一种提高细胞活性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高细胞活性的方法，所述方法操作如下：所述细胞在含有小分子化合物组合的培养液中培养；所述小分子化合物组合为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA。本发明专利技术能够解决现有技术中细胞在诱导分化过程中凋亡的问题，成纤维细胞特异性蛋白‑1表达降低，提高了细胞增殖能力和活力。

【技术实现步骤摘要】
一种提高细胞活性的方法本案由申请号：201610976158.1，名称：一种用于体细胞去分化的靶点调控系统、试剂盒及应用的专利技术专利分案而来。
本专利技术涉及细胞生物学，组织工程和再生医学领域，尤其涉及一种提高细胞活性的方法。
技术介绍
干细胞是人体及其各种组织细胞的来源，在人类疾病的细胞治疗、再生医学、组织工程、药物研发、抗衰老、美容等诸多领域研究中均具有重要意义。但由于胚胎干细胞存在伦理问题与安全隐患；各种类型的成体干细胞数量稀少、来源有限、难以富集、获取过程复杂、受供体健康状态限制、细胞易老化、无法大量传代扩增等局限，因而均未能广泛应用。多种分化的细胞如皮肤成纤维细胞具有来源丰富、易于获取并易于在体外长期大量扩增培养的优点。近年来，利用细胞重编程技术已经可以把分化的细胞如皮肤成纤维细胞直接诱导为成肌细胞、神经元、肝细胞、成骨细胞等多种不同类型的功能细胞，或先诱导为多能干细胞后，再进一步定向诱导为相应的功能细胞。研究表明，采用细胞重编程技术获得的目标细胞不再保持源细胞的基因表达谱等分子特征与细胞功能，而获得了相应目标细胞的稳定典型的分子特征与细胞功能，目前已逐渐应用于疾病模型研究、临床治疗研究与组织工程研究，具有广阔的应用前景。实现高效、快速、特异性的细胞重编程，需要根据源细胞的分子特征使之同时或分步与一种或几种外源性DNA或/和RNA或/和转录因子或/和重组蛋白或/和细胞因子或/和胞外基质或/和小分子化合物及其组合接触，以便能按时序激活/抑制能决定细胞表型的关键细胞信号通路/网络，最终实现既定方向的细胞重编程，获得目标细胞。目前文献已见众多关于不同类型分化的细胞不同重编程方案的报道，具体涉及不同的DNA或/和RNA或/和转录因子或/和重组蛋白或/和细胞因子或/和胞外基质或/和小分子化合物及其组合类型。其中需要导入外源性基因的细胞重编程方案已相对较为确定，但完全采用小分子化合物诱导的细胞重编程特别是转分化方案却远未成熟稳定。如申请号为201410075246.5的中国专利申请提供了一种把分化的细胞诱导转分化为神经干细胞的方法及其应用。具体地，该申请涉及采用组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂、糖原合成酶激酶(GSK-3)抑制剂和转化生长因子β(TGF-β)信号通路抑制剂的组合，在正常生理低氧环境下诱导成纤维细胞、上皮细胞等分化的细胞转分化为具有良好多能性及传代稳定性的神经干细胞。申请号为201610213644.8的中国专利申请提供了一种诱导成纤维细胞转分化为心肌细胞的诱导培养基、方法及其应用，所述诱导培养基包含基础培养基和诱导小分子组合，所述诱导小分子组合为6TCFOW或SCFOV，其中6为E61541、T为苯环丙胺、C为CHIR99021、F为毛喉素、O为Dorsomorphin、W为IWR-1、S为SB431542、V为丙戊酸。该申请诱导培养基能够将成纤维细胞诱导转分化为心肌细胞。目前，通过采用单纯小分子化合物或其组合诱导人类分化的细胞如皮肤成纤维细胞获得施旺细胞(THOMAEC，etal，2014)、神经细胞(HUW，etal，2015)、胰岛细胞(ShengDing，etal，2015)的成果已陆续见诸报道，但上述研究仍存在实验不易重复、效率不高、转分化系统成份欠清楚作用欠稳定等问题。由于完全采用小分子诱导体细胞转分化较iPS等细胞重编程技术具有更高的安全性、稳定性与临床实用性，因而研发对采用小分子诱导体细胞转分化为功能性目标细胞策略具有明确作用、成份清晰、靶点清楚、高效廉价、成熟稳定、易于质控及规模化生产的基础性诱导系统对科学研究及行业发展均十分重要。
技术实现思路
本专利技术提供了一种提高细胞活性的方法。本专利技术为能够提高细胞活力，提高转分化的效率。本专利技术的技术方案如下：一种提高细胞活性的方法，所述方法操作如下：所述细胞在含有小分子化合物组合的培养液中培养；所述小分子化合物组合为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA。作为对上述方案的进一步描述：所述细胞在含有小子化合物组合的培养液中培养后细胞增殖能力增高，和/或成纤维细胞特异性蛋白-1表达降低。作为对上述方案的进一步描述：所述细胞为成纤维细胞。作为对上述方案的进一步描述：所述小分子化合物的浓度分别为：forskolin为2μM～20μM，Repsox浓度为2～15uM，CHIR99021浓度为1μM～10μM，VPA浓度为0.5mM～1.5mM，EPZ004777浓度为3～8μM，Go6983浓度为1～15μM。本专利技术提供了一种靶点调控系统，所述靶点调控系统对体细胞进行以下调控：抑制PKC活性，以及抑制DNMT活性和/或抑制HMT活性和/或抑制组蛋白去甲基化酶活性；对应调控的关键靶点包括PKC，以及DNMT和/或HMT和/或组蛋白去甲基化酶；所述的体细胞为分化的细胞。进一步地，所述靶点调控系统还对体细胞进行以下调控：抑制TGF-β的信号通路，激活WNT/β-catenin信号通路和激活cAMP信号通路；作为优选，所述TGF-β信号通路为I型TGF-β受体参与的信号通路；所述的cAMP信号通路为EPAC/RAP1信号通路。对应调控的关键靶点进一步包括TGF-β受体，WNT/β-catenin和cAMP。进一步地，所述靶点调控系统还对体细胞进行以下调控：抑制ROCK(Rho-associatedproteinkinase)的信号通路，和/或抑制JNK的信号通路，和/或抑制DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferas，DNMT)的活性，和/或激活RA(RetinoicacidReceptor)信号通路，和/或抑制赖氨酸脱乙酰基酶活性，和/或抑制组蛋白去甲基化酶的活性和/或抑制组蛋白甲基转移酶(HMT)的活性；对应调控的关键靶点进一步包括ROCK，和/或JNK，和/或DNA甲基转移酶，和/或RAR受体，和/或赖氨酸脱乙酰基酶，和/或HMT，和/或组蛋白去甲基化酶。所述靶点调控系统包括调控所述关键靶点的细胞因子，小分子化合物，转录因子，胞外基质，重组蛋白，DNA和RNA中的至少一种。进一步地，所述靶点调控系统包括调控所述关键靶点的小分子化合物组合，所述小分子化合物组合包括PKC抑制剂，以及DNMT抑制剂、HMT抑制剂和组蛋白去甲基化酶抑制剂中的至少一种。所述小分子化合物组合还包括TGF-β受体抑制剂，WNT/β-catenin激动剂和cAMP激动剂。所述小分子化合物组合还包括ROCK抑制剂，JNK抑制剂，DNA甲基转移酶抑制剂，RAR受体激动剂，赖氨酸脱乙酰基酶抑制剂，组蛋白去甲基化酶抑制剂，组蛋白甲基转移酶(HMT)抑制剂和ascorbate中的至少一种。所述赖氨酸脱乙酰基酶抑制剂包括sodiumphenylbutyra本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高细胞活性的方法，其特征在于，所述方法操作如下：所述细胞在含有小分子化合物组合的培养液中培养；所述小分子化合物组合为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高细胞活性的方法，其特征在于，所述方法操作如下：所述细胞在含有小分子化合物组合的培养液中培养；所述小分子化合物组合为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+EPZ004777+Go6983，或者为forskolin+Repsox+CHIR99021+VPA。


2.根据权利要求1所述的提高细胞活性的方法，其特征在于，所述细胞在含有小子化合物组合的培...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡敏，李燕皎，
申请(专利权)人：云南济慈再生医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53