AAV转移盒制造技术

本文描述了用于生产重组腺相关病毒(rAAV)载体的AAV转移盒和质粒。所公开的盒和质粒包含一种或多种转基因，所述一种或多种转基因在改善、治疗和/或预防一种或多种疾病或障碍诸如C1型尼曼

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】AAV转移盒
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年10月18日提交的美国临时申请号62/923,253以及2019年10月17日提交的美国临时申请号62/916,749的优先权，将其各自通过引用以其整体并入本文。
[0003]关于序列表的声明
[0004]与本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本，并且通过引用特此并入本说明书。含有序列表的文本文档的名称为STRD_015_02WO_SeqList_ST25.txt。文件约67.6kb，创建于2020年10月14日，并且以电子方式提交。


[0005]本公开文本涉及分子生物学和基因疗法领域。更具体地，本公开文本涉及用于生产重组病毒载体的组合物和方法。

技术介绍

[0006]C1型尼曼
‑
匹克病(Niemann
‑
Pick Disease)(NPC1)是一种以内溶酶体隔室中胆固醇积聚为特征的神经退行性障碍。它是由编码NPC1(一种介导细胞内胆固醇运输的内溶酶体蛋白)的基因的突变引起的。
[0007]NPC1可能存在于婴儿、儿童或成人中。新生儿可能出现腹水和由肝脏浸润引起的严重肝脏疾病和/或由肺部浸润引起的呼吸衰竭。没有肝脏或肺部疾病的其他婴儿具有张力减退和发育迟缓。典型表现发生在中晚儿童期，伴有隐匿性共济失调发作、垂直核上凝视麻痹(VSGP)、和痴呆。肌张力障碍和癫痫是常见的。构音障碍和吞咽困难最终变得残疾，使口服喂养成为不可能的；通常在吸入性肺炎的第二或第三个十年的晚期中发生死亡。成人更有可能出现痴呆或精神症状。
[0008]在NPC1动物模型中，2
‑
羟丙基
‑
β
‑
环糊精(HPBCD)已显示会减少胆固醇和脂质的积聚并且延长存活期。然而，没有被食品药品监督管理局(FDA)批准用于NPC1的疗法。因此，迫切需要用于治疗、治愈和/或预防NPC1的组合物和方法。

技术实现思路

[0009]本文描述了用于生产用于递送核酸(例如，包含转基因的核酸)的重组腺相关病毒(rAAV)载体的AAV转移盒、核酸和质粒。所公开的盒、核酸和质粒包含可用于表达一种或多种转基因的序列，所述转基因在改善、治疗和/或预防一种或多种疾病或障碍诸如NPC1方面具有治疗功效。
[0010]在一些实施方案中，本公开文本提供了一种腺相关病毒(AAV)转移盒，所述转移盒包含5
’
反向末端重复序列(ITR)、启动子、转基因、聚腺苷酸化信号、和3
’
ITR，其中所述转移盒包含内含子序列。在一些实施方案中，所述内含子序列位于所述启动子与所述转基因之间。在一些实施方案中，所述转基因编码所述NPC1蛋白。在一些实施方案中，所述AAV转移盒包含序列SEQ ID NO:14
‑
19中的任一个。
[0011]在一些实施方案中，本公开文本提供了一种重组AAV载体，所述重组AAV载体包含蛋白质衣壳和被所述蛋白质衣壳包衣壳的核酸，其中所述核酸包含转移盒，所述转移盒包含从5
’
至3
’
：5
’
反向末端重复序列(ITR)；启动子；转基因；聚腺苷酸化信号；和3
’
ITR。在一些实施方案中，所述转移盒包含内含子序列，诸如位于所述启动子与所述转基因之间的内含子序列。在一些实施方案中，所述转基因编码所述NPC1蛋白。在一些实施方案中，所述AAV转移盒包含序列SEQ ID NO:14
‑
19中的任一个。
[0012]在一些实施方案中，5
’
ITR和3
’
ITR中的至少一个的长度为约110至约160个核苷酸。在一些实施方案中，5
’
ITR的长度与3
’
ITR相同。在一些实施方案中，5
’
ITR和3
’
ITR具有不同的长度。5
’
ITR和3
’
ITR中的至少一个可以分离自或源自，例如，AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAVrh32.33、AAVrh74、禽AAV或牛AAV的基因组。在一些实施方案中，5
’
ITR包含序列SEQ ID NO:3或与其具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。在一些实施方案中，3
’
ITR包含序列SEQ ID NO:4或与其具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。
[0013]在一些实施方案中，所述启动子是组成型启动子。在一些实施方案中，所述启动子是诱导型启动子。在一些实施方案中，所述启动子是组织特异性启动子。在一些实施方案中，所述启动子可以选自CBA启动子、GUSB240启动子、GUSB379启动子、HSVTK启动子、CMV启动子、SV40早期启动子、SV40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠类乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、劳斯氏肉瘤病毒(RSV)启动子、多角体蛋白启动子、鸡β
–
肌动蛋白(CBA)启动子、EF
‑
1α启动子、EF
‑
1短启动子、二氢叶酸还原酶(DHFR)启动子和磷酸甘油激酶(PGK)启动子。在一些实施方案中，所述启动子选自CBA启动子、GUSB240启动子、GUSB379启动子和HSVTK启动子。在一些实施方案中，所述启动子包含与SEQ ID NO:5
‑
8中任一个具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的序列。
[0014]在一些实施方案中，所述内含子序列是嵌合序列或杂合序列。在一些实施方案中，所述内含子序列包含分离自或源自SV40的序列。在一些实施方案中，所述内含子序列包含序列SEQ ID NO:10
‑
11中的任一个。
[0015]NPC1蛋白可以是例如人NPC1蛋白。在一些实施方案中，NPC1蛋白具有与人NPC1蛋白的序列具有至少90％、至少95％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。在一些实施方案中，NPC1蛋白包含序列SEQ ID NO:1或与其具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。在一些实施方案中，NPC1蛋白包含序列SEQ ID NO:20或与其具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。在一些实施方案中，NPC1蛋白具有如UniProt登录号O15118所示的序列，将其通过引用以其整体并入本文。
[0016]在一些实施方案中，所述转基因包含序列SEQ ID NO:2或与其具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的序列。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种腺相关病毒(AAV)转移盒，所述腺相关病毒转移盒包含从5
’
至3
’
：5
’
反向末端重复序列(ITR)；鸡β
‑
肌动蛋白启动子；转基因；聚腺苷酸化信号；和3
’
ITR；其中所述转移盒包含内含子序列；并且其中所述转基因编码所述NPC1蛋白。2.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述5
’
ITR包含序列SEQ ID NO:3。3.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述3
’
ITR包含序列SEQ ID NO:4。4.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述启动子包含序列SEQ ID NO:5。5.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述内含子序列是SV40内含子。6.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述内含子序列包含序列SEQ ID NO:10。7.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述NPC1蛋白是人NPC1蛋白。8.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述NPC1蛋白包含序列SEQ ID NO:1。9.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述转基因包含序列SEQ ID NO:2。10.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述聚腺苷酸化信号是SV40聚腺苷酸化信号。11.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述聚腺苷酸化信号包含序列SEQ ID NO:12。12.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述盒包含增强子。13.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述AAV转移盒包含序列SEQ ID NO:14。14.根据权利要求1所述的AAV转移盒，其中所述AAV转移盒包含序列SEQ ID NO:15
‑
19中的任一个。15.一种质粒，所述质粒包含根据权利要求1
‑
14中任一项所述的AAV转移盒。16.一种核酸，所述核酸包含从5
’
至3
’
：5
’
反向末端重复序列(ITR)；启动子；转基因；聚腺苷酸化信号；和3
’
ITR；其中所述核酸包含内含子序列；其中所述转基因编码氨基酸序列SEQ ID NO:1。17.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求1

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：斯特里迪比奥公司，
类型：发明
国别省市：