肌酸激酶同工酶测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了肌酸激酶同工酶(CKMB)测定试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其中第一试剂为含有聚乙二醇和肝素的磷酸盐缓冲液；所述第二试剂为含有肌酸激酶同工酶胶乳抗体和透明质酸的甘氨酸缓冲溶液。本发明专利技术肌酸激酶同工酶测定试剂盒可通过定量客观反映CKMB的存在，为临床诊断及疗效观察和预后判断提供了更有力的实验诊断依据。本发明专利技术所提供的肌酸激酶同工酶测定试剂盒特异性高，重复性好，检测灵敏度高，线性范围宽，稳定性高。稳定性高。

【技术实现步骤摘要】
肌酸激酶同工酶测定试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及肌酸激酶同工酶测定试剂盒，特别是涉及一种胶乳免疫比浊法肌酸激酶同工酶测定试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]肌酸激酶(CreatineKinase,CK)广泛存在于各种组织中，与三磷酸腺苷(ATP)的再生有关。肌酸激酶是由M和B两种亚单位组成的二聚体，在细胞质内共有三种同工酶：即CK
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MM、CK
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MB和CK
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BB。在细胞线粒体内还有另一种同工酶，称为CK
‑
Mt。这几种同工酶虽然相对分子质量相同，但是免疫特性不同。肌酸激酶的同工酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3
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4日内恢复正常。其中肌酸激酶的同工酶CK
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MB诊断的特异性最高，临床上主要用于心肌梗死、病毒性心肌炎的辅助诊断。
[0003]肌酸激酶同工酶测定的方法有电泳法、离子交换柱层析法、免疫抑制法、金标记法、免疫酶标法和放射免疫法等。常规应用电泳法和免疫抑制法较多，但电泳法无法应用于全自动生化分析仪，所用仪器价格昂贵，所以无法普及。其他常用检测还有免疫比浊法和酶联免疫吸附法等。由于酶联免疫吸附法检测耗时且操作复杂，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求，而免疫比浊法随着全自动生化仪的普及，已经发展出来多种快速免疫比浊检测技术。
[0004]乳胶增强免疫透射比浊法的基本原理是，首先将抗体吸附在一种胶乳颗粒上，当遇到相应的抗原时，抗原抗体结合而出现乳胶凝集。单个乳胶颗粒的大小在入射波长之内，光线可透过，当两个以上的乳胶颗粒凝集时，可阻碍光线透过，使得透射光减少，其减少程度与抗原的量成正比。此法提高了检测的灵敏度和准确度，得到了广泛的应用。然而，乳胶增强免疫比浊法反应后会产生沉淀，不利于生化仪的清洗，干扰试验结果，且乳胶制造成本较高，导致免疫比浊试剂盒价格和检测成本偏高。因此又出现了纳米颗粒增强的免疫比浊法，如专利CN101680890便公开了一种通过比浊法测量人抑半肮氨酸蛋白酶蛋白C的比浊免疫测定方法和试剂组合，以及中国专利CN101819208中公开了一种利用微球免疫比浊法检测脑钠肽试剂盒。专利CN101680890中具体公开了，表面修饰了抗体的由聚苯乙烯、聚氯乙烯、环氧树脂、聚偏1,1
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二氯乙烯、聚
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α
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萘基甲基丙稀酸酯、聚乙烯萘以及它们相应的共聚物制成的粒径在80
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105nm的有机高分子胶体纳米颗粒。
[0005]中国专利申请CN 109613242 A公开了一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒及其制备方法，包括：磁分离试剂和酶标记抗体；磁分离试剂包括：表面上结合有第一抗CK
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MB单克隆抗体和第二抗CK
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MB单克隆抗体的磁微粒；酶标记抗体包括：酶标记的第三抗CK
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MB单克隆抗体；和/或，酶标记的第四抗CK
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MB单克隆抗体；其中，第一、第二、第三和第四抗CK
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MB单克隆抗体分别特异于肌酸激酶同工酶的不同表位。
[0006]中国专利申请CN 108548926 A公开了一种肌酸激酶同工酶检测试剂盒。该试剂盒
包括第一试剂、第二试剂。第一试剂包含缓冲液、防腐剂、增凝剂、表面活性剂、保护剂、阻断剂；第二试剂包含缓冲液、稳定剂、防腐剂、保护剂、聚苯乙烯胶乳颗粒、肌酸激酶同工酶抗体。

技术实现思路

[0007]基于上述
技术介绍
，现有技术尚未关注试剂盒在存储过程中的稳定性问题。本专利技术所要解决的技术问题在于一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒，其目标在于提高试剂盒的长期稳定性。为了实现本专利技术的专利技术目的，拟采用如下技术方案：
[0008]本专利技术一方面涉及肌酸激酶同工酶测定试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其特征在于：
[0009]其中第一试剂为含有聚乙二醇和肝素的磷酸盐缓冲液；
[0010]所述第二试剂为含有肌酸激酶同工酶胶乳抗体和透明质酸的甘氨酸缓冲溶液。
[0011]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述试剂盒中还包括肌酸激酶同工酶的标准品缓冲溶液。
[0012]在本专利技术的另一个优选实施方式中，所述试剂盒中还包括肌酸激酶同工酶的质控品缓冲溶液。
[0013]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述第一试剂还含有电解质、表面活性剂和防腐剂。其各自的含量为本领域的常规含量。
[0014]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述第一试剂中所含有的电解质为NaCl，表面活性剂是Tween 80，防腐剂是叠氮钠。
[0015]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述第二试剂还含有稳定剂和防腐剂。其各自的含量为本领域的常规含量。
[0016]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述第二试剂中所含有的稳定剂为蔗糖，防腐剂是叠氮钠。
[0017]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述第一试剂中肝素的量为0.2
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0.5g/L。当肝素的含量在本专利技术的优选范围时，其更有利于提供对第一试剂的保护，以提高试剂盒的长期稳定性等。
[0018]在本专利技术的另一个优选实施方式中，所述第二试剂中透明质酸的量为40
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60g/L。当透明质酸的量在本专利技术的优选范围时，其有利于提高第二试剂的粘度以及防止聚苯乙烯胶乳颗粒的沉降等。
[0019]本专利技术另一方面还涉及上述试剂盒在制备定量测定肌酸激酶同工酶测定试剂盒中的应用。
[0020]有益效果
[0021]本专利技术肌酸激酶同工酶测定试剂盒可通过定量客观反映肌酸激酶同工酶的存在，为临床诊断及疗效观察和预后判断提供了更有力的实验诊断依据。本专利技术所提供的肌酸激酶同工酶测定试剂盒特异性高，重复性好，检测灵敏度高，线性范围宽，稳定性高。
具体实施方式
[0022]为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方
案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
[0024]实施例1
[0025](1)制备第一试剂：称取18g三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、13gNaCl、9gPEG 8000、15g Tween 80、1.5g叠氮钠、0.5g肝素，溶于1.0L双蒸水中，调节ph至7.2，定容至1.5L即得试剂第一试剂(分装为30mL/剂)：
[0026](2)制备第二试剂：用甘氨酸缓冲液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肌酸激酶同工酶测定试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，其特征在于：其中第一试剂为含有聚乙二醇和肝素的磷酸盐缓冲液；所述第二试剂为含有肌酸激酶同工酶胶乳抗体和透明质酸的甘氨酸缓冲溶液。2.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述试剂盒中还包括肌酸激酶同工酶的标准品缓冲溶液。3.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述试剂盒中还包括肌酸激酶同工酶的质控品缓冲溶液。4.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述第一试剂还含有电解质、表面活性剂和防腐剂。5.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶测定试剂盒，所述第一试剂中所含有的电解质为NaCl，表面活性剂是Twee...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾曜龙，易剑峰，施清蓉，蔡其浩，胡小雄，
申请(专利权)人：江西英大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：