一种用于检测过敏原成分的多核苷酸对、探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术涉及食品检测技术领域，具体涉及一种用于检测过敏原成分的多核苷酸对、探针组合及其应用。本发明专利技术设计得到用于检测19种过敏原成分的探针组合，具体包括开心果、巴西坚果、芹菜、麸质、夏威夷果、鸡蛋、芝麻、蟹、牛奶、榛子、虾、大豆、鱼、花生、葵花籽、核桃、腰果、杏仁、芥末。采用该探针组合，通过多重连接依赖性探针扩增技术可以通过一次反应，准确检测食品中19种过敏原成分，在检测过敏原成分的领域具有重要意义。要意义。要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测过敏原成分的多核苷酸对、探针组合及其应用


[0001]本专利技术涉及食品检测
，具体涉及一种用于检测过敏原成分的多核苷酸对、探针组合及其应用。

技术介绍

[0002]食品过敏被认为是五个最重要的公共健康问题之一。随着临床医学诊断技术的发展，食品过敏原引发的危及生命的综合征数量正在持续增加，食品过敏问题已成为食品安全领域的突出问题。过敏症患者摄入的过敏原可引发多种免疫反应，包括荨麻疹、瘙痒、水肿、支气管痉挛、鼻炎、呕吐腹泻，甚至呼吸困难、过敏性休克等致命症状。一般情况下，过敏原的暴露量为1
‑
100ppm时会引发过敏反应，但有时微量摄入也可致敏。目前，针对食物过敏尚无有效的治疗手段，唯一可行的办法是做好预防，即避免食入可能导致过敏的食物成分，而消费者远离过敏原的途径就是通过食品标签明示信息选择不含过敏原的食物。
[0003]对于种类复杂且高度加工的食品，一方面其配料本身含有过敏原成分，另一方面存在微量的无意带入，包括食品生产线带入甚至是运输和存储过程混入等。这就导致同一食品中可能同时存在多种过敏原成分，且某些过敏原含量甚微，这种情况给检测分析带来难度。因此，开发具高特异性、高灵敏度、多重的食品中过敏原筛查、确证方法，对生产活动前中后各个环节过敏原引入情况实施提供可靠监测手段，并指导企业做好过敏原信息标签标注显得尤为重要。
[0004]近年来，基于DNA的过敏原检测手段发展迅速，逐渐成为以致敏蛋白为检测靶标的免疫分析方法的替代选择，特别是针对加工工艺复杂、原料和基质多样的食品，DNA分子在加工食品中表现出比蛋白质更高的稳定性，且不会被食品基质所掩盖，因而发挥出更大的过敏原成分分析优势。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种用于检测过敏原成分的多核苷酸对、探针组合及其应用，通过提供的多组多核苷酸对可以实现一次反应检测食品中的19种过敏原。
[0006]为了实现以上目的，本专利技术提供一种用于检测过敏原成分的多核苷酸对，包括：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38及SEQ ID NO:39和SEQ ID NO:40。
[0007]进一步的，本专利技术提供包括所述多核苷酸对的探针组合。
[0008]进一步的，本专利技术提供包括所述多核苷酸对或所述探针组合的试剂盒。
[0009]进一步的，本专利技术提供所述多核苷酸对和所述探针组合在制备用于检测食品中过敏原成分的试剂中的应用。
[0010]进一步的，本专利技术提供所述多核苷酸对和所述探针组合和所述试剂盒在检测食品中过敏原成分中的应用。
[0011]进一步的，所述食品包括：开心果、巴西坚果、芹菜、麸质、夏威夷果、鸡蛋、芝麻、蟹、牛奶、榛子、虾、大豆、鱼、花生、葵花籽、核桃、腰果、杏仁和芥末中的至少一种。
[0012]本专利技术具有如下有益效果：
[0013]本专利技术设计得到特异性检测19种过敏原成分的多核苷酸对及其对应的探针组合，包括14种植物过敏原和5种动物过敏原。该多核苷酸对及其对应的探针组合可以通过一次反应，对19种过敏原成分进行检测，并且可以随机组合。此外，本专利技术提供的探针组合中探针之间互不影响，检测结果准确。本专利技术设计得到的探针组合检测限低，灵敏度高，在检测过敏原的领域具有重要意义。
附图说明
[0014]图1为本专利技术设计的探针组合对19种动植物样品混合物的检测结果。
[0015]图2为本专利技术设计的探针组合对14种植物样品混合物的检测结果。
[0016]图3为本专利技术设计的探针组合对5种动物样品混合物的检测结果。
[0017]图4为本专利技术设计的探针组合针对混合样品一的检测结果。
[0018]图5为本专利技术设计的探针组合针对混合样品二的检测结果。
[0019]图6为本专利技术设计的探针组合针对混合样品三的检测结果。
[0020]图7为本专利技术设计的探针组合针对混合样品四的检测结果。
[0021]图8为本专利技术设计的探针组合针对混合样品五的检测结果。
[0022]图9为本专利技术设计的探针组合针对混合样品六的检测结果。
[0023]图10为本专利技术设计的探针组合针对混合样品七的检测结果。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限定本专利技术的范围。
[0025]实施例1
[0026]1.探针设计
[0027]本专利技术设计了用于检测19种过敏原成分的探针序列，具体如下：
[0028]本专利技术以植物源性物种选取高拷贝数的内转录间隔区ITS(internal transcribed sequence)序列、动物源性物种选取编码细胞色素C氧化酶的线粒体基因或16SrDNA作为探针设计靶标序列。从NCBI搜索每个过敏原物种10条左右靶基因序列，Sequencer/Geneious软件进行序列比对，剔除一致性较差的序列，导出比对后序列；再将不同物种序列进行比对，找出差异序列，并以此为目标序列设计探针。设计序列时控制每个物种探针长度(75
‑
200bp)、GC含量(30
‑
70％)、Tm(68
‑
80℃)值等，不同物种探针的总长度差异至少1个bp；软件验证参数，并将其分为LHS\RHS两段多核苷酸。设计好的探针两端再加上通用引物序列，用于PCR反应中扩增探针。鉴于物种之间存在类似的同源基因，并要保证不同
基因检测的实验条件相似，所以相比于针对单一物种多个基因的MLPA探针，本专利技术中探针设计难度更大，涉及物种范围更广，一次检测品种更多。
[0029]本专利技术最终得到如下多核苷酸对(顺序对应序列表中SEQ ID NO:1
‑
40)：
[0030]针对开心果:
[0031]SEQ ID NO:1：5
’‑
CGTGT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多核苷酸对，其特征在于，选自如下核苷酸对中的一种或多种：SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12；SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14；SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16；SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18；SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22；SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28；SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:30；SEQ ID NO:31和SEQ ID NO:32；SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:34；SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36；SEQ ID NO:37和SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鸣秋，张莉，范志勇，刘艳，李诗瑶，何名扬，朱必婷，张涛，
申请(专利权)人：湖北省食品质量安全监督检验研究院，
类型：发明
国别省市：