【技术实现步骤摘要】
用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用
[0001]本专利技术属于免疫学和生物
,具体涉及用于检测胰蛋白酶类似物的TrypLE双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用。
技术介绍
[0002]胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后,作为胰液的成分而分泌,受肠激酶或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶,是肽链内切酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。是特异性最强的蛋白酶,在决定蛋白质的氨基酸排列中,它成为不可缺少的工具。
[0003]TrypLE是一种胰蛋白酶类似物,是一种通过生物工程制备的非动物源性重组酶,目前主要应用于细胞培养中。在细胞培养中,它可以替代猪和牛的胰蛋白酶来进行对贴壁细胞的解离。TrypLE因其制备方式,一般具有较高纯度,这也导致了其比天然胰蛋白酶配制剂有更强的特异性。此外,TrypLE 作用细胞时更加温和,并且终止消化时不需要 Trypsin 酶抑制剂,只需要使用稀释液进行稀释即可停止反应,这样极大程度上减少了外来物质对培养细胞的干扰。TrypLE已经被证明有能力去解离来自有无血清供应培养基的细胞。
[0004]胰蛋白酶及其类似物为肽链内切酶,对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒,包括:包被有捕获抗体的酶标板制成的固相抗体、酶标抗体、TrypLE标准品、样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。2.根据权利要求1所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于:所述捕获抗体为采用TrypLE抗原免疫小鼠,经融合、克隆、筛选得到的单克隆抗体,捕获抗体用0.5
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5ug/ml包板。3.根据权利要求2所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于:所述捕获抗体为抗TrypLE抗原的鼠单克隆抗体;捕获抗体用2ug/ml包板。4.根据权利要求1或2所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于:所述酶标抗体为HRP
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兔多克隆抗体;大小为25kd,其纯度为99%。5.根据权利要求1所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于:所述样品稀释液为 pH=7.4的1
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PBST,含PBST 体积0.05%的Tween
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20;包被缓冲液为 pH=9.6的0.05M碳酸盐缓冲液;封闭液为 pH =7.4的1
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PBST,含PBST 体积3%的BSA;ELISA酶标板洗涤液为 pH=7.4的1
×
PBST,含0.05%Tween
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20;显色液为显色液A和显色液B等体积混合,显色液A为H2O2,显色液B为TMB;终止液为2mol/L浓H2SO4。6.根据权利要求1所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒,其特征在于:所述TrypLE标准品为标准品A
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F:将TrypLE标准品使用稀释液稀释至40ng/mL、16ng/mL、6.4ng/mL、2.56ng/mL、1.024ng/mL、0.410ng/mL。7.权利要求1所述用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒的制备方法,其特征在于:具体方法为:(1)制备检测ELISA酶标板:包被缓冲液将抗TrypLE抗原的单克隆抗体稀释成0.5
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5ug/ml,混匀后按100μl/孔加入空的酶标板,用封板膜封板;4℃包被过夜;PBST洗涤后,封闭液封闭37℃温育120min;封闭结束后PBST洗涤;(2)ELISA试剂盒各组分的配制:配置试剂盒内检测ELISA酶标板、标准品、酶标抗体、样品稀释液、洗液、显色液A、显色液B、终止液、封板膜;其中:标准品为标准品A
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F:将TrypLE标准品使用稀释液稀释至40ng/mL、16ng/mL、6.4ng/mL、2.56ng/mL、1.024ng/mL、0.410ng/mL;酶标抗体:以1:5000
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1:20000稀释的HRP
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兔多克隆抗体;样品稀释液:pH=7.4的1
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P...
【专利技术属性】
技术研发人员:卢宁,梁雅丽,牛林茹,赵君,王玉哲,李文慧,
申请(专利权)人:山西集创生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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