一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法技术

本发明专利技术属于分析检测技术领域，具体涉及一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法。本发明专利技术的检测方法采用液相色谱‑质谱联用的方法对聚氧乙烯(35)蓖麻油样品进行检测，其中，色谱条件为：采用液相色谱‑质谱联用的方法对聚氧乙烯(35)蓖麻油样品进行检测，其中，色谱条件为：由含有0.9‑1.1g/L乙酸铵的有机溶液与水按体积比(85‑95):(15‑5)组成流动相，色谱柱为C18柱。本发明专利技术提供的检测方法具有很好的准确性、重复性，且检测限低，适用于聚氧乙烯(35)蓖麻油样品中游离脂肪酸含量的检测。实现了针对聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法
本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法。
技术介绍
紫杉醇的作用被认为是一种有丝分裂纺锤体毒素以及细胞复制的强效抑制剂，是一种具有抗肿瘤活性的药物活性物质。紫杉醇的其中一种剂型为注射液，其已被百时美施贵宝公司商品化，商品名为泰素(TAXOL)。泰素(TAXOL)的优点包括稳定性很强，然而，泰素(TAXOL)的组成成分及其制备方法未被公开，并不属于现有技术。紫杉醇是一种难溶于水的化合物，为了开发新的紫杉醇注射液，人们尝试使用两种溶剂共同溶解紫杉醇，其中以乙醇作为极性溶剂，以聚氧乙烯(35)蓖麻油作为增溶剂。聚氧乙烯(35)蓖麻油为甘油蓖麻酸酯与环氧乙烷反应得到，其中还含少量聚乙二醇蓖麻酸酯、游离乙二醇，本身为一种混合物，成分复杂。其中，标准质量的聚氧乙烯(35)蓖麻油已被巴斯夫(BASF)公司商品化，商品名为CremophorEL，化学成分是聚氧乙烯甘油醇三酯。现有的聚氧乙烯(35)蓖麻油产品中各种成分的含量(例如酸性化合物)会对配制成的紫杉醇的性能造成影响，因此，为了建立质量标准，进行质量控制，还需要开发一种合适的方法对聚氧乙烯(35)蓖麻油中的酸性化合物含量进行检测。现有技术中尚未有建立这样的检测方法。聚氧乙烯(35)蓖麻油中的酸性化合物主要为游离脂肪酸。这些脂肪酸本身沸点高，且无紫外吸收，现有技术用于检测脂肪酸的方法基本是衍生成酯后用气相色谱仪测定，然而这个方法用于聚氧乙烯(35)蓖麻油中的游离脂肪酸可操作性不强。这是由于聚氧乙烯(35)蓖麻油中的游离脂肪酸含量低，即使衍生出酯后也难以在众多酯类物质(包括聚氧乙烯(35)蓖麻油)中检测低含量的游离脂肪酸，干扰很大。同时，一般的衍生试剂可能会破坏聚氧乙烯(35)蓖麻油，生成蓖麻油酸，无法判断是游离的蓖麻油酸还是破坏出的蓖麻油酸，造成检测到的结果不可信。专利“AU2003256786B2”公开了一种采用醇和水作为溶剂，利用液相色谱分离杂质，纯化聚氧乙烯(35)蓖麻油的方法。然而，聚氧乙烯(35)蓖麻油中成分非常复杂，且游离脂肪酸种类较多且含量极低，将各种游离脂肪酸一一分离出来实现定量检测是非常困难的。因而，该专利中给出的分离方法和条件并不能够适用于聚氧乙烯(35)蓖麻油样品中游离脂肪酸的检测。
技术实现思路
针对现有技术中的困难，本专利技术提供一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法，目的在于：针对应用于配制紫杉醇注射液的聚氧乙烯(35)蓖麻油，实现对其中游离脂肪酸含量的检测。一种聚氧乙烯(35)蓖麻油，以十七酸为内标物，采用液相色谱-质谱联用的方法检测，检出游离脂肪酸及其相对保留时间如下：蓖麻油酸0.327±5％；月桂酸0.372±5％；十四酸0.526±5％；亚麻酸0.538±5％；亚油酸0.667±5％；棕榈酸0.801±5％；油酸0.878±5％；硬脂酸1.295±5％；顺-11碳二十烯酸1.385±5％；花生酸2.135±5％；其中，色谱条件为：由含有0.9-1.1g/L乙酸铵的有机溶液与水按体积比(85-95)∶(15-5)组成流动相，色谱柱为C18柱。一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法，采用液相色谱-质谱联用的方法对聚氧乙烯(35)蓖麻油样品进行检测，其中，色谱条件为：由含有0.9-1.1g/L乙酸铵的有机溶液与水按体积比(85-95)∶(15-5)组成流动相，色谱柱为C18柱。优选的，所述有机溶液的溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯或乙腈中的至少一种，优选为甲醇；和/或，所述乙酸铵的浓度为1g/L。优选的，所述有机溶液与水按体积比90∶10组成流动相。优选的，所述聚氧乙烯(35)蓖麻油样品进样前用含有0.05-0.2wt.％甲酸的有机溶液稀释，优选的用含有0.1wt.％甲酸的甲醇溶液稀释，和/或，所述聚氧乙烯(35)蓖麻油样品与所述甲醇溶液的用量比例为4mg∶(0.5-2)ml，优选为4mg∶1ml。优选的，所述色谱条件还包括：所述色谱柱为YMCODS-A，和/或，柱温为30-40℃，优选为35℃，和/或，洗脱方式为等度洗脱，和/或，流速为0.4-0.6ml/min，优选为0.5ml/min，和/或，流动相的洗脱时间为25-50min，优选为35min，和/或，进样量为1-10μl优选为5μl。优选的，所述质谱条件包括：质谱的检测模式为SIM。优选的，所述质谱条件还包括：离子源为ESI源，和/或，干燥气温度为280-320℃，优选为300℃，和/或，流速为8-12L/min，优选为10L/min，和/或，雾化器压力为55-65psi，优选为60psi，和/或，鞘气温度为330-370℃，优选为350℃，和/或，流速9-13L/min，优选为11L/min，和/或，毛细管电压为3000-4000V，优选为3500V，和/或，喷嘴电压为400-600V，优选为500V，和/或，驻留时间80-120，优选为100，和/或，Fragmentor为110-160V，优选为135V，和/或，加速电压为4-6V，优选为5V。优选的，所述游离脂肪酸选自蓖麻油酸、月桂酸、十四酸、亚麻酸、亚油酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸、顺-11碳二十烯酸和花生酸中的至少一种。优选的，以十七酸为内标物，所述游离脂肪酸的相对保留时间如下：蓖麻油酸0.327±5％；月桂酸0.372±5％；十四酸0.526±5％；亚麻酸0.538±5％；亚油酸0.667±5％；棕榈酸0.801±5％；油酸0.878±5％；硬脂酸1.295±5％；顺-11碳二十烯酸1.385±5％；花生酸2.135±5％。优选的，所述游离脂肪酸的质荷比为：蓖麻油酸297.1、月桂酸199.1、十四酸227.1、亚麻酸277.1、亚油酸279.1、棕榈酸255.1、油酸281.1、硬脂酸283.1、顺-11碳二十烯酸309.1、花生酸311.1。采用本专利技术的技术方案后能够保证蓖麻油酸、油酸和棕榈酸酸等脂肪酸有效分离且不受主要成分聚氧乙烯(35)蓖麻油的干扰，实现了针对聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的含量进行准确的检测，从而有效地对聚氧乙烯(35)蓖麻油进行质控。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为实施例1中对照品定位溶液的TIC图；出峰顺序依次为蓖麻油酸、月桂酸、十四酸、亚麻酸、亚油酸、棕榈酸、油酸、十七酸、硬脂酸、顺-11碳二十烯酸、花生酸；图2为实施例1中对照品定位溶液的蓖麻油酸EIC图；图3为实施例1中对照品定位溶液的月桂酸EIC图；<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种聚氧乙烯(35)蓖麻油，其特征在于：以十七酸为内标物，采用液相色谱-质谱联用的方法检测，检出游离脂肪酸及其相对保留时间如下：蓖麻油酸0.327±5％；月桂酸0.372±5％；十四酸0.526±5％；亚麻酸0.538±5％；亚油酸0.667±5％；棕榈酸0.801±5％；油酸0.878±5％；硬脂酸1.295±5％；顺-11碳二十烯酸1.385±5％；花生酸2.135±5％；/n其中，色谱条件为：由含有0.9-1.1g/L乙酸铵的有机溶液与水按体积比(85-95):(15-5)组成流动相，色谱柱为C18柱。/n

【技术特征摘要】
1.一种聚氧乙烯(35)蓖麻油，其特征在于：以十七酸为内标物，采用液相色谱-质谱联用的方法检测，检出游离脂肪酸及其相对保留时间如下：蓖麻油酸0.327±5％；月桂酸0.372±5％；十四酸0.526±5％；亚麻酸0.538±5％；亚油酸0.667±5％；棕榈酸0.801±5％；油酸0.878±5％；硬脂酸1.295±5％；顺-11碳二十烯酸1.385±5％；花生酸2.135±5％；
其中，色谱条件为：由含有0.9-1.1g/L乙酸铵的有机溶液与水按体积比(85-95):(15-5)组成流动相，色谱柱为C18柱。


2.一种聚氧乙烯(35)蓖麻油中游离脂肪酸的检测方法，其特征在于，采用液相色谱-质谱联用的方法对聚氧乙烯(35)蓖麻油样品进行检测，其中，色谱条件为：由含有0.9-1.1g/L乙酸铵的有机溶液与水按体积比(85-95):(15-5)组成流动相，色谱柱为C18柱。


3.按照权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述有机溶液的溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯或乙腈中的至少一种；和/或，所述乙酸铵的浓度为1g/L；和/或，所述有机溶液与水按体积比90:10组成流动相。


4.按照权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述聚氧乙烯(35)蓖麻油样品进样前用含有0.05-0.2wt.％甲酸的有机溶液稀释，优选的用含有0.1wt.％甲酸的甲醇溶液稀释，和/或，所述聚氧乙烯(35)蓖麻油样品与所述甲醇溶液的用量比例为4mg:(0.5-2)ml，优选为4mg:1ml。


5.按照权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件还包括：所述色谱柱为YMCODS-A，和/或，柱温为30-40℃，优选为35℃，和/或，洗脱方式为等度洗脱，和/或，流速为0.4-0.6ml/min，优选为0.5ml/min，和/或，流动相的洗脱时间为25-50min，优选为35min，和/或，进样量为1-10μl优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴琳，吴美玲，李彬，胡和平，丁兆，
申请(专利权)人：四川汇宇制药股份有限公司，四川汇宇海玥医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51