中性粒细胞弹性蛋白酶在制备诊断胆道闭锁的产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种中性粒细胞弹性蛋白酶在制备诊断胆道闭锁的产品中的应用，涉及分子诊断技术领域，本发明专利技术通过检测大量的BA患儿样本，并结合体内和体外实验，首先证实了BA肝脏组织和外周血中NE的表达可作为提高BA的诊断和评估肝损伤程度的有力指标，因此检测NE的表达可作为临床上诊断和评估BA患儿的病情提供更方便、直接、准确的方法。除此之外，本发明专利技术还证实了NE抑制剂在动物实验上起治疗作用，可用于治疗BA的药物研发。于治疗BA的药物研发。于治疗BA的药物研发。

【技术实现步骤摘要】
中性粒细胞弹性蛋白酶在制备诊断胆道闭锁的产品中的应用


[0001]本专利技术涉及分子诊断
，尤其是涉及一种中性粒细胞弹性蛋白酶在制备诊断胆道闭锁的产品中的应用。

技术介绍

[0002]胆道闭锁(biliary atresia，BA)是婴幼儿慢性肝病最常见的病因，也是婴幼儿肝移植的主要适应症，病因及发病机制尚不明确。BA临床表现主要以皮肤、黏膜进行性黄疸、陶土样大便、茶样尿及肝脾肿大等为主，其预后差，病死率高。我国是BA的高发地区，发病率高达1/5000
‑
8000。目前BA的诊断主要依据术中造影和术后病理，治疗以Kasai术和肝移植为主，虽然肝移植是BA患儿长期生存的希望，但由于多因素的限制导致肝移植无法满足所有BA患儿，使得大部分BA患儿只能依靠Kasai术，Kasai术的最佳适宜年龄为小于60天。由于当前缺乏精准的早期诊断方法和有效的治疗药物，BA患儿常常在出生后3
‑
5月时才被确诊，导致大多数患儿Kasai术后预后不良及后期进行性胆管破坏和肝硬化而于2岁左右死亡。因此，探索BA可能的早期诊断方法和临床治疗药物成为当前亟需。
[0003]目前BA诊断方法较多，其方法主要包括：
[0004](1)动态观察外周血胆红素：每周检测患儿的血清胆红素，BA患儿直接胆红素一般呈进行性升高，但重型肝炎时亦可表现为持续性上升，这种情况鉴别较困难；
[0005](2)超声：若未见胆囊或见有小胆囊(1.5cm以下)，则疑为BA，若见有正常胆囊存在，则支持肝炎，如能看出肝内胆管的分布形态，则更能帮助诊断。但有时在B超下胆囊和胆管的显示与术中不符，导致B超诊断BA的精准率下降；
[0006](3)术中胆管造影及术后病理检查：虽然术中胆管造影及术后病理检查是诊断BA的“金标准”，但其为有创性检查，且此时诊断的患儿年龄均较大，可能不利于患儿术后的预后。
[0007]目前治疗BA最直接的方法是Kasai术和肝移植术：
[0008](1)Kasai术：Kasai术为小儿外科中创伤性极大的手术，虽可改善部分BA患儿胆汁淤积的症状，但由于手术年龄大部分均较大，导致患儿术后预后较差；以及BA患儿后续会出现胆管进行性破坏和肝纤维化，使得Kasai术大部分无法解决BA的根本问题；
[0009](2)肝移植术：肝移植是BA患儿唯一长期存活的治疗方法，因我国肝源缺乏，无法满足所有BA患儿，且肝移植费用较高。
[0010]由此可见，目前无论对于新生儿胆道闭锁的诊断还是治疗，均存在一定缺陷。因此寻找BA方便、快捷和精准的诊断手段和有效的治疗药物是十分必要的。
[0011]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0012]本专利技术的主要目的在于提供检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于诊断胆道闭锁的产品中的应用，以缓解现有技术中存在的至少一个技术问题。
[0013]为解决现有技术中存在的技术问题，本专利技术提供了检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于诊断胆道闭锁的产品中的应用。
[0014]本专利技术还提供了检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于评估胆道闭锁患儿肝脏损伤程度的产品中的应用。
[0015]本专利技术还提供了检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于预后评估胆道闭锁的产品中的应用。
[0016]进一步的，所述检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质包括检测中性粒细胞弹性蛋白酶的试剂。
[0017]进一步的，所述检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质包括检测中性粒细胞弹性蛋白酶的仪器。
[0018]本专利技术还提供了中性粒细胞弹性蛋白酶作为标志物在制备胆道闭锁的诊断产品中的应用。
[0019]进一步的，所述诊断产品包括试剂或试剂盒。
[0020]另外，本专利技术还提供了中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制剂在制备用于治疗胆道闭锁的产品中的应用。
[0021]进一步的，所述产品包括药物。
[0022]进一步的，所述中性粒细胞弹性蛋白酶的抑制剂包括Sivelestat。
[0023]本专利技术提供的技术方案具有如下有益效果：
[0024]本专利技术通过检测大量的BA患儿样本，并结合体内和体外实验，首先证实了BA肝脏组织和外周血中NE的表达可作为提高BA的诊断和评估肝损伤程度的有力指标，因此检测NE的表达可作为临床上诊断和评估BA患儿的病情提供更方便、直接、准确的方法。
[0025]除此之外，本专利技术还证实了NE抑制剂在动物实验上起治疗作用，可用于治疗BA的药物研发。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1A为本专利技术实施例提供的NC、IHC及BA组儿童肝脏中NE免疫组化染色代表性图片；
[0028]图1B为本专利技术实施例提供的使用ELISA方法检测NE在NC(n＝20)、IHC(n＝21)及BA(n＝21)患儿外周血血浆中的含量，***P＜0.001；
[0029]图1C为本专利技术实施例提供的胆道闭锁患儿NE表达水平与肝功指标的预后关联性分析的结果图；
[0030]图2A为本专利技术实施例提供的第3，6，9，12天正常健康对照注射生理盐水组小鼠(Control)、RRV诱导的BA小鼠(RRV)、RRV+弹性蛋白酶抑制剂组小鼠(RRV+Sivelestat)外观代表性图片；
[0031]图2B为本专利技术实施例提供的各组小鼠黄疸率曲线；
[0032]图2C为本专利技术实施例提供的各组小鼠生存曲线；
[0033]图2D为本专利技术实施例提供的各组小鼠体重曲线；
[0034]图2E为本专利技术实施例提供的各组小鼠肝脏表面代表性图片(箭头：炎症灶)；
[0035]图2F为本专利技术实施例提供的各组小鼠肝外胆管造影代表性图片(星号：肝外胆管闭锁)；
[0036]图2G为本专利技术实施例提供的各组小鼠肝内胆管染色代表性图片(PV：汇管区；BD：胆管)；
[0037]图2H为本专利技术实施例提供的各组小鼠肝脏HE染色代表性图片(PV：汇管区；BD：胆管)；
[0038]图3A为本专利技术实施例提供的BEC组，PMA+BEC组，血管瘤患儿PMN+BEC，PMA+血管瘤患儿PMN+BEC组，血管瘤患儿PMN+BEC+Sivelestat组，PMA+血管瘤患儿PMN+BEC+Sivelestat组形态代表性图片；
[0039]图3B为本专利技术实施例提供的各组人BEC的MTT细胞增殖实验统计结果；
[0040]图3C为本专利技术实施例提供的BEC组，PMA+BEC组，BA患儿PMN+BEC，PMA+BA患儿PMN+BEC组，BA患儿PMN+BEC+Sivelestat组，PMA+BA患儿PMN+B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于诊断胆道闭锁的产品中的应用。2.检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于评估胆道闭锁患儿肝脏损伤程度的产品中的应用。3.检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质在制备用于预后评估胆道闭锁的产品中的应用。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的应用，其特征在于，所述检测中性粒细胞弹性蛋白酶的物质包括检测中性粒细胞弹性蛋白酶的试剂。5.根据权利要求1
‑
3任一项所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张锐忠，付铭，童燕陆，谭乐东，王贺珍，陈严，夏慧敏，
申请(专利权)人：广州市妇女儿童医疗中心广州市妇幼保健院，广州市儿童医院，广州市妇婴医院，广州市妇幼保健计划生育服务中心，
类型：发明
国别省市：