Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用，Coro1a蛋白作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用，以及抗肿瘤药物。本发明专利技术经研究发现，敲除Coro1a基因之后能通过抑制TEXs产生，增强机体的抗肿瘤免疫，从而对肿瘤产生明显的治疗效果；将Coro1a基因过表达后能增加外泌体分泌。

【技术实现步骤摘要】
Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
外泌体是各种活细胞分泌的直径介于30-150纳米具有脂质双分子层结构的小囊泡。外泌体通过内体途径产生。质膜向内凹陷形成早期内体，早期内体相互融合并向内出芽，形成含有大量腔内囊泡的晚期内体/多囊泡体。之后，多囊泡体与质膜融合，释放腔内囊泡至胞外形成外泌体。大量的研究证据表明，肿瘤细胞来源的外泌体(Tumorcell-derivedexosomes，TEXs)与肿瘤的转移密切相关。TEXs能“驯化”骨髓细胞，使骨髓细胞获得促血管生成的能力，促进形成肿瘤前转移小生境。富含整合素的TEXs能够通过整合素粘附到特定的肿瘤转移器官，从而介导肿瘤细胞往特定的器官转移。TEXs的RNAs可活化肺泡上皮细胞的TLR3信号，促进对中性粒细胞的招募，从而营造了肺前转移小生境。申请人前期的研究也表明，TEXs通过膜表面HSP72/105活化树突状细胞(Dendriticcells，DCs)的TLR2/4信号，促进其分泌IL-6，随后IL-6作用于肿瘤细胞，促进肿瘤细胞MMP9的表达，从而介导肿瘤转移的发生(ShenYY,GuoDF,WengLX,WangSJ,MaZY,YangYS,etal.Tumor-derivedexosomeseducatedendriticcellstopromotetumormetastasisviaHSP72/HSP105-TLR2/TLR4pathway.Oncoimmunology2017,6(12).)。此外，TEXs在肿瘤免疫抑制微环境的形成过程也具有重要作用。TEXs含有较高水平的FasL，可以通过活化Fas信号，诱导细胞毒性T细胞的大量凋亡(AbusamraAJ,ZhongZ,ZhengX,LiM,IchimTE,ChinJL,etal.TumorexosomesexpressingFasligandmediateCD8+T-cellapoptosis.BloodCellsMolDis.2005,35(2):169-173.)。TEXs可通过下调NK细胞活化性NKG2D受体抑制NK细胞的抗肿瘤活性(ClaytonA,MitchellJP,CourtJ,LinnaneS,MasonMD,TabiZ.Humantumor-derivedexosomesdown-modulateNKG2Dexpression.JImmunol.2008,180(11):7249-7258.)。TEXs携带膜PD-L1，能够通过PD-L1/PD-1抑制抗肿瘤T细胞反应(1、ChenG,HuangAC,ZhangW,ZhangG,WuM,XuW,etal.ExosomalPD-L1contributestoimmunosuppressionandisassociatedwithanti-PD-1response.Nature2018,560(7718):382-386.；2、PoggioM,HuTY,PaiCC,ChuB,BelairCD,ChangA,etal.SuppressionofexosomalPD-L1inducessystemicanti-tumorimmunityandmemory.Cell2019,177(2):414-427.)。TEXs可通过其含有的IL-6和TGF-β1分别抑制树突细胞的分化及成熟；另外，TEXs还可通过诱导调节性T细胞(RegulatoryTcells,Tregs)及髓系来源的抑制性细胞(Myeloid-derivedsuppressorcells,MDSCs)，抑制M1型并促进M2型巨噬细胞介导肿瘤免疫抑制微环境的形成(LiuYF,GuY,CaoXT.Theexosomesintumorimmunity.Oncoimmunology2015,4(9).)。因此，抑制TEXs生成能抑制肿瘤转移并有效激发机体抗肿瘤免疫。
技术实现思路
本专利技术提供了一种调控TEXs生成的新靶点及其在肿瘤治疗中的应用。本专利技术首先提供了Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，所述的应用，所述抗肿瘤药物用于降低Coro1a基因的表达。本专利技术又提供了Coro1a蛋白作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。优选的，所述的应用，所述抗肿瘤药物用于抑制Coro1a蛋白的活性。本专利技术又提供了一种抗肿瘤药物，为以下一种：(1)具有降低Coro1a基因表达作用的siRNA或相应的shRNA；(2)具有降低Coro1a基因表达作用的小分子药物；(3)具有抑制Coro1a蛋白活性的小分子药物或抗体。优选的，所述的抗肿瘤药物，为具有降低Coro1a基因表达作用的siRNA，siRNA序列的正反链分别为：5’-UGACAGCUCUAUCCGGUAUUUdTdT-3’；5’-AAAUACCGGAUAGAGCUGUCAdTdT-3’，在做干扰时只需要选择其中一条序列使用即可。本专利技术还提供了Coro1a基因在非疾病治疗为目的的调控外泌体分泌中的应用。优选的，所述的应用，通过敲除Coro1a基因或者降低Coro1a基因表达来抑制外泌体分泌，或者通过Coro1a基因的过表达来提高外泌体分泌。本专利技术经研究发现，敲除Coro1a基因之后能通过抑制TEXs产生，增强机体的抗肿瘤免疫，从而对肿瘤产生明显的治疗效果；将Coro1a基因过表达后能增加外泌体分泌。附图说明图1为体外分别在MC38和B16-F10细胞中敲低和过表达Coro1a；在HEK293细胞过表达Coro1a，检测相应细胞外泌体的分泌水平，其中，A：免疫印迹鉴定MC38和B16-F10细胞中Coro1a的敲低效果；B：BCA法鉴定通过梯度离心及超速离心提取的相同数量对照干扰(NCsiRNA)或Coro1a干扰(Coro1asiRNA)的MC38和B16-F10细胞分泌外泌体的蛋白量；C：为免疫印迹鉴定MC38和B16-F10细胞中Coro1a的过表达效果；D：为BCA法鉴定通过梯度离心及超速离心提取的相同数量对照或Coro1a过表达的MC38和B16-F10细胞分泌外泌体的蛋白量。E：为免疫印迹鉴定HEK293细胞中Coro1a的过表达效果；F：为BCA法鉴定通过梯度离心及超速离心提取的相同数量对照或Coro1a过表达的HEK293细胞分泌外泌体的蛋白量。***表示两者在p<0.001具有显著性差异(下同)，ns表示两者没有显著性差异(下同)。图2为敲除Coro1a的MC38和B16-F10细胞株的建立及对其分泌外体水平的检测，其中，A：免疫印迹鉴定MC38-Coro1a-/-和B16-F10-Coro1a-/-细胞中Coro1a的敲除效果；B：为BCA法鉴定通过梯度离心及超速离心提取的相同数量MC38和MC38-Coro1a-/-细胞分泌外泌体的蛋白量及B16-F10和B16-F10-Coro1a-/-细胞分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.Coro1a基因作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物用于降低Coro1a基因的表达。


3.Coro1a蛋白作为靶点在制备抗肿瘤药物中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物用于抑制Coro1a蛋白的活性。


5.一种抗肿瘤药物，其特征在于，为以下一种：
(1)具有降低Coro1a基因表达作用的siRNA或相应的shRNA；
(2)具有降低Coro1a基因表达作用的小分子药物；
(3)具有抑制Cor...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡志坚，王建莉，费雪枫，李志杰，杨迪雅，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33