【技术实现步骤摘要】
用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条及其制备方法
[0001]本专利技术涉及体外免疫诊断检测工具
,具体属于用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条及其制备方法。
技术介绍
[0002]犬圆环病毒(Canine Circovirus,CanineCV)是一种单链环状无囊膜DNA病毒,属于新发现的哺乳动物圆环病毒,2012年首次在美国犬血清中发现。犬圆环病毒属于圆环病毒科,圆环病毒属还包括猪圆环病毒2型,鸭圆环病毒、鹅圆环病毒、金丝雀圆环病毒、禽白血病病毒等。犬圆环病毒基因组大小约为2063nt,比圆环病毒2的基因多276~277nt。犬圆环病毒有两个开放阅读框,ORF1开放阅读框相对比较保守一些,ORF2变异程度相对比较大。ORF1开放阅读框有 912个碱基,编码犬圆环病毒的复制酶,与该病毒的复制有关;第二个开放阅读框ORF2主要编码衣壳蛋白。目前,犬圆环病毒在意大利、德国和中国大陆均有检出,宿主除了家犬外还有狼、狐、獾等犬科野生动物。
[0003]临床上,CanineCV感染与犬血管炎、出血性腹泻和胃肠炎有关。病毒主要存在于肠道内部,有的还存在于肝脏、脾脏和淋巴等组织内部。犬圆环病毒的临床症状与圆环2型引起的猪的皮炎与肾病综合征在临床症状和病理变化上都非常相似。根据犬圆环病毒的基因序列设计出了特异性引物进行PCR方法检测,在患有腹泻的犬中犬圆环病毒的检出率达到20.1%,健康组的犬中,犬圆环病毒的检出率只有7.3%。这样检测侧CanineCV抗原不但相当耗时、耗费精力,成本高,并且检出率还很低,十分不 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条,包括PVC底板,其特征在于:还包括依次粘贴在PVC底板上的吸水垫、硝酸纤维素膜、标记垫和样品垫;所述样品垫设置在所述PVC底板的一端上;所述样品垫设有样品滴入区;所述样品垫的一端搭设在所述标记垫上,所述标记垫上喷有CanineCV抗体
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胶体金复合物,远离所述样品垫的所述标记垫一端搭设在硝酸纤维素膜上;所述硝酸纤维素膜固定连接在PVC底板上,所述硝酸纤维素膜上包被有质控线C、检测线T,所述质控线C与检测线T相互平行,并垂直于试纸条延长方向设置;所述质控线C包被有CanineCV重组抗原;所述检测线T包被有CanineCV抗体;远离所述样品垫的所述硝酸纤维素膜一端搭设在吸水纸下。2.根据权利要求1所述的用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条,其特性在于:所述标记垫上的CanineCV抗体
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胶体金复合物喷量为2~4μl/cm,胶体金标记CanineCV抗体的比例为每毫升标记量为5~10μg,CanineCV抗体
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胶体金复合物浓缩倍数为20~30倍,即每20~30ml胶体金浓缩至1ml,喷量为2~4μl/cm。3.根据权利要求1所述的用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条,其特性在于:所述硝酸纤维素膜上的检测线T包被的CanineCV抗体的浓度为0.5~1.0mg/ml,划线量为1.0~2.0μl/cm;所述的质控线C包被的CanineCV抗原的浓度为1.0~2.0mg/ml,划线量为1.0~2.0μl/cm。4.根据权利要求1所述的用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条,其特性在于:所述胶体金粒径为20
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50nm。5.权利要求1
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4任一项所述的用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条的制备方法,其特性在于:包括下列步骤:(1)胶体金溶液的制备;(2)标记垫的制备,包括CanineCV抗体
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胶体金复合物的制备,取1ml的胶体金溶液,加入2~10μl的0.1mol/l K2CO3溶液混匀,加入5~10μg CanineCV抗体混匀15min,再加入50~100μl的10%BSA溶液进行封闭10min,置于冷冻离心机内4℃,10000rpm离心30min,弃上清液,沉淀用胶体金复溶液复溶至30~50μl,2~8℃储存备用;(3)包被质控线C、检测线T;(4)样品垫的预处理;(5)切割与组装;得到成品。6.根据权利要求5所述的用于检测犬圆环病毒抗原的免疫层析试剂条的制备方法,其特性在于:所述的胶体金复溶液含有pH8.2的0.02mo...
【专利技术属性】
技术研发人员:昝洁,陈翠翠,梁焕坤,钟树海,赖宏锐,郭桂铃,李来庆,宁波,
申请(专利权)人:广州优迪生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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