一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱降解杂质的方法技术

本发明专利技术公开了一种HPLC法检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法。所述的强降解杂质为碱破坏降解杂质1和碱破坏降解杂质2。所述检测方法包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备；（2）供试品溶液的制备；（3）色谱条件；其中色谱条件中流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇=75~90：25~10；流动相B为0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇=20~40：80~60；检测波长260~280nm；柱温30~45℃；流速：0.95～1.05mL/min；色谱柱：C8、捕集小柱；本发明专利技术可以有效对碱破坏降解杂质与已知杂质进行分离检测，且专属性强、灵敏度高。可以有效提高己酮可可碱注射液质量标准体系。体系。

【技术实现步骤摘要】
一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱降解杂质的方法


[0001]本专利技术属于药品质量控制领域，具体涉及一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法

技术介绍

[0002]己酮可可碱注射液(Pentoxifylline Injection)是一种甲基黄嘌呤衍生物。它通过降低血液粘度改善血液流动。主要用于脑部血循环障碍如暂时性脑缺血发作、中风后遗症、脑缺血引起的脑功能障碍；外周血循环障碍性疾病如慢性栓塞性脉管炎等，其结构式如附图1所示。
[0003]己酮可可碱注射液，在碱性条件下易水解产生降解杂质1和降解杂质2，具体结构式如附图2和附图3所示。
[0004]对于样品稳定性过程中可能会有碱破坏降解杂质1和降解杂质2产生，原料和制剂都需要进行控制，对提高己酮可可碱质量控制具有重要现实意义。
[0005]在现有技术中，未有方法能够同时控制碱破坏降解杂质1与碱破坏降解杂质2且其他杂质不干扰碱破坏降解杂质1与碱破坏降解杂质2的检测。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于解决以上问题，一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱降解杂质的方法，能够同时检测己酮可可碱注射液中杂质1和杂质2的含量，且该法专属性强、定位准确、灵敏度高、方法稳定的特点。
[0007]本专利技术目的技术方案：己酮可可碱注射液降解杂质分离检测采用高效液相色谱法。包括如下步骤：
[0008](1)供试品溶液的制备：
[0009]取己酮可可碱注射液置于20ml量瓶中，加入1ml 0.1～1mol氢氧化钠溶液，60～90℃水浴2～6小时，再加入盐酸溶液中和，加溶剂稀释定容，配制每1mL中含1mg的己酮可可碱溶液，作为供试品溶液，其中，所述的溶剂为水或50％甲醇水；优选为1mol氢氧化钠溶液，80℃水浴4小时，水为溶剂。
[0010](2)对照品溶液的制备：
[0011]取碱破坏杂质1、碱破坏杂质2对照品，用溶剂稀释定容，配制每1mL中含2ug的溶液，作为对照品溶液，其中，所述的溶剂水或50％甲醇水。
[0012](3)检测：
[0013]取供试品溶液与对照品溶液各20μL分别注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱；其中，所述的高效液相色谱仪的色谱条件如下：
[0014]流动相：流动相A与流动相B的混合物，流动相A是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇＝70～90：23～10，流动相B是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇＝20～40：80～60；优选为流动相A是
0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇＝90：10，流动相B是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇＝25：75。
[0015]流速：0.95～1.05mL/min；优选为流速：1mL/min。
[0016]柱温：30～50℃；优选为40℃。
[0017]色谱柱：C8柱、捕集小柱；优选为C8柱Welch Ultimate，XB
‑
C8，4.6mm
×
250mm，5μm；捕集小柱为色谱先生Ghost
‑
sniper column，4.6mm
×
50mm。
[0018]检测波长：260～280nm；优选为检测波长：272nm。
[0019]所述的梯度洗脱条件具体如下：
[0020]0～6min流动相B的体积百分比为0％；6.01～50min流动相B的体积百分比由6.01min时的0％均匀增加至50min时的90％；50.01～55min流动相B的体积百分比维持90％；55.01～56min流动相B的体积百分比由55.01min时的90％降低为56min时的0％；56.01～65min流动相B的体积百分比维持0％。
[0021]本专利技术具有的积极效果：本专利技术采用高效液相色谱法，能够同时控制碱破坏降解杂质1与碱破坏降解杂质2且其他杂质不干扰碱破坏降解杂质1与碱破坏降解杂质2的检测，该方法专属性强、灵敏度高、方法操作简便，可以有效提高己酮可可碱的质量控制体系，从而保障质量的安全性和有效性。
附图说明
[0022]附图1为己酮可可碱结构式。
[0023]附图2为碱破坏杂质1结构式。
[0024]附图3为碱破坏杂质2结构式。
[0025]附图4为实验例空白溶液的色谱图.
[0026]附图5为实验例系统适用性溶液的色谱图。
[0027]附图6为实施例供试品溶液的色谱图。
[0028]附图7为实施例对照品溶液的色谱图。
具体实施方式
[0029]实验例1
[0030]通过高效液相色谱法对检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质分离检测。
[0031]一、试剂
[0032]磷酸二氢钠、甲醇、水。
[0033]二、试药
[0034]己酮可可碱对照品、降解杂质1对照品、降解杂质2对照品、可可碱对照品、茶碱对照品、咖啡因对照品。
[0035]三、仪器
[0036]高效液相色谱仪：岛津，LC
‑
2030。
[0037]Welch Ultimate XB
‑
C8，4.6mm
×
250mm，5μm。
[0038]四、色谱条件。
[0039]流动相：流动相A是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇＝90：10，流动相B是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇＝25：75。
[0040]流速：1ml/min。
[0041]柱温：40℃。
[0042]检测波长：272nm。
[0043]进样量：20μl。
[0044]五：实验步骤。
[0045]空白溶剂：水。
[0046]称取可可碱、茶碱、咖啡因、己酮可可碱、降解杂质1、降解杂质2对照品各约2mg至50ml量瓶中，水溶解并稀释至刻度，作为储备液1，精密移取1ml储备液1至20ml量瓶中，用水稀释定容至刻度，作为系统适用性溶液。
[0047]分别精密量取上述空白溶剂及系统适应性溶液各20ul，按上述色谱条件分析，记录色谱图，结果见附图4和5。
[0048]色谱图5中保留时间7.762min为降解杂质1色谱峰，保留时间21.349min为降解杂质2色谱峰。
[0049]由色谱图5中可知降解杂质1和降解杂质2与各杂质分离度良好，满足各国药典质量标准要求。
[0050]实施例2
[0051]一、仪器、色谱条件。
[0052]同实施例1。
[0053]二、试剂。
[0054]磷酸二氢钠、甲醇、水、氢氧化钠、盐酸。
[0055]三、试药。
[0056]己酮可可碱对照品。
[0057]四：实验步骤。
[0058]取己酮可可碱注射液1ml(含己酮可可碱约20mg)置于20ml量瓶中，加入1ml1mol氢氧化钠溶液80℃水浴4小时，再加入1ml 1mol本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法，其特征在于，所述的强碱破坏降解杂质是指：碱破坏杂质1和碱破坏杂质2。2.根据权利要求1所述的一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法，其供试品溶液的制备过程为：取己酮可可碱注射液置于20ml量瓶中，加入1ml0.1～1mol氢氧化钠溶液，60～90℃水浴2～6小时，再加入盐酸溶液中和，加稀释剂稀释定容，配制每1mL中含1mg的己酮可可碱溶液。3.根据权利要求1所述的一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法，其对照品溶液的制备过程为：取碱破坏杂质1、碱破坏杂质2对照品，用稀释剂稀释定容，配制每1mL中含2μg的溶液，作为对照品溶液。4.根据权利要求1所述的一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法，其检测方法为：取供试品溶液与对照品溶液各20μL分别注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，其中，所述的高效液相色谱仪的色谱条件如下：流动相：流动相A与流动相B的混合物，流动相A是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇=70～90：30～10，流动相B是0.05mol/L磷酸二氢钠：甲醇=20～40：80～60；流速：0 .95～1 .05mL/min；柱温：30～50℃；色谱柱：C8柱、捕集小柱；检测波长：260～280nm。5.根据权利要求1所述的一种HPLC法分离检测己酮可可碱注射液中强碱破坏降解杂质的方法，其所述的高效液相色谱梯度洗脱条件具体如下：0～6min流动相B的体积百分比为0%；6.01～50min...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐成，宋尚纯，沈舒，熊冬冬，
申请(专利权)人：南京泽恒医药技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：