制备获得上述补体c1q参考物质，包括以下步骤：s1：取人血清样本于2-8℃静置2～8小时后，离心后弃沉淀，上清溶液过滤得滤液；s2：滤液先用缓冲液稀释，再加入peg沉淀至少2小时后离心，得沉淀物；s3：沉淀物用缓冲液复溶，得复溶液；s4：缓慢加入冰醋酸调复溶液的ph值至4.6～4.8，于2-8℃静置2-10小时后，再离心弃沉淀，得上清溶液；s5：上清溶液中加入饱和硫酸铵溶液沉淀至少2小时后，离心得二次沉淀物；s6：用缓冲液复溶二次沉淀物，得补体c1q的高浓度溶液；s7：取高浓度溶液装入透析袋中，置于缓冲液中透析至电导为10～20ms/cm，得补体c1q的高值粗品；s8：取高值粗品置于-15℃以下完全冷冻后，再于室温待完全融化后，使用低温高速离心机进行离心，取上清液，得补体c1q的高值半成品；s9：高值半成品中分别加入不同体积的体系稀释液，得补体c1q不同目标浓度的系列参考物质。
9、根据本专利技术的一个优选实施例，所述补体c1q参考物质的制备方法中，步骤s1中，人血清样本为新鲜的血清样本，或者是冷藏时间不超过两周的血清样本；步骤s2中，缓冲液为10mmol/l pbs；步骤s3中，缓冲液为10mmol/l pb；步骤s2和s3中，用量均为步骤s1中人血清样本体积的2～3倍；步骤s4中，冰醋酸的浓度为10%～50%；步骤s6中，缓冲液为10～15mmol/l pbs；步骤s7中，缓冲液为10～15mmol/l pbs。
10、优选地，步骤s2中，缓冲液为10mmol/l pbs，制备组分包括1.44g/l na2hpo4、0.24g/l kh2po4、9g/l nacl、0.2g/l kcl、hcl调试ph值至7.4，纯水定容至1l。
11、所述优选地，步骤s3中，缓冲液为10mmol/l pb的制备组分包括3.007g/l na2hpo4、0.2208g/l nah2po4、溶剂为纯化水。
12、优选地，所述补体c1q参考物质的制备方法，在步骤s6中，缓冲液的体积用量为步骤s1中人血清样本体积的1/6～1/10。
13、优选地，所述补体c1q参考物质的制备方法，在步骤s7中，透析过程中透析至少进行8小时，透析过程中的缓冲液至少进行1次换液。
14、根据本专利技术的一个优选实施例，所述补体c1q参考物质的制备方法中，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种补体C1q参考物质，为人血清来源的液体制品，其中，所述补体C1q参考物质采用体系稀释液制备成补体C1q一系列不同的目标浓度；其中，所述体系稀释液包括保护剂、防腐剂、40～60mmol/L缓冲液、0.1～2g/L氯化钠和水，所述目标浓度的赋值范围为60～560mg/L。
2.根据权利要求1所述的补体C1q参考物质，其特征在于，所述保护剂为乳糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、甘油、牛血清蛋白、甘氨酸或者精氨酸中的任意三种；所述防腐剂为硫酸庆大霉素、Krovin-500、Proclin30或者苯甲酸钠中的任意一种；所述缓冲液为PBS、HEPES、Tris、MES或者甘氨酸缓冲液中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的补体C1q参考物质，其特征在于，所述保护剂包括牛血清白蛋白5~10g/L、乳糖10~20g/L和15%~30%甘油；所述防腐剂为硫酸庆大霉素0.4～0.8g/L；所述缓冲液为PBS、HEPES、Tris中的任意一种，所述缓冲液浓度为50mmol/L 。
4.一种补体C1q参考物质的制备方法，能够制备获得权利要求1-3任一项中所述的补体C
5.根据权利要求4所述的补体C1q参考物质的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述人血清样本为新鲜的血清样本，或者是冷藏时间不超过两周的血清样本；步骤S2中，所述缓冲液为10mmol/L PBS；步骤S3中，所述缓冲液为10mmol/L PB；步骤S2和S3中，用量均为步骤S1中所述人血清样本体积的2～3倍；步骤S4中，所述冰醋酸的浓度为10%～50%；步骤S6中，所述缓冲液为10～15mmol/L PBS；步骤S7中，所述缓冲液为10～15mmol/L PBS。
6.根据权利要求4所述的补体C1q参考物质的制备方法，其特征在于，步骤S2中，用于沉淀的所述PEG为PEG6000、PEG8000、PEG20000中的任意一种，所述PEG的用量终浓度为8%～15%；步骤S5中，用于沉淀的所述饱和硫酸铵溶液的浓度为2～3moL/L、所述饱和硫酸铵溶液的用量与步骤S1中所述人血清样本的体积相同。
7.根据权利要求4所述的补体C1q参考物质的制备方法，其特征在于，步骤S1、步骤S2、步骤S4中和步骤S5中，所述离心的条件为0～8℃的低温；步骤S8中，所述离心的条件为0～8℃的低温和10000~30000rpm高转速。
8.根据权利要求4所述的补体C1q参考物质的制备方法，其特征在于：步骤S9中，所述体系稀释液包括保护剂、防腐剂、10~100mmol/L 缓冲液、0.1～2g/L氯化钠和水；其中，所述保护剂为乳糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、甘油、牛血清蛋白、甘氨酸或者精氨酸中的任意3种；所述防腐剂为硫酸庆大霉素、Krovin-500、Proclin30或者苯甲酸钠中的任意一种；所述缓冲液为PBS、HEPES、Tris、MES或者甘氨酸缓冲液中的任意一种。
9.根据权利要求8所述的补体C1q参考物质的制备方法，其特征在于：体系稀释液中所述保护剂包括牛血清白蛋白5~10g/L、乳糖10~20g/L和15%~30%甘油；所述防腐剂为硫酸庆大霉素0.4g/L；所述缓冲液为PBS、HEPES、Tris中的任意一种，所述缓冲液浓度为50mmol/L。
10.一种应用，包括权利要求1-3任一项中所述的补体C1q参考物质，或者权利要求4-9任一项中所述的补体C1q参考物质的制备方法在制备补体C1q相关的体外诊断试剂盒中的应用，所述体外诊断试剂盒包括但不限于校准品、质控品、标准品或者检测试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种补体c1q参考物质，为人血清来源的液体制品，其中，所述补体c1q参考物质采用体系稀释液制备成补体c1q一系列不同的目标浓度；其中，所述体系稀释液包括保护剂、防腐剂、40～60mmol/l缓冲液、0.1～2g/l氯化钠和水，所述目标浓度的赋值范围为60～560mg/l。
2.根据权利要求1所述的补体c1q参考物质，其特征在于，所述保护剂为乳糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、甘油、牛血清蛋白、甘氨酸或者精氨酸中的任意三种；所述防腐剂为硫酸庆大霉素、krovin-500、proclin30或者苯甲酸钠中的任意一种；所述缓冲液为pbs、hepes、tris、mes或者甘氨酸缓冲液中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的补体c1q参考物质，其特征在于，所述保护剂包括牛血清白蛋白5~10g/l、乳糖10~20g/l和15%~30%甘油；所述防腐剂为硫酸庆大霉素0.4～0.8g/l；所述缓冲液为pbs、hepes、tris中的任意一种，所述缓冲液浓度为50mmol/l 。
4.一种补体c1q参考物质的制备方法，能够制备获得权利要求1-3任一项中所述的补体c1q参考物质，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的补体c1q参考物质的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述人血清样本为新鲜的血清样本，或者是冷藏时间不超过两周的血清样本；步骤s2中，所述缓冲液为10mmol/l pbs；步骤s3中，所述缓冲液为10mmol/l pb；步骤s2和s3中，用量均为步骤s1中所述人血清样本体积的2～3倍；步骤s4中，所述冰醋酸的浓度为10%～50%；步骤s6中，所述缓冲液为10～15mmol/l pbs；步骤s7中，所述缓冲液为10～15mmol/l pbs。
6.根据权利要求4所述的补体...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪，王爱军，王瑞杰，
申请(专利权)人：北京万泰德瑞诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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