检测囊型包虫病方法技术

本申请实施例提供一种检测囊型包虫病方法，将经原核表达系统重组诱导并体外纯化的Ag5抗原包被于ELISA酶标板；将受检者血清按比例进行稀释，与已知的阴、阳性血清加入酶标板的板孔中进行反应；测得各板孔的OD

【技术实现步骤摘要】
检测囊型包虫病方法
本申请涉及医学检测
，具体涉及一种检测囊型包虫病方法。
技术介绍
棘球蚴病(Cysticechinococcosis,CE)，也称囊型包虫病，是由细粒棘球绦虫(Echinococcusgranulosus,Eg)幼虫棘球蚴所致的一种人畜共患寄生虫病。患者被感染后，会有几年无症状的潜伏期，由于囊肿的扩散以及定位，会出现不同类型的症状，如：疼痛，黄疸，呕吐胆汁，胸痛以及轻度瘫痪。最新的流行病学研究表明，中亚地区至少有2.7亿人(占人口总数的58％)感染棘球蚴病，每年可造成1.94亿美元直接或间接经济损失。保守估计，全球由于棘球蚴病导致的最低伤残调整寿命年(Health-adjustedlifeexpectancy，HALE)约为28.5年，造成的危害尤为广泛和严。我国的西北地区是该病的重灾区，而这些高原边防地区驻扎着大量部队官兵，属于高风险人群，一旦感染，存在群体性感染的风险，严重影响部队战斗力。因此，加强对棘球蚴病的防控具有重要的现实意义。对棘球蚴病进行准确诊断是防止该病蔓延的首要措施，常见的诊断方法主要有影像学方法及血清学方法。虽然影像学检测能够对该病进行正确诊断及感染部位的准确定位，但该方法受限于特定仪器难以实现大规模筛查。相对而言，血清学检测具有结果可靠，操作简便，价格低廉等特点，广泛应用于棘球蚴病的筛查和诊断。其中，间接法酶联免疫吸附试验(iELISA)利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过检测外周血中抗棘球绦虫的抗体IgG水平，从而对受检者的感染状态进行可靠的判断。但是，目前商品化试剂盒所采用的包被抗原一般是提取来自棘球绦虫感染部位的包囊液，很难做到检测的标准化。该方法缺乏较高的特异性和灵敏性，同时也增加了假阳性结果的可能性(例如和其他寄生虫的交叉反应)，在实际检测当中往往会出现漏检、错检的结果。
技术实现思路
本申请实施例提供一种检测囊型包虫病方法，能够降低错检的概率。本申请实施例的第一方面提供了一种检测囊型包虫病方法，所述方法包括：合成表达Ag5蛋白的核苷酸序，构建重组蛋白表达载体；将重组Ag5表达质粒转化至宿主细菌细胞，以得到重组蛋白表达菌株；在适于表达所需蛋白质的条件下纯化及复性重组蛋白Ag5；将Ag5抗原按100ng/ml包被于酶标板孔中，37℃恒温孵育后进行封闭处理，得到Ag5抗原包被的酶标板；将受检者血清按比例进行稀释，与已知的阴、阳性血清加入所述酶标板的板孔中，在37℃条件下孵育后，进行洗涤，向各板孔中分别加入抗人IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应；测得所述酶标板中的每个板孔中的OD450读值；根据所述OD450读值，确定所述每个板孔中的样品值；根据所述样品值进行阳性判别，得到判别结果。结合第一方面，在一个可能的实现方式中，所述根据所述样品值进行阳性判别，得到判别结果，包括：将所述样品值大于预设临界值，确定为阳性，所述预设临界值包括0.285。结合第一方面，在一个可能的实现方式中，所述将受检者血清按比例进行稀释，包括：按100μl/孔加入按1:200比例对受检者徐青进行稀释。实施本申请实施例，至少具有如下有益效果：合成表达Ag5蛋白的核苷酸序，构建重组蛋白表达载体；将重组Ag5表达质粒转化至宿主细菌细胞，以得到重组蛋白表达菌株；在适于表达所需蛋白质的条件下纯化及复性重组蛋白Ag5；将Ag5抗原按100ng/ml包被于酶标板孔中，37℃恒温孵育后进行封闭处理，得到Ag5抗原包被的酶标板；将受检者血清按比例进行稀释，与已知的阴、阳性血清加入所述酶标板的板孔中，在37℃条件下孵育后，进行洗涤，向各板孔中分别加入抗人IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应；测得所述酶标板中的每个板孔中的OD450读值；根据所述OD450读值，确定所述每个板孔中的样品值；根据所述样品值进行阳性判别，得到判别结果，从而可以准确的进行包虫病的检测，提升检测的正确率。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本申请实施例提供了一种Ag5抗原诱导表达图；图2为本申请实施例提供了一种检测结果示意图。具体实施方式下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺序。此外，术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备没有限定于已列出的步骤或单元，而是可选地还包括没有列出的步骤或单元，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其他步骤或单元。在本申请中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本申请所描述的实施例可以与其它实施例相结合。本申请实施例提供的一种检测囊型包虫病方法，该方法具体包括：合成表达Ag5蛋白的核苷酸序，构建重组蛋白表达载体；将重组Ag5表达质粒转化至宿主细菌细胞，以得到重组蛋白表达菌株；在适于表达所需蛋白质的条件下纯化及复性重组蛋白Ag5；将Ag5抗原按100ng/ml包被于酶标板孔中，37℃恒温孵育后进行封闭处理，得到Ag5抗原包被的酶标板；将受检者血清按比例进行稀释，与已知的阴、阳性血清加入所述酶标板的板孔中，在37℃条件下孵育后，进行洗涤，向各板孔中分别加入抗人IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应；测得所述酶标板中的每个板孔中的OD450读值；根据所述OD450读值，确定所述每个板孔中的样品值；根据所述样品值进行阳性判别，得到判别结果。在一个可能的实现方式中，所述根据所述样品值进行阳性判别，得到判别结果，包括：将所述样品值大于预设临界值，确定为阳性，所述预设临界值包括0.285。在一个可能的实现方式中，所述将受检者血清按比例进行稀释，包括：按100μl/孔加入按1:200比例对受检者徐青进行稀释。在一个可能的实现方式中，检测方法具体可以为：A1、合成表达Ag5蛋白的核苷酸序，构建重组蛋白表达载体PET28a；A2、将得到的重组Ag5表达质粒转化于宿主细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测囊型包虫病方法，其特征在于，所述方法包括：/n合成表达Ag5蛋白的核苷酸序，构建重组蛋白表达载体；/n将重组Ag5表达质粒转化至宿主细菌细胞，以得到重组蛋白表达菌株；/n在适于表达所需蛋白质的条件下纯化及复性重组蛋白Ag5；/n将Ag5抗原按100ng/ml包被于酶标板孔中，37℃恒温孵育后进行封闭处理，得到Ag5抗原包被的酶标板；/n将受检者血清按比例进行稀释，与已知的阴、阳性血清加入所述酶标板的板孔中，在37℃条件下孵育后，进行洗涤，向各板孔中分别加入抗人IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应；/n测得所述酶标板中的每个板孔中的OD

【技术特征摘要】
1.一种检测囊型包虫病方法，其特征在于，所述方法包括：
合成表达Ag5蛋白的核苷酸序，构建重组蛋白表达载体；
将重组Ag5表达质粒转化至宿主细菌细胞，以得到重组蛋白表达菌株；
在适于表达所需蛋白质的条件下纯化及复性重组蛋白Ag5；
将Ag5抗原按100ng/ml包被于酶标板孔中，37℃恒温孵育后进行封闭处理，得到Ag5抗原包被的酶标板；
将受检者血清按比例进行稀释，与已知的阴、阳性血清加入所述酶标板的板孔中，在37℃条件下孵育后，进行洗涤，向各板孔中分别加入抗人IgG酶标抗体，孵育洗涤后，进行显色反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：余闻静，龙宇鹏，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军第九五八医院，
类型：发明
国别省市：重庆;50