定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1以及试剂R2，其中试剂R1包括缓冲液50‑200mM，表面活性剂I 0.1‑0.5％，表面活性剂II 0.1‑0.5％，防腐剂0.1‑0.5％，无机盐0.1‑0.8％以及促凝剂1‑2％；试剂R2包括缓冲液50‑100mM，蛋白保护剂1‑5％，防腐剂0.1‑0.5％，无机盐0.1‑0.8％以及包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒。本发明专利技术通过在胶乳微球的标记过程中添加苯甲酸以及吗啉组合物，增加了胶乳微球与抗体的标记效率，显著提升试剂在检测高值阳性样本时的抗HOOK能力，使试剂的线性范围达到2‑500mg/L。

【技术实现步骤摘要】
定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及医学检验领域，具体涉及一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
血清淀粉样蛋白A(serumamyloidAprotein，SAA)是一种由肝细胞产生后被分泌到血清中的一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。炎症或感染急性期患者体内SAA含量在48-72小时内急速升高，并且在疾病的恢复期迅速下降，作为新的炎症或感染急性期检测指标，SAA在临床应用中发挥着重要作用。正常人体中，SAA的含量在10mg/L以下，在发生轻微感染时，人体内SAA的含量上升并处于10-200mg/L范围内。但是对于部分疾病患者而言，其体内SAA含量将显著上升，例如重症的手足口患儿体内SAA含量高达600mg/L，患者体内超高的SAA含量能够有效的反应疾病的严重性，同时更加有利于医生进行疾病的判别。目前，SAA的检测方法包括酶联免疫法以及胶乳增强免疫比浊法等，酶联免疫由于其过程繁琐，检测耗时长，不利于高通量的检测。胶乳增强免疫比浊法具有检测速度快，准确度高的优点，在做到高通量检测的同时保证了检测的准确性，已逐步发展为重要的临床检测手段，但是目前市面上的SAA胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒具有检测线性窄(多数试剂线性范围为200mg/L以下)、抗HOOK能力弱等缺点，不利于疾病的诊断以及不同医学水平的判定。
技术实现思路
根据上述需求，专利技术人意外发现，通过在SAA检测试剂盒的胶乳微球标记过程中添加苯甲酸以及吗啉组合物，可以显著增加SAA抗体与胶乳为求的标记效率，同时通过调整试剂配置，显著提升了试剂的检测线性范围以及抗HOOK能力。本专利技术提供一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A(SAA)的试剂盒，采用如下技术手段：一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1以及试剂R2；所述试剂R1包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-200mM，表面活性剂I0.1-0.5％，表面活性剂II0.1-0.5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及促凝剂1-2％；所述试剂R2包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-100mM，蛋白保护剂1-5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒；所述包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒的制备过程包括：在组分A以及组分B的存在下，SAA单克隆抗体与胶乳颗粒偶联，所述组分A选自吗啉或哌啶中的至少一种，优选为吗啉，所述组分B选自苯甲酸或水杨酸中的至少一种，优选为苯甲酸。优选地，在所述试剂R1中：所述缓冲液选自Tris、MOPS或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为MOPS缓冲液；所述表面活性剂I选自TritonX-100或Tween-20中的至少一种，优选为Tween-20；所述表面活性剂II选自Brii58、Tween-80或A90中的至少一种，优选为A90；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种。优选地，所述试剂R1的pH为6-8，优选为6-6.5。优选地，在所述试剂R2中：所述缓冲液选自MOPS、Bicine或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为Bicine缓冲液；所述蛋白保护剂选自BSA、酪蛋白、蔗糖或海藻糖中的至少一种，优选为BSA；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种。优选地，所述试剂R2的pH为6-8，优选为6.5-7。优选地，所述包被有鼠抗人SAA抗体的胶乳颗粒的粒径范围为100-200nm。一种如上述任一项所述的一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)试剂R1的制备试剂R1按照下述配方进行配置：缓冲液50-200mM，表面活性剂10.1-0.5％，表面活性剂II0.1-0.5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及促凝剂1-2％；所述缓冲液选自Tris、MOPS或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为MOPS缓冲液；所述表面活性剂I选自TritonX-100或Tween-20中的至少一种，优选为Tween-20；所述表面活性剂II选自Brii58、Tween-80或A90中的至少一种，优选为A90；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种；(2)试剂R2的制备①SAA胶乳颗粒制备将胶乳微球加入标记缓冲液中，搅拌均匀；随后向其中加入活化剂活化，搅拌均匀；向活化的胶乳微球溶液中加入SAA单克隆抗体，同时向其中加入组分A与组分B的组合物，所述组分A选自吗啉或哌啶中的至少一种，优选为吗啉，所述组分B选自苯甲酸或水杨酸中的至少一种，优选为苯甲酸，搅拌均匀后孵育6-14h；离心，弃上清，即可得包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒；②R2基础缓冲液制备R2基础缓冲液按照下述配方进行配置：缓冲液50-100mM，蛋白保护剂1-5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％；所述缓冲液选自MOPS、Bicine或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为Bicine缓冲液；所述蛋白保护剂选自BSA、酪蛋白、蔗糖或海藻糖中的至少一种，优选为BSA；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种。③试剂R2制备将步骤①制备得到的SAA胶乳颗粒加入步骤②制备得到的R2基础缓冲液中，溶解后超声，20-40℃孵育6-14h即可得到试剂R2。优选地，在所述步骤①中，分别加入0.5-1％吗啉以及0.5-1％苯甲酸的组合物。优选地，在所述步骤①中，所述标记缓冲液选自磷酸缓冲液或Tris缓冲液中的至少一种，优选为磷酸缓冲液，所述活化剂采用EDC/NHS，所述NHS与EDC以及胶乳微球的质量比为：1∶(0.5-1.5)∶(800-1000)，所述SAA单克隆抗体与胶乳微球的质量比为1∶(350-400)。优选地，在所述步骤③中，所述R2试剂中包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒的含量为0.05-0.1％。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过在胶乳微球标记液中添加苯甲酸与吗啉组合物的方式，增加了SAA抗体与胶乳微球的标记效率，一方面保证了试剂盒检测的精密度和准确度，同时显著提升了试剂盒在检测高值阳性样本时的抗HOOK能力(抗HOOK能力可达1043mg/L)，使试剂的线性范围达到2-500mg/L。附图说明图1为根据本专利技术实施例3所提供的SAA赋值样本理论浓度与A组试剂盒测定值的线性关系图；图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1以及试剂R2；/n所述试剂R1包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-200mM，表面活性剂I0.1-0.5％，表面活性剂II0.1-0.5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及促凝剂1-2％；/n所述试剂R2包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-100mM，蛋白保护剂1-5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒；/n所述包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒的制备过程包括：在组分A以及组分B的存在下，SAA单克隆抗体与胶乳颗粒偶联，所述组分A选自吗啉或哌啶中的至少一种，优选为吗啉，所述组分B选自苯甲酸或水杨酸中的至少一种，优选为苯甲酸。/n

【技术特征摘要】
20201231 CN 20201164530831.一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1以及试剂R2；
所述试剂R1包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-200mM，表面活性剂I0.1-0.5％，表面活性剂II0.1-0.5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及促凝剂1-2％；
所述试剂R2包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-100mM，蛋白保护剂1-5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒；
所述包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒的制备过程包括：在组分A以及组分B的存在下，SAA单克隆抗体与胶乳颗粒偶联，所述组分A选自吗啉或哌啶中的至少一种，优选为吗啉，所述组分B选自苯甲酸或水杨酸中的至少一种，优选为苯甲酸。


2.根据权利要求1所述的一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，在所述试剂R1中：
所述缓冲液选自Tris、MOPS或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为MOPS缓冲液；所述表面活性剂I选自TritonX-100或Tween-20中的至少一种，优选为Tween-20；所述表面活性剂II选自Brij58、Tween-80或A90中的至少一种，优选为A90；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种。


3.根据权利要求2所述的一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH为6-8，优选为6-6.5。


4.根据权利要求1所述的一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，在所述试剂R2中：
所述缓冲液选自MOPS、Bicine或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为Bicine缓冲液；所述蛋白保护剂选自BSA、酪蛋白、蔗糖或海藻糖中的至少一种，优选为BSA；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种。


5.根据权利要求4所述的一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2的pH为6-8，优选为6.5-7。


6.根据权利要求1-5所述的一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，所述包被有鼠抗人SAA抗体的胶乳颗粒的粒径范围为100-200nm。


7.一种如权利要求1-5任一项所述的一种定量检测血清淀粉样蛋白A的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)试剂R1的制备
试剂R1按照下述配方进行配置...

【专利技术属性】
技术研发人员：李云，刘霖，裴华，李元丽，李伯宏，陶静，刘雨薇，
申请(专利权)人：重庆中元汇吉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50