【技术实现步骤摘要】
用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用
[0001]本专利技术属于免疫学和生物
，具体涉及用于检测胰蛋白酶类似物的TrypLE双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用。
技术介绍
[0002]胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后，作为胰液的成分而分泌，受肠激酶或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。
[0003]TrypLE是一种胰蛋白酶类似物，是一种通过生物工程制备的非动物源性重组酶，目前主要应用于细胞培养中。在细胞培养中，它可以替代猪和牛的胰蛋白酶来进行对贴壁细胞的解离。TrypLE因其制备...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒，包括：包被有捕获抗体的酶标板制成的固相抗体、酶标抗体、TrypLE标准品、样品稀释液、包被缓冲液、封闭液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。2.根据权利要求1所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述捕获抗体为采用TrypLE抗原免疫小鼠，经融合、克隆、筛选得到的单克隆抗体，捕获抗体用0.5
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5ug/ml包板。3.根据权利要求2所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述捕获抗体为抗TrypLE抗原的鼠单克隆抗体；捕获抗体用2ug/ml包板。4.根据权利要求1或2所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述酶标抗体为HRP
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兔多克隆抗体；大小为25kd，其纯度为99%。5.根据权利要求1所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述样品稀释液为 pH=7.4的1
×
PBST，含PBST 体积0.05%的Tween
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20；包被缓冲液为 pH=9.6的0.05M碳酸盐缓冲液；封闭液为 pH =7.4的1
×
PBST，含PBST 体积3%的BSA；ELISA酶标板洗涤液为 pH=7.4的1
×
PBST，含0.05%Tween
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20；显色液为显色液A和显色液B等体积混合，显色液A为H2O2，显色液B为TMB；终止液为2mol/L浓H2SO4。6.根据权利要求1所述的用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述TrypLE标准品为标准品A
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F：将TrypLE标准品使用稀释液稀释至40ng/mL、16ng/mL、6.4ng/mL、2.56ng/mL、1.024ng/mL、0.410ng/mL。7.权利要求1所述用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒的制备方法，其特征在于：具体方法为：（1）制备检测ELISA酶标板：包被缓冲液将抗TrypLE抗原的单克隆抗体稀释成0.5
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5ug/ml，混匀后按100μl/孔加入空的酶标板，用封板膜封板；4℃包被过夜；PBST洗涤后，封闭液封闭37℃温育120min；封闭结束后PBST洗涤；（2）ELISA试剂盒各组分的配制：配置试剂盒内检测ELISA酶标板、标准品、酶标抗体、样品稀释液、洗液、显色液A、显色液B、终止液、封板膜；其中：标准品为标准品A
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F：将TrypLE标准品使用稀释液稀释至40ng/mL、16ng/mL、6.4ng/mL、2.56ng/mL、1.024ng/mL、0.410ng/mL；酶标抗体：以1:5000
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1:20000稀释的HRP
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兔多克隆抗体；样品稀释液：pH=7.4的1
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P...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢宁，梁雅丽，牛林茹，赵君，王玉哲，李文慧，
申请(专利权)人：山西集创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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