针对禽流感病毒H5亚型的免疫原性组合物制造技术

本发明专利技术涉及兽医学领域。本发明专利技术提供了免疫原性组合物，其包含禽流感病毒H5亚型的血凝素蛋白。还提供的是区别由AIV自然感染的动物与用本发明专利技术的免疫原性组合物接种疫苗的动物的方法。本发明专利技术的免疫原性组合物可以对家禽提供更广泛、更有效、持久和早期发作的保护。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对禽流感病毒H5亚型的免疫原性组合物
本专利技术涉及兽医学领域，具体地涉及针对禽流感病毒H5亚型的免疫原性组合物。
技术介绍
禽流感病毒(AIV)属于甲型流感病毒的类型，并且它天然存在于全世界的野生水鸟中，并且可以感染驯养家禽和其它鸟类包括哺乳动物。甲型流感病毒基于病毒的表面上的两种蛋白质分成亚型：血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。存在18种已知的HA亚型和11种已知的NA亚型。HA和NA蛋白的许多不同组合是可能的。例如，“H5N1病毒”意指该病毒具有HA亚型5和NA亚型1。存在九种已知的H5病毒亚型(H5N1、H5N2、H5N3、H5N4、H5N5、H5N6、H5N7、H5N8和H5N9，在本文中被称为"H5Nx")。全世界在野生鸟类和家禽中鉴定的大多数H5病毒是低致病性禽流感病毒，但一些含有H5的病毒属于高致病性禽流感(HPAI)病毒。H5Nx病毒快速进化，并且导致不同进化枝之间相当大的抗原变异，其揭示了不同H5谱系中的进化关系。用HPAI病毒感染家禽可以引起具有高死亡率的严重疾病。对于具有地方流行性H5Nx病毒的国家，已使用疫苗接种来控制该疾病。最常见的AIV疫苗是含有灭活全病毒的疫苗(灭活疫苗)，其通过将整个病毒灭活并用适当的佐剂乳化进行制备。然而，灭活疫苗不能提供针对不同进化枝的广泛保护。由于AIV的快速进化，人们必须不断地开发针对不同进化枝的新疫苗。此外，灭活疫苗的生产需要大量的活AIV，并且因此生物安全性是严重的问题。HA蛋白是甲型流感病毒的受体结合和膜融合糖蛋白。已知HA蛋白能够引发保护性抗体，并且因此研究人员变得对基于重组HA蛋白的亚单位疫苗的开发感兴趣。WO2007/019094公开了在受体结合位点中包含氨基酸取代的HA分子，与在其受体结合位点中缺少氨基酸取代的HA分子相比，所述氨基酸取代使得HA分子更具抗原性。WO2008/052173公开了包含一些氨基酸突变的禽流感病毒H5亚型的血凝素蛋白(下文被称为“AIVH5亚型的HA蛋白”或“H5HA蛋白”)，并且包含佐剂化的H5HA蛋白的疫苗可以提供免于由甲型流感病毒引起的临床疾病的预防。然而，上述公开内容与对不同进化枝的甲型流感病毒的更广泛保护无关。WO2013/148164公开了基于人H5N1和猪H1N1流感分离株，用于生成优化的H5N1和H1N1流感HA多肽的方法。还制备了包含优化的流感HA多肽的流感病毒样颗粒(VLP)。实验结果显示了，VLP可以在小鼠中引发可以识别两种不同进化枝的流感病毒的抗体应答，但保护效率仅为40-60％。需要开发疫苗，其可以对家禽提供针对AIVH5亚型更广泛、更有效、持久和早期发作的保护。
技术实现思路
本专利技术提供了免疫原性组合物，其包含禽流感病毒H5亚型的血凝素蛋白，其中所述血凝素蛋白包含：(a)氨基酸残基120N或120S、155N和223N或223S；以及(b)选自以下的一个或多个氨基酸残基：61D、87I、99A、102A、110N、136S、140D、149S、156T、157P、170N、172T、178R、190V、191L、200A、226V、243D、268Y、279A和298I；其中编号参考如SEQIDNO:1中所示的氨基酸残基。本专利技术还提供了制备免疫原性组合物的方法，其包括：(i)培养含有表达禽流感病毒H5亚型的血凝素蛋白的表达载体的细胞；并且(ii)收获整个细胞培养物；其中所述血凝素蛋白包含：(a)氨基酸残基120N或120S、155N和223N或223S；以及(b)选自以下的一个或多个氨基酸残基：61D、87I、99A、102A、110N、136S、140D、149S、156T、157P、170N、172T、178R、190V、191L、200A、226V、243D、268Y、279A和298I；其中编号参考如SEQIDNO:1中所示的氨基酸残基。还提供的是本专利技术的免疫原性组合物，其用于预防和/或治疗由禽流感病毒，优选由H5Nx引起的感染。在一个实施方案中，H5Nx是H5N1、H5N2和/或H5N6。在一个实施方案中，H5Nx是H5N1。在一个实施方案中，H5Nx是H5N2。在一个实施方案中，H5Nx是H5N6。在一个实施方案中，H5Nx是H5N1和H5N2。在一个实施方案中，H5Nx是H5N2和H5N6。还提供的是区别由AIV自然感染的动物与用本专利技术的免疫原性组合物接种疫苗的动物的方法。本专利技术的免疫原性组合物可以对家禽提供更广泛、更有效、持久和早期发作的保护。在一个实施方案中，本专利技术的免疫原性组合物对家禽提供更广泛的保护。在一个实施方案中，本专利技术的免疫原性组合物对家禽提供更有效的保护。在一个实施方案中，本专利技术的免疫原性组合物对家禽提供持久的保护。在一个实施方案中，本专利技术的免疫原性组合物对家禽提供早期发作的保护。具体实施方式在一个方面，本专利技术提供了包含H5HA蛋白的免疫原性组合物，其中所述H5HA蛋白包含：(a)氨基酸残基120N或120S、155N和223N或223S；以及(b)选自以下的一个或多个氨基酸残基：61D、87I、99A、102A、110N、136S、140D、149S、156T、157P、170N、172T、178R、190V、191L、200A、226V、243D、268Y、279A和298I；其中编号参考如SEQIDNO:1中所示的氨基酸残基。如本文使用的，术语“免疫原性组合物”，也称为“疫苗”，指包含引发针对组合物的免疫应答的至少一种抗原的组合物。宿主展示治疗性或保护性免疫应答，使得对新感染的抗性得到增强和/或临床体征的严重程度得到降低。H5HA蛋白的氨基酸序列通过一系列HA氨基酸序列比对、共有氨基酸序列的后续生成、以及在每个位置处最常见残基的分析进行设计。如本文使用的，术语“本专利技术的血凝素蛋白”、“AIVH5亚型的HA蛋白”和“H5HA蛋白”是可互换的。如本文使用的，SEQIDNO:1代表毒株A/duck/China/E319-2/03的HA蛋白的氨基酸序列，但其缺少氨基末端的信号肽(毒株A/duck/China/E319-2/03的HA蛋白的氨基酸序列也公开于WO2008/052173中)。SEQIDNO:1用作HA蛋白的标准序列，用于确定本专利技术的HA蛋白的氨基酸位置。如本文使用的，本专利技术的HA蛋白的氨基酸位置编号指如SEQIDNO:1中所示的氨基酸位置。例如，名称“120N或120S”意指在对应于SEQIDNO:1的位置120的位置处的N或S。“155N”意指在对应于SEQIDNO:1的位置155的位置处的N。“223N或223S”意指在对应于SEQIDNO:1的位置223的位置处的N或S。“61D”意指在对应于SEQIDNO:1的位置61的位置处的D。“87I”意指在对应于SEQIDNO:1的位置87的位置处的I。“99A”意指在对应于SEQIDNO:1的位置99的位置处的A。“102A”意指在对应于SEQIDNO:1的位置102的位置处的A。“110本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含禽流感病毒H5亚型的血凝素蛋白的免疫原性组合物，其中所述血凝素蛋白包含：/n(a)氨基酸残基120N或120S、155N和223N或223S；和/n(b)选自以下的一个或多个氨基酸残基：61D、87I、99A、102A、110N、136S、140D、149S、156T、157P、170N、172T、178R、190V、191L、200A、226V、243D、268Y、279A和298I；/n其中编号参考如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸残基。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181106 CN PCT/CN2018/1140501.一种包含禽流感病毒H5亚型的血凝素蛋白的免疫原性组合物，其中所述血凝素蛋白包含：
(a)氨基酸残基120N或120S、155N和223N或223S；和
(b)选自以下的一个或多个氨基酸残基：61D、87I、99A、102A、110N、136S、140D、149S、156T、157P、170N、172T、178R、190V、191L、200A、226V、243D、268Y、279A和298I；
其中编号参考如SEQIDNO:1中所示的氨基酸残基。


2.权利要求1的免疫原性组合物，其中所述血凝素蛋白包含：
(a)氨基酸残基61D、87I、99A、102A、110N、120N、136S、140D、149S、155N、156T、157P、170N、172T、178R、190V、191L、200A、223N、226V、243D、268Y、279A和298I；
(b)如SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列；或
(c)如SEQIDNO:5中所示的氨基酸序列。


3.权利要求1或2的免疫原性组合物，其中所述血凝素蛋白包含如SEQIDNO:6中所示的氨基酸序列。


4.权利要求1或2的免疫原性组合物，其中所述血凝素蛋白包含如SEQIDNO:5中所示的氨基酸序列。


5.权利要求1-4中任一项的免疫原性组合物，其中所述血凝素蛋白包含在细胞培养物中，并且所述细胞培养物通过培养含有表达载体的细胞进行制备，所述表达载体能够表达如权利要求1-4中任一项定义的血凝素蛋白。


6.权利要求1-5任一项的免疫原性组合物，其中所述表达载体包含编码如权利要求1-4中任一项定义的血凝素蛋白的核酸分子。


7.权利要求6的免疫原性组合物，其中所述核酸分子在SEQIDNO:10中示出。


8.权利要求6的免疫原性组合物，其中所述核酸分子在SEQIDNO:11中示出。


9.权利要求5-8中任一项的免疫原性组合物，其中所述表达载体是杆状病毒，并且所述细胞是昆虫细胞。


10.权利要求5-9的免疫原性组合物，其中使所述细胞培养物经受灭活步骤，优选通过二乙烯亚胺的灭活步骤。


11.权利要求5-10中任一项的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含所述细胞培养物的一部分或全部。


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【专利技术属性】
技术研发人员：E·S·蒙特，崔晓萍，胡增垒，
申请(专利权)人：勃林格殷格翰动物保健有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE