一种适用于白介素-6检测的缓冲液制造技术

本发明专利技术涉及白介素‑6(IL‑6)的检测领域，具体涉及一种适用于白介素‑6检测的缓冲液，本发提供一种合适缓冲液体系，包括以下成分，三羟甲基氨基甲烷12‑18份、牛血清白蛋白30‑50份、甘氨酸20‑30份、海藻糖30‑50份和酪蛋白20‑30份。所述体系用于IL‑6检测时，抗干扰能力强，检测结果稳定，重复性好，对IL‑6的检测灵敏度达到了5×10

【技术实现步骤摘要】
一种适用于白介素-6检测的缓冲液
本专利技术涉及白介素-6(IL-6)的检测领域，具体涉及一种适用于白介素-6检测的缓冲液。
技术介绍
IL-6是一种功能广泛的多效性细胞因子，属于白细胞介素的一种。它可由多种细胞所产生。白介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血小板衍生因子(PDGF)、病毒感染、双链RNA及cAMP等，均可诱导正常细胞产生IL-6。IL-6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。人类的IL-6基因位于第7号染色体上，分子量在21～30KD之间，其差异是由于肽链的糖基化和磷酸程度不同所致。IL-6是急性感染早期诊断的灵敏指标。当感染和炎症发生后，IL-6率先生成且水平迅速升高，其升高水平与感染的严重程度相一致，并诱导降钙素原(PCT)和C反应蛋白(CRP)在感染后升高。IL-6可作为对患者感染早期的鉴别诊断指标并对预后具有重要的参考意义。IL-6在危重患者中可持续长时间高水平的表达，可作为评估脓毒症和多器官功能障碍综合征(MODS)患者严重程度和预后的敏感指标，并能更快反映抗生素治疗的效果。通常在健康情况下，新生儿的血浆中IL-6浓度为18-26pg/mL，并且会随着年龄的增长浓度逐渐降低，当成长为正常成年人时血浆中IL-6浓度将低于10pg/mL，尽管在某些炎症性疾病中，IL-6的含量会有所增加，但是总体含量低造成其检测困难，提供一种灵敏且准确的IL-6含量检测方法是有必要的。中国专利申请CN109030829A公开了一种均相化学发光法检测犬IL-6的定量试剂盒及其使用方法；所述试剂盒采用的检测溶液包含DNA1-IL-6抗体1偶联物、DNA2-IL-6抗体2偶联物、标记吖啶酯(AE)的DNA3、限制性内切酶和氧化石墨烯，所述DNA1与DNA2有6个碱基互补，所述DNA3含2个酶切位点，且分别有9个碱基和DNA1、DNA2互补配对，DNA3通过π-π堆积作用吸附在氧化石墨烯表面，其末端标记的AE的化学发光因发生CRET而被淬灭；本方法为均相免疫分析方法，操作简单，同时大大缩短了分析时间，可在5-10分钟内完成单个样品的测定，结合邻位触击效应和化学发光分子信标，通过免疫反应诱发石墨烯淬灭机制的开关，从而释放化学发光信号，无需洗涤及分离纯化步骤。中国专利申请CN106124769A公开了一种一步均相IL-6检测试剂盒，主要组成包括：抗IL-6抗体偶联的发光微球、抗IL-6抗体偶联的感光微球、分析缓冲液、反应孔；本专利技术还公开了所述一步均相IL-6检测试剂盒的制备方法，该方法包括：抗IL-6抗体偶联发光微球的制备；抗IL-6抗体偶联感光微球的制备，以及分析缓冲液的制备；最后本专利技术公开了一步均相IL-6检测试剂盒的使用方法；本专利技术的试剂盒具有灵敏度高、特异性好、检测范围宽、重复性好，操作简单，免清洗等特点，将其应用于感染的监测，可以提高脓毒血症诊断的准确率，便于临床检测使用。中国专利申请CN107402308A公开了一种IL-6定量检测试剂盒及其制备方法。其中，该IL-6定量检测试剂盒包括：偶联有IL-6抗体的磁微球试剂，反应稀释液试剂和IL-6校准品。应用本专利技术的检测试剂盒，可以在现有多种生化分析仪上进行血清样本检测，操作简便快速，出具检测结果只需约10～15分钟，便于炎症、脓毒症早期诊断，更适合在各级基层医疗机构普及和应用。在IL-6的试剂盒使用过程中，标准品和质控品的检测稳定性对于结果的影响是非常验证的，因此使用合适缓冲溶液来构建IL-6试剂盒的标准曲线是必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中IL-6检测困难以及准确性较低，提供一种IL-6的标准品缓冲溶液。本专利技术的目的用过以下技术方案实现。一种适用于白介素-6检测的缓冲液，包括以下成分，三羟甲基氨基甲烷12-18份、牛血清白蛋白30-50份、甘氨酸20-30份、海藻糖30-50份和酪蛋白20-30份。进一步地，所述缓冲液，按体积1000mL计，包括以下成分，三羟甲基氨基甲烷12-18g、牛血清白蛋白30-50g、甘氨酸20-30g、海藻糖30-50g、酪蛋白20-30g和IL-6重组蛋白，余量为水，其中IL-6重组蛋白的浓度为10-500pg/mL。进一步地，所述缓冲液pH＝7.2-8.8。进一步地，所述缓冲液的pH使用氢氧化钠或盐酸进行调节。一种所述缓冲液的应用，所述应用为在制备IL-6的检测产品中的应用。一种包含所述缓冲液的试剂盒，包括以下成分：试剂A：碱性磷酸酶-IL-6抗体；试剂B：生物素-IL-6抗体；试剂C：链霉亲和素-磁微粒；和三种不同浓度的所述缓冲液，其中三种不同浓度的所述缓冲液中，区别仅在于IL-6重组蛋白的含量不同。进一步地，所述述三种不同浓度的缓冲液中，所述IL-6的浓度分别为标准品110-15pg/mL、标准品2290-310pg/mL和质控品40-50pg/mL.进一步地，所述试剂A的具体组成为碱性磷酸酶-IL-6抗体和缓冲液8的混合物；所述缓冲液8以1000mL总量计，具体组成为，三羟甲基氨基甲烷3.5-7g、氯化钠7-9g、牛血清白蛋30-50g、牛血清80-100mL、羊血清10-20mL和马血清10-20mL，余量为水，pH＝5.8-7.6，其中碱性磷酸酶-IL-6抗体的含量为2-4μg/mL，优选为2μg/mL。进一步地，所述缓冲液的pH使用氢氧化钠或盐酸进行调节。进一步地，所述试剂B的具体组成为生物素-IL-6抗体和缓冲液8的混合物；所述缓冲液8以1000mL总量计，具体组成为，三羟甲基氨基甲烷3.5-7g、氯化钠7-9g、牛血清白蛋30-50g、牛血清80-100mL、羊血清10-20mL和马血清10-20mL，余量为水，pH＝5.8-7.6，其中生物素-IL-6抗体的含量为2-4μg/mL，优选为2μg/mL。进一步地，所述缓冲液的pH使用氢氧化钠或盐酸进行调节。进一步地，所述试剂C的具体组成为链霉亲和素-磁微粒和缓冲液9的混合物；所述缓冲液9以1000mL总量计，具体组成为，十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9g、磷酸二氢钠0.55-0.60g、氯化钠7-9g、牛血清白蛋白30-50g、蔗糖80-100g、纤维素盐或纤维素衍生物3.0-5.0g和明胶20-30g，余量为水，pH＝6.2-8.0，其中链霉亲和素-磁微粒的含量为0.4-0.8mg/mL。进一步地，所述缓冲液的pH使用氢氧化钠或盐酸进行调节。进一步地，所述试剂盒还包括清洗液和碱性磷酸酶特异性响应的发光底物；进一步地，所述清洗液的具体组成为，以1000mL溶液计算，含有：3-5g三羟甲基氨基甲烷、10-20gNaCl、3-5g吐温20、3-5mLTritonX100，余量为水。进一步地，所述碱性磷酸酶特异性响应的发光底物。进一步地，所述碱性磷酸酶特异性响应的发光底物为含二氧杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适用于白介素-6检测的缓冲液，包括以下成分，/n三羟甲基氨基甲烷12-18份、牛血清白蛋白30-50份、甘氨酸20-30份、海藻糖30-50份和酪蛋白20-30份。/n

【技术特征摘要】
1.一种适用于白介素-6检测的缓冲液，包括以下成分，
三羟甲基氨基甲烷12-18份、牛血清白蛋白30-50份、甘氨酸20-30份、海藻糖30-50份和酪蛋白20-30份。


2.根据权利要求1所述的所述缓冲液，其特征在于，按体积1000mL计，包括以下成分，
三羟甲基氨基甲烷12-18g、牛血清白蛋白30-50g、甘氨酸20-30g、海藻糖30-50g、酪蛋白20-30g和IL-6重组蛋白，余量为水，其中IL-6重组蛋白的浓度为10-500pg/mL。


3.根据权利要求1或2所述缓冲液，其特征在于，pH＝7.2-8.8。


4.一种如权利要求1-3任一项所述缓冲液的应用，所述应用为在制备IL-6的检测产品中的应用。


5.一种包含权利要求2-3任一项所述缓冲液的试剂盒，包括以下成分：
试剂A：碱性磷酸酶-IL-6抗体；
试剂B：生物素-IL-6抗体；
试剂C：链霉亲和素-磁微粒；
和三种不同浓度的权利要求2-3任一项所述的缓冲液，三种不同浓度的权利要求2-3任一项所述的缓冲液的区别仅在于所述IL-6重组蛋白的浓度不同。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述三种不同浓度的缓冲液中，所述IL-6的浓度分别为标准品110-15pg/mL、标准品2290-310pg/mL和质控品40-50pg/mL。


7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂A的具体组成为碱性磷酸酶-IL-6抗体和缓冲液8的混合物；
所述缓冲液8以1000mL总量计...

【专利技术属性】
技术研发人员：王法龙，刘聪，李博飞，郑兴华，
申请(专利权)人：北京美联泰科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11