【技术实现步骤摘要】
纳米颗粒调配物本申请是申请日为2017年12月1日、申请号为“201780082261.4”、名称为“纳米颗粒调配物”的专利技术专利申请的分案申请。
本申请要求2016年12月2日提交的美国临时申请序列号62/429,466的优先权,其内容通过引用整体并入本文。
技术介绍
多肽的四级结构可以极大地影响它们的物理化学和生物学特性。蛋白质聚集或非天然聚集是指蛋白质分子组装成由两种或两种以上蛋白质构成的稳定复合物的过程,其中单个蛋白质表示为单体。聚集体通常通过强非共价接触保持在一起,并且需要一定程度的构象变形(解折叠或错误折叠)以便呈现形成单体之间的强接触的关键氨基酸段。虽然聚集倾向于增加蛋白质的稳定性,但它通常以蛋白质的生物活性为代价,降低组合物的均匀性,并且在一些情况下可能增加蛋白质的免疫原性。这些性质对使用此些蛋白质作为生物剂进行治疗的能力产生不利影响。
技术实现思路
本技术涉及将含MYC多肽控制组装成具有确定尺寸范围的生物活性颗粒群。本文提供了用于产生保持生物活性的含MYC纳米颗粒的稳定制剂的方法。还提供了使用生物活性颗粒进行治疗的方法,包含治疗细胞的体外和体内方法。本文公开了包括被配制成生物活性稳定纳米颗粒的含MYC多肽的组合物。在一些实施例中,含MYC多肽包括融合肽,其中融合肽包括:(i)蛋白转导结构域;(ii)MYC多肽序列,并且其中纳米颗粒表现出MYC的生物活性。在一些实施例中,融合肽包括SEQIDNO:1。在一些实施例中,融合肽包括SEQIDNO:10。在某些实 ...
【技术保护点】
1.一种制备包括一或多种含MYC多肽的生物活性纳米颗粒群的方法,所述方法包括:/n(a)使含MYC多肽在包括某一浓度的变性剂的增溶溶液中增溶以提供增溶的含MYC多肽;/n(b)用第一重折叠缓冲液对所述增溶的含MYC多肽进行第一重折叠步骤至少约30到180分钟以提供第一多肽混合物,所述第一重折叠缓冲液包括约0.35到约0.65浓度的步骤(a)的所述变性剂和约100mM到约1M碱金属盐和/或碱性金属盐;/n(c)用第二重折叠缓冲液对所述第一多肽混合物进行第二重折叠步骤至少约30到180分钟以提供第二多肽混合物,所述第二重折叠缓冲液包括约0.10到约0.30浓度的步骤(b)的所述变性剂和约100mM到1M碱金属盐和/或碱性金属盐;和/n(d)用第三重折叠缓冲液对所述第二多肽混合物进行第三重折叠步骤至少约30到180分钟,所述第三重折叠缓冲液包括约100mM到1M碱金属盐和/或碱性金属盐;/n(e)将所述含MYC多肽保持在所述第三重折叠缓冲液中一段时间,所述时间足以产生数均直径介于约80nm和约150nm之间的生物活性纳米颗粒,/n其中相较于未与所述生物活性纳米颗粒接触的抗CD3或抗CD28活 ...
【技术特征摘要】
20161202 US 62/429,4661.一种制备包括一或多种含MYC多肽的生物活性纳米颗粒群的方法,所述方法包括:
(a)使含MYC多肽在包括某一浓度的变性剂的增溶溶液中增溶以提供增溶的含MYC多肽;
(b)用第一重折叠缓冲液对所述增溶的含MYC多肽进行第一重折叠步骤至少约30到180分钟以提供第一多肽混合物,所述第一重折叠缓冲液包括约0.35到约0.65浓度的步骤(a)的所述变性剂和约100mM到约1M碱金属盐和/或碱性金属盐;
(c)用第二重折叠缓冲液对所述第一多肽混合物进行第二重折叠步骤至少约30到180分钟以提供第二多肽混合物,所述第二重折叠缓冲液包括约0.10到约0.30浓度的步骤(b)的所述变性剂和约100mM到1M碱金属盐和/或碱性金属盐;和
(d)用第三重折叠缓冲液对所述第二多肽混合物进行第三重折叠步骤至少约30到180分钟,所述第三重折叠缓冲液包括约100mM到1M碱金属盐和/或碱性金属盐;
(e)将所述含MYC多肽保持在所述第三重折叠缓冲液中一段时间,所述时间足以产生数均直径介于约80nm和约150nm之间的生物活性纳米颗粒,
其中相较于未与所述生物活性纳米颗粒接触的抗CD3或抗CD28活化的T细胞,在适合T细胞增殖的条件下使抗CD3或抗CD28活化的T细胞与所述生物活性纳米颗粒接触增强了所述T细胞的活化、存活或增殖中的一或多种。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述第一重折叠步骤、第二重折叠步骤和/或第三重折叠步骤包括通过缓冲液更换来进行所述步骤。
3.根据权利要求2所述的方法,其中使用切向流过滤进行缓冲液更换。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述碱金属盐包括钠盐、锂盐和钾盐中的一或多种,其中所述钠盐包括氯化钠(NaCl)、溴化钠、硫酸氢钠、硫酸钠、碳酸氢钠或碳酸钠中的一或多种,其中所述锂盐包括氯化锂、溴化锂、硫...
【专利技术属性】
技术研发人员:Y·里菲利,B·C·特纳,G·A·伯德,
申请(专利权)人:泰加生物工艺学公司,
类型:发明
国别省市:美国;US
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