肺腺癌预后的预测方法技术

本发明专利技术公开一种肿瘤预后的预测方法，包括检测癌细胞的单酰基甘油脂肪酶水平。本发明专利技术通过检测MALL表达水平实现肿瘤的预后预测，提供一种新的肿瘤预后预测方法。一种新的肿瘤预后预测方法。一种新的肿瘤预后预测方法。

【技术实现步骤摘要】
肺腺癌预后的预测方法


[0001]本专利技术涉及医学诊断领域，具体涉及一种用于肺腺癌预后的预测方法。

技术介绍

[0002]肺癌是我国乃至全球主要癌种之一。根据2018年最新全球癌症统计数据，肺癌在所有癌种中发病率及致死率均居于首位。肿瘤标志物是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对治疗反应的一类物质。因此寻找能预测肿瘤发生、发展、评估肿瘤预后的标志物对肿瘤的监测与治疗有重要意义。
[0003]当机体某个部位发生肿瘤时，肿瘤细胞代谢异常，使某些酶或同工酶合成增加；或由于肿瘤组织的压迫和浸润，导致某些酶的排泄受阻，使肿瘤患者血清中酶活性异常升高。酶是较早发现并用于临床诊断的一类肿瘤标志物，如患肝癌时γGT升高，患前列腺癌时PAP升高等。
[0004]越来越多的研究表明，肿瘤细胞脂肪酸从头合成的增多是癌症发生发展的一个显著特点，并且从头合成的激活与多种类型肿瘤的预后和无病存活期呈负相关，这一表型主要是由于脂生成相关基因在转录、翻译及翻译后修饰、酶活等多水平的上调，以及受这些基因或脂代谢变化而对癌基因的表达产生影响。脂生成的增加主要是为了合成更多细胞膜脂以满足癌细胞快速增殖及其对能量需求的飙升。
[0005]目前肺癌诊断与监测的主要手段是胸部CT，然而对预后的评估一直是个难点。

技术实现思路

[0006]本专利技术的提供了一种用脂类代谢途径中肿瘤标志物评估肿瘤预后的预测方法。
[0007]本专利技术一种肿瘤预后的预测方法，包括检测癌细胞的单酰基甘油脂肪酶(MGLL)水平。
[0008]根据本专利技术的一实施方式，当单酰基甘油脂肪酶水平与参考水平相比升高时，代表患者预后差。
[0009]根据本专利技术的另一实施方式，所述参考水平是来自非癌细胞的水平。
[0010]根据本专利技术的另一实施方式，用于预测肺癌。
[0011]根据本专利技术的另一实施方式，用于预测肺腺癌(LUAD)。
[0012]本专利技术通过检测MGLL表达水平实现肿瘤的预后预测，提供一种新的肿瘤预后预测方法。
附图说明
[0013]通过参照附图详细描述其示例实施方式，本专利技术的上述和其它特征及优点将变得更加明显。
[0014]图1A是LUAD和邻近的正常组织中MGLL的免疫组化(IHC)评分(**P<0.01)。
[0015]图1B是LUAD和正常组织中MGLL免疫组化染色结果(比例尺＝50μm)。
[0016]图1C是随机选择的LUAD样品和邻近的正常组织中MGLL表达的蛋白质印迹分析。
[0017]图1D是基于MGLL表达的Kaplan-Meier曲线分析，MGLL高表达预示总体生存率低。
[0018]图2A是5种LUAD细胞中MGLL表达的蛋白质印迹分析。
[0019]图2B是通过qRT-PCR验证LUAD细胞中的MGLL敲降效率。
[0020]图2C是通过CCK8测定法测量MGLL敲降和对照A549和H322细胞的增殖能力。
[0021]图2D是shMGLL和对照A549和H322细胞中集落形成测定图像。右边的列显示三个独立实验的平均克隆数。
[0022]图2E和图2F是皮下注射shMGLL或载体对照A549细胞的裸鼠的切除的异种移植肿瘤的图像。每组的生长曲线和平均肿瘤重量为如图所示。
[0023]图2G是流式细胞仪细胞周期分析，表明MGLL敲降会降低S和G2/M期细胞的百分比。
[0024]图2H是细胞凋亡分析，表明在A549和H322细胞中MGLL敲降后，凋亡细胞的百分比没有受到显著影响(ns，不显著)。
[0025]图2I是检测MGLL基因敲降和对照细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin B1的表达以及凋亡相关蛋白BCL-2和BAX的表达的蛋白质印迹分析。*P＜0.05，**P＜0.01。
[0026]图3A和图3B是Transwell实验以测量shMGLL和对照A549和H322细胞的迁移和侵袭活性。
[0027]图3C是通过尾静脉注射shMGLL或载体对照A549细胞的小鼠分离的肺组织的图像。
[0028]图3D是shMGLL和对照组小鼠肺组织的HE染色图像，箭头示出转移性结节；比例尺＝2mm。
[0029]图3E是测量MGLL敲降和对照A549和H322细胞中EMT标记的表达的蛋白质印迹分析。*P＜0.05，**P＜0.01。
[0030]图4A和图4B是示出通过RNA-seq分析确定的A549细胞中MGLL敲降后上调和下调的基因的热图和维恩图。
[0031]图4C是与上调和下调的基因相关的KEGG通路富集分析。
[0032]图4D是测量MGLL敲降和对照A549和H322细胞中MGLL和MMP14的蛋白质水平的蛋白质印迹分析。
[0033]图4E是MGLL敲降和对照异种移植肿瘤中MGLL和MMP14染色的IHC图像；比例尺＝50μm。
[0034]图5A是IHC染色表明相对于相邻的正常组织，MMP14在LUAD中过表达(**P<0.01)。
[0035]图5B是LUAD和正常组织中MMP14的IHC染色图像；比例尺＝50μm。
[0036]图5C是基于MMP14表达的Kaplan-Meier曲线分析，MMP14的高表达预示总体生存率低。
[0037]图5D卡方检验证明(P＝0.036)MMP14的表达与MGLL的表达相关。
具体实施方式
[0038]下面结合具体实施方式对本专利技术作详细说明。
[0039]本专利技术的目的在于提供一种基于免疫组化(IHC)技术检测标志物MGLL的表达水平，该标志物应用于预测肿瘤患者预后。
Technology)，BAX(1：1000，Cell Signaling Technology)，E-钙粘蛋白(1：1,000，Cell Signaling Technology)，N-钙粘蛋白(1：1,000，Cell Signaling Technology)和MMP14(1：500，ABclonal)。
[0053]增殖和集落形成实验
[0054]通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定法(Dojindo，熊本，日本)评估细胞活力。在450nm下测量光密度，并连续监测细胞3天。为了进行集落形成测定，将A549和H322细胞以600个细胞/孔接种在6孔板中，并使其分别生长1周和2周。然后固定菌落并用1％结晶紫染色。
[0055]迁移和侵袭实验
[0056]为了进行迁移和侵袭分析，将无血清RPMI 1640或DMEM培养基中的A549细胞(5
×
104)或H322细胞(1
×
105)分别接种到24孔板的小室中(Corning，8.0-未涂或未涂Matrigel的微孔(BD Biosciences，Frankl本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤预后的预测方法，其特征在于，包括检测癌细胞的单酰基甘油脂肪酶水平。2.根据权利要求1所述的预测方法，其特征在于，当单酰基甘油脂肪酶水平与参考水平相比升高时，代表患者预后差。3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：赫捷，高亦博，张浩，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：