重组病毒载体和用于产生所述重组病毒载体的核酸制造技术

本文描述了用于产生重组腺相关病毒(rAAV)载体的核酸、AAV转移盒和质粒。所公开的核酸、盒和质粒包含表达一种或多种转基因的序列，所述一种或多种转基因在一种或多种疾病或病症的改善、治疗和/或预防中具有治疗功效。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组病毒载体和用于产生所述重组病毒载体的核酸相关申请的交叉引用本申请要求2018年11月21日提交的美国临时申请序列号62/770,202的优先权，所述临时申请出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
本公开涉及分子生物学和基因疗法的领域。更具体地，本公开涉及用于产生重组病毒载体的组合物和方法。以电子方式提交的文本文件的描述随此以电子方式提交的文本文件的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式拷贝(文件名称：STRD-011-01WO_Sequence_Listing.txt，记录日期2019年11月21日；文件大小约145千字节)。
技术介绍
重组病毒载体，包括腺相关病毒载体(AAV)，可用作基因递送剂，并且是人类基因疗法的有力工具。使用AAV，可在体内和体外的各种细胞中实现高频稳定的DNA整合和表达。与一些其他病毒载体系统不同，AAV不需要活跃的细胞分裂来稳定整合到靶细胞中。可使用病毒生产细胞系在培养物中产生重组AAV载体。重组AAV的产生通常需要细胞中三种元件的存在：1)包含转基因的核酸，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸，所述核酸从5’至3’包含：/n5’反向末端重复序列(ITR)；/n启动子；/n转基因序列；/n多聚腺苷酸化信号；以及/n3’ITR；/n其中所述转基因序列编码弗氏共济失调蛋白(FXN)蛋白。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181121 US 62/7702021.一种核酸，所述核酸从5’至3’包含：
5’反向末端重复序列(ITR)；
启动子；
转基因序列；
多聚腺苷酸化信号；以及
3’ITR；
其中所述转基因序列编码弗氏共济失调蛋白(FXN)蛋白。


2.如权利要求1所述的核酸，其中所述5’ITR和所述3’ITR中的至少一者的长度是约110至约160个核苷酸。


3.如权利要求1或2所述的核酸，其中所述5’ITR与所述3’ITR的长度相同。


4.如权利要求1或2所述的核酸，其中所述5’ITR和所述3’ITR具有不同的长度。


5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸，其中所述5’ITR和所述3’ITR中的至少一者分离自或源自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAVrh32.33、AAVrh74、禽AAV或牛AAV的基因组。


6.如权利要求1所述的核酸，其中所述5’ITR包含SEQIDNO:1的序列，或与其至少95％同一的序列。


7.如权利要求1-6中任一项所述的核酸，其中所述3’ITR包含SEQIDNO:2的序列，或与其至少95％同一的序列。


8.如权利要求1-7中任一项所述的核酸，其中所述3’ITR包含SEQIDNO:3的序列，或与其至少95％同一的序列。


9.如权利要求1-8中任一项所述的核酸，其中所述启动子驱动所述转基因的表达。


10.如权利要求1-9中任一项所述的核酸，其中所述启动子是组成型启动子。


11.如权利要求1-9中任一项所述的核酸，其中所述启动子是诱导型启动子。


12.如权利要求1-11中任一项所述的核酸，其中所述启动子是组织特异性启动子。


13.如权利要求1-12中任一项所述的核酸，其中所述启动子选自由以下组成的组：CMV启动子、SV40早期启动子、SV40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子、多角体蛋白启动子、鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子、EF-1α启动子、EF-1α短启动子、EF-1α核心启动子、二氢叶酸还原酶(DHFR)启动子、GUSB240启动子、GUSB379启动子和磷酸甘油激酶(PGK)启动子。


14.如权利要求13所述的核酸，其中所述启动子是鸡β-肌动蛋白(CBA)启动子。


15.如权利要求13所述的核酸，其中所述启动子是EF-1α启动子、EF-1α短启动子或EF-1α核心启动子。


16.如权利要求13所述的核酸，其中所述启动子是GUSB240启动子。


17.如权利要求13所述的核酸，其中所述启动子是GUSB379启动子。


18.如权利要求13所述的核酸，其中所述启动子是PGK启动子。


19.如权利要求1-12中任一项所述的核酸，其中所述启动子包含选自SEQIDNO:6-12中任一者的序列，或与其至少95％同一的序列。


20.如权利要求1-19中任一项所述的核酸，其中所述FXN蛋白是人FXN蛋白。


21.如权利要求1-20中任一项所述的核酸，其中所述FXN蛋白具有SEQIDNO:65的序列，或与其至少95％同一的序列。


22.如权利要求1至21中任一项所述的核酸，其中所述转基因序列是CpG优化的。


23.如权利要求1-21中任一项所述的核酸，其中所述转基因序列包含SEQIDNO:19或20，或与其至少95％同一的序列。


24.如权利要求1-24中任一项所述的核酸，其中所述核酸包含紧邻所述转基因序列的5’的Kozak序列。


25.如权利要求24所述的核酸，其中所述Kozak序列包含SEQIDNO:17或18的序列，或与其至少95％同一的序列。


26.如权利要求1-25中任一项所述的核酸，其中所述聚腺苷酸化信号选自猿猴病毒40(SV40)、人α-珠蛋白、兔α-珠蛋白、人β-珠蛋白、兔β-珠蛋白、人胶原蛋白、多瘤病毒、人生长激素(hGH)和牛生长激素(bGH)的聚腺苷酸化...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·托马斯，D·迪斯姆克，
申请(专利权)人：斯特里迪比奥公司，
类型：发明
国别省市：美国;US