苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于试剂盒技术领域。本发明专利技术的试剂盒，包括链霉亲和素羧基磁颗粒、含有化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的缓冲液Ⅱ和偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体衍生物；其中，缓冲液Ⅱ包括0.01wt％～0.06wt％的添加剂，添加剂为聚氨丙基双胍、聚六亚甲基双胍中的一种或两种。该试剂盒操作简单、无污染、灵敏度高且检测范围宽。

【技术实现步骤摘要】
苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于试剂盒
，具体涉及一种苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
在辅助生殖技术方面，如果能准确地预测卵巢反应，制定个体化刺激方案，能够一定程度的提高妊娠率，降低并发症发生的风险。在始基卵泡向生长卵泡的转换期和早窦卵泡期，苗勒氏管抑制物受体(MISR)直接或间接影响卵泡的发育过程，可抑制卵泡的生长，防止卵泡过快、过早消耗，保存卵巢的储备功能。现有技术中，测定苗勒氏管抑制物受体的方法寥寥无几。有鉴于此，有必要提供一种操作简单、无污染、灵敏度高、检测范围宽的苗勒氏管抑制物受体的检测方法。
技术实现思路
本专利技术提供一种苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒操作简单、无污染、灵敏度高且检测范围宽。本专利技术解决上述技术问题采取的技术方案如下：本专利技术提供一种苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，包括链霉亲和素羧基磁颗粒、含有化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的缓冲液Ⅱ和含有偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原的缓冲液Ⅲ；所述缓冲液Ⅱ包括0.01wt％～0.06wt％的添加剂，添加剂为聚氨丙基双胍、聚六亚甲基双胍中的一种或两种。优选的是，所述添加剂为0.01wt％～0.03wt％聚氨丙基双胍和0.01wt％～0.03wt％聚六亚甲基双胍。优选的是，所述链霉亲和素羧基磁颗粒的粒径是2～3μm。优选的是，所述化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体中，苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体与化学发光标记物的物质的量比是1:(3～20)。优选的是，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。优选的是，所述偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原中，苗勒氏管抑制物受体抗原与偶联标记物的物质的量比为1:(5～20)。优选的是，所述偶联标记物为生物素或衍生物。优选的是，所述苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；所述R1试剂包括链霉亲和素羧基磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素羧基磁颗粒的质量百分浓度为0.01％～1％；所述R2试剂包括化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的浓度为0.1～2.0μg/mL；所述R3试剂包括偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原的浓度为0.2～3.0μg/ml。更优选的是，所述R1试剂中链霉亲和素羧基磁颗粒的质量百分浓度为0.072％。更优选的是，所述缓冲液Ⅰ包括100mMMES和0.02％吐温-20，pH为6.0～6.5。更优选的是，所述缓冲液Ⅱ包括100～500mMPB、0.01％～0.1％吐温-20、0.01％～0.03％聚氨丙基双胍和0.01％～0.03％聚六亚甲基双胍，pH为6。更优选的是，所述缓冲液Ⅲ包括100～500mMPB和0.01％～0.1％吐温-20，pH为6.0。优选的是，该试剂盒中还包括校准品；所述校准品包括浓度分别为0pg/mL、0.5pg/mL、2.0pg/mL、5.0pg/mL、15.0pg/mL、30.0pg/mL和50.0pg/mL的苗勒氏管抑制物受体蛋白溶液。本专利技术还提供上述苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一、制备R1试剂将链霉亲和素羧基磁颗粒溶液放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁颗粒，使用缓冲液Ⅰ清洗磁颗粒后，再用缓冲液Ⅰ配成磁颗粒质量百分浓度为0.02％～1％的固相试剂，即为R1试剂；步骤二、制备R2试剂先将苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体放入离心管中，保证苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入含有化学发光标记物的DMF溶液，经封闭、纯化，得到化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体，最后将收集好的化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体用缓冲液Ⅱ稀释至终浓度为0.1～2.0μg/mL，即为R2试剂；步骤三、制备R3试剂取苗勒氏管抑制物受体抗原，用pH为6.0～6.5的TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的长链磺化生物素(Sulfo-NHS-LC-Biotin)，经封闭、纯化，得到偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原，最后将收集好的偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原用缓冲液Ⅲ稀释至终浓度为0.1～2.0μg/mL，即为R3试剂。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒具有灵敏度高、准确定量、无放射性风险及样本需求量少等优点。具体来讲：1、本专利技术的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒采用链霉亲和素羧基磁颗粒与生物素标记的抗体可以牢牢的结合在一起，减少非特异性吸附，提高测试样本的准确度，抗干扰能力强。2、本专利技术的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒选择吖啶酯等为化学发光免疫分析系统的标记材料，该材料由激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要酶的参与，节约时间及成本，且吖啶酯的化学发光免疫分析系统线性范围宽。3、本专利技术的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，试剂、样本的添加及检测任务均由仪器自动完成，系统误差小，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度，并且实现无人值守。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施方式中的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。图1为本专利技术实施例4的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒的标准曲线图。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。本专利技术提供的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，包括链霉亲和素羧基磁颗粒、含有化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的缓冲液Ⅱ和含有偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原(衍生物)的缓冲液Ⅲ。上述技术方案中，链霉亲和素羧基磁颗粒的粒径优选为2～3μm，更优选为2μm。上述技术方案中，缓冲液Ⅱ包括0.01wt％～0.06wt％的添加剂，添加剂为聚氨丙基双胍、聚六亚甲基双胍中的一种或两种。聚氨丙基双胍和聚六亚甲基双胍中的胍基团是有效的活性基团，可以与生物体中的基团相互作用，从而将样本中的被测物即苗勒氏管抑制物受体释放出来；同时由于胍基具有很高的活性，使聚合构成正电性，很容易被呈负电本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括链霉亲和素羧基磁颗粒、含有化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的缓冲液Ⅱ和含有偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原的缓冲液Ⅲ；/n所述缓冲液Ⅱ包括0.01wt％～0.06wt％的添加剂，添加剂为聚氨丙基双胍、聚六亚甲基双胍中的一种或两种。/n

【技术特征摘要】
1.苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括链霉亲和素羧基磁颗粒、含有化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的缓冲液Ⅱ和含有偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原的缓冲液Ⅲ；
所述缓冲液Ⅱ包括0.01wt％～0.06wt％的添加剂，添加剂为聚氨丙基双胍、聚六亚甲基双胍中的一种或两种。


2.根据权利要求1所述的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述添加剂为0.01wt％～0.03wt％聚氨丙基双胍和0.01wt％～0.03wt％聚六亚甲基双胍。


3.根据权利要求1所述的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素羧基磁颗粒的粒径是2～3μm。


4.根据权利要求1所述的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体中，苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体与化学发光标记物的物质的量比是1:(3～20)；所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺或三联吡啶钌。


5.根据权利要求1所述的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原中，苗勒氏管抑制物受体抗原与偶联标记物的物质的量比为1:(5～20)；所述偶联标记物为生物素或衍生物。


6.根据权利要求1所述的苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述苗勒氏管抑制物受体化学发光免疫检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和R3试剂；
所述R1试剂包括链霉亲和素羧基磁颗粒和缓冲液Ⅰ，R1试剂中链霉亲和素羧基磁颗粒的质量百分浓度为0.01％～1％；
所述R2试剂包括化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体和缓冲液Ⅱ，R2试剂中化学发光标记物标记的苗勒氏管抑制物受体单克隆抗体的浓度为0.1～2.0μg/mL；
所述R3试剂包括偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原和缓冲液Ⅲ，R3试剂中偶联标记物标记的苗勒氏管抑制物受体抗原的浓度为0.2～3.0μg/ml。

【专利技术属性】
技术研发人员：张旭东，李冬梅，孟令敏，高威，孙成艳，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22