一种稳定的血清胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种胃蛋白酶原Ⅰ（PGI）测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：哌嗪

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的血清胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生化试剂测定
，特别涉及一种胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒，还涉及所述胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胃蛋白酶原（pepsinogen），由泌酸腺的主细胞合成，在胃腔内经盐酸(HCL)或已有活性的胃蛋白酶(pepsin)作用变成胃蛋白酶，将蛋白质分解成膘、胨及少量多肽。该酶作用的最适pH为2，进入小肠后，酶活性丧失。
[0003]胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体，根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原II。
[0004]血清胃蛋白酶原水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能：PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低；PGII与胃底粘膜病变的相关性较大（相对于胃窦粘膜），其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，联合测定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。通过其血清测量值的不同，在各胃部疾病中均有不同程度的改变，为临床提供可靠的诊断价值。
[0005]目前检测胃蛋白酶原Ⅰ的方法有法有胶乳免疫比浊法、双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)、胶体金比色法。双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)，准确性和灵敏度高，但是仪器设备昂贵，试剂保存不方便，价格高；胶体金比色法，操作简单，出结果快，但是只能定性研究，无法定量。胶乳免疫比浊法法具有特异性高，操作简单快捷、准确安全、可自动化分析、成本较低的优点，但现有技术中国产试剂盒存在分析灵敏度低，稳定性差，容易受乳糜微粒（CM）影响等缺点，本专利技术针对现有胃蛋白酶原Ⅰ试剂盒的缺点进行改进以满足临床检测以及化学分析的要求。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供一种胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒是一种稳定性强，灵敏度高，重复性好，成本低的液体试剂盒。
[0007]本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液
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20-50mmol/L；NaCl
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1-9g/L；氢氧化钠
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0.1g /L；
表面活性剂
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0.1%-2%；防腐剂
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0.5-1 g/L；试剂R2中含有以下成分：缓冲液
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20-50mmol/L；鼠抗人PGI抗体包被胶乳颗粒
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20-50mg/L；稳定剂
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10-20g/L；表面活性剂
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0.1%-2%；助悬剂
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10-20g/L；防腐剂
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0.5-1g/L；其中表面活性剂所述百分比为体积比。
[0008]优选地，所述试剂R1的pH 为6.5-7.5。
[0009]优选地，所述试剂R2 的pH为6.8-7.5。
[0010]优选地，所述试剂 R1 和R2试剂中的表面活性剂选自聚氧乙烯山梨醇六硬脂酸酯、曲拉通x-100、丙二醇脂肪酸酯中的一种或多种。更优选地，试剂 R1中表面活性剂为聚氧乙烯山梨醇六硬脂酸酯和丙二醇脂肪酸酯，R2试剂中表面活性剂为曲拉通100。
[0011]优选地，所述试剂 R2试剂中的稳定剂为牛血清白蛋白、聚乙烯吡咯烷酮k30和聚乙二醇4000中的一种或多种。更优选地，稳定剂由牛血清白蛋白与聚乙烯吡咯烷酮k30组成。
[0012]优选地，所述试剂 R2试剂中助悬剂为海藻糖、甘露醇和丙三醇中的一种或多种。更优选地，助悬剂为甘露醇和丙三醇复配而成。
[0013]优选地，所述试剂 R2中的胶乳颗粒直径为50nm、100nm和150nm中的一种或多种。更优选地，胶乳颗粒直径为100nm。
[0014]优选地，所述试剂R1 和R2试剂中的防腐剂为叠氮钠、proclin300、MIT和苯甲酸钠中的一种或多种，更优选地，防腐剂为proclin300。
[0015]优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为1～5:1。更优选地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为5:1。
[0016]上述所述的胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：鼠抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体包被胶乳颗粒的制备方法为：取适量表面羧基化的聚苯乙烯胶乳颗粒，加入到10ml缓冲液中，使胶乳颗粒终浓度为1.0% ；然后加入适量鼠抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）及N-羟基丁二酰亚胺（NHS），室温下混合搅拌3小时左右，加入1ml 10g/L的BSA溶液，12000 rpm离心40分钟，去除上清，所得沉淀即为鼠抗人胃蛋白酶原Ⅰ抗体包被胶乳颗粒。再按照比例加入其它物质溶解，制成胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒。
[0017]本专利技术还公开了胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定血清中胃蛋白酶原Ⅰ的浓度。
[0018]本专利技术试剂盒采用胶乳免疫比浊法，其反应原理为样本中的 PGI 可与吸附在胶乳颗粒上的抗 PGI 抗体产生抗原抗体的凝集反应，形成免疫复合物，通过测定该免疫复合物吸光度的变化，可算出样本中 PGI 的含量。反应具有特异性，使用全自动生化仪进行检测，操作简单、自动化程度高，可减少人为误差，适合大多数临床实验室应用。
[0019]有益效果1）本专利技术稳定的胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒为液体双试剂，无需复溶配制，开瓶可以直接使用。
[0020]2）通过在试剂R2中加入牛血清白蛋白与聚乙烯吡咯烷酮k30组成复合稳定剂，甘露醇和丙三醇组成复合助悬剂，各组分协同作用，有效地提高了试剂中抗体胶乳颗粒的稳定性，使试剂稳定性能优异，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液
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20-50mmol/L；NaCl
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1-9g/L；氢氧化钠0.1g /L；表面活性剂
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0.1%-2%；防腐剂
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0.5-1 g/L；试剂R2中含有以下成分：缓冲液
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20-50mmol/L；鼠抗人PGI抗体包被胶乳颗粒
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20-50mg/L；稳定剂
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10-20g/L；表面活性剂
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0.1%-2%；助悬剂
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10-20g/L；防腐剂
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0.5-1g/L；其中表面活性剂所述百分比为体积比。2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶原Ⅰ测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的缓冲液体系为三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、N-氨基甲酰甲基乙磺酸缓冲液、...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘安娜，
申请(专利权)人：中拓生物有限公司，
类型：发明
国别省市：