精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于体外检测技术领域。本发明专利技术的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒包括：链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒、化学发光标记物标记的精子顶体酶抗体和偶联标记物标记的精子顶体酶抗体。本发明专利技术的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成对精子顶体酶的检测。这种化学发光免疫分析试剂盒与仪器配套，缩短了临床检测所需的时间。这种化学发光免疫分析试剂盒的检测精度较高。免疫分析试剂盒的检测精度较高。免疫分析试剂盒的检测精度较高。

【技术实现步骤摘要】
精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于体外检测
，具体涉及一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]男性不育是指育龄夫妇，未避孕性生活，由于男方因素导致女方在一年内未自然受孕。临床上，普遍应用精液常规检测参数评价男性生育能力。虽然精液常规检测很有意义，但也存在着局限性。为了弥补精液常规检测的不足，人们陆续寻找到一些更有价值的指标，精子顶体酶就是其中的一项。人们发现精子顶体酶与精子浓度、活力、正常形态率等密切相关，对男性不育的诊断与治疗有着重要的应用价值，精子顶体酶阳性率低和活性低是造成男性不育的主要原因。因此，精子顶体酶的检测意义重大。
[0003]化学发光免疫分析法，其具有灵敏度高、准确定量、无放射性风险及其样本需求量少等。化学发光免疫测试试剂盒相比传统的检测方法，抗原、抗体的结合是在相似的液体条件下进行，反应更加迅速灵敏；另一方面，化学发光免疫测定试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，试剂、样本的添加及检测任务均由仪器自动完成，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。基于此本专利技术提供一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案具体如下：
[0006]本专利技术提供一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，包括：R1、R2和R3试剂；
[0007]所述R1试剂为链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒；
[0008]所述R2试剂为化学发光标记物标记的精子顶体酶抗体；
[0009]所述R3试剂为偶联标记物标记的精子顶体酶抗体。
[0010]在上述技术方案中，所述R1试剂的质量比是0.02％～1％。
[0011]在上述技术方案中，所述R2试剂中，精子顶体酶抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～20；缓冲液为100～500mM Bistris，0.3～1.0M锌化合物，精子顶体酶抗体终浓度为0.1～1μg/mL。
[0012]在上述技术方案中，所述R3试剂中，精子顶体酶抗体与偶联标记物的标记比例是1:5～20；缓冲液为100～500mM Bistris，0.3～1.0M锌化合物，精子顶体酶抗体终浓度为0.2～3μg/mL。
[0013]在上述技术方案中，所述R1试剂中，磁颗粒的粒径是4～6μm。
[0014]在上述技术方案中，所述R2试剂中，化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或者三联吡啶钌。
[0015]在上述技术方案中，所述R3试剂中，偶联标记物为生物素或者抗原。
[0016]在上述技术方案中，所述锌化合物为硫酸锌、氯化锌或者硫代硫酸锌。
[0017]在上述技术方案中，所述化学发光免疫检测试剂盒还包括精子顶体酶校准品，所述精子顶体酶校准品浓度为0.0pg/mL、2.0pg/mL、5.0pg/mL、10.0pg/mL、20.0pg/mL、50.0pg/mL和100.0pg/mL的精子顶体酶蛋白溶液。
[0018]本专利技术还提供一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0019]步骤1、R1试剂的制备
[0020]取浓度是100mg/mL的链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒溶液0.5毫升(50mg)，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒；重复清洗3次后在100～500mMBistris，pH6～8的缓冲液中配成磁珠浓度为0.072％的R1试剂；
[0021]步骤2、R2试剂的制备
[0022]将500μg精子顶体酶抗体放入离心管中，保证抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲溶液，充分混匀，混匀后按照精子顶体酶抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～20加入化学发光标记物的DMF溶液，经过封闭、纯化步骤后得到精子顶体酶化学发光标记物抗体；将精子顶体酶化学发光标记物抗体浓溶液用100～500mM Bistris、0.3～1.0M锌化合物，pH6～8的缓冲液配制成抗体终浓度为0.1
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2μg/mL的R2试剂；
[0023]步骤3、R3试剂的制备
[0024]取500μg精子顶体酶抗体，将pH6.5的TRIS缓冲液透析纯化后，按照精子顶体酶抗体与偶联标记物的标记比例是1:5～20加入偶联标记物，经过封闭、纯化步骤后得到偶联标记物标记的精子顶体酶抗体；将偶联标记物标记的精子顶体酶抗体浓溶液用100～500mM Bistris、0.3～1.0M锌化合物，pH6～8的缓冲液配制成抗体终浓度为0.2
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3μg/mL的R3试剂；
[0025]将R1、R2和R3试剂组装成成品试剂即精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒。这种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒用于检测精子顶体酶时，利用全自动化学发光免疫分析仪对精子顶体酶校准品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件；然后根据需求测试临床样本，根据样本的光量子数计算精子顶体酶的浓度。
[0026]本专利技术的有益效果是：
[0027]本专利技术的精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成对精子顶体酶的检测。这种化学发光免疫分析试剂盒与仪器配套，缩短了临床检测所需的时间。这种化学发光免疫分析试剂盒的检测精度较高。
附图说明
[0028]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。
[0029]图1为实施例4得到的标准曲线图，横坐标为校准品浓度，纵坐标为试剂反应的光量子数，其拟合度达0.9900。
具体实施方式
[0030]为了使本专利技术的优点、目的和方法更加详实易懂，下面结合附图和具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了诸多细节以便于理解，但本专利技术可以以不同于描述的其他方式来实施。
[0031]本专利技术提供一种精子顶体酶化学发光免疫检测试剂盒，包括：R1、R2和R3试剂；所述R1试剂为链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒；所述R2试剂为化学发光标记物标记的精子顶体酶抗体；所述R3试剂为偶联标记物标记的精子顶体酶抗体。
[0032]优选的，所述R1试剂链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒的质量比是0.02％～1％，进一步优选将链霉亲和素带有Tosyl官能团磁颗粒于缓冲溶液中配制成磁珠浓度为0.072％。
[0033]优选的，所述R2试剂化学发光标记物标记的精子顶体酶抗体中，精子顶体酶抗体与化学发光标记物的标记比例是1:3～20，进一步优选标记比例是1:5；缓冲液为100～500mM Bistris，0.3～1.0M锌化合物，精子顶体酶抗体终浓度为0.1～1μg/mL；进一步优选，缓冲液为100mM Bistris，0.3～1.0M氯化锌，抗体终浓度为0.5μg/mL。
[0034]优选的，所述R3试剂偶联标记本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
Bistris、0.3～1.0M锌化合物，pH6～8的缓冲液配制成抗体终浓度为0.2
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【专利技术属性】
技术研发人员：张旭东，李冬梅，孟令敏，高威，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：