基于超高效合相色谱的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法组成比例

本申请婴幼儿配方奶粉的残留检测方法，尤其涉及基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法。本申请奶粉样品经盐酸溶液提取，氢氧化钾溶液水浴皂化，阳离子交换固相萃取柱净化，衍生化后，取衍生液待测。采用Acquity Trefoil CEL1手性色谱柱(3.0 mm×150 mm，2.5µm)分离，以超临界二氧化碳和1%氨水‑甲醇溶液作为流动相，以流速1.0 mL/min进行梯度洗脱。结果表明，两种肉碱对映体在0.25~10.0 mg/L质量浓度范围内线性关系良好，左旋肉碱和右旋肉碱的方法定量限分别为50 mg/kg和25 mg/kg，回收率为92.0％~110％，相对标准偏差为3.9%~7.2％。本申请具有分离效果好、分析速度快、有机溶剂消耗少等特点，可用于同时测定婴幼儿配方奶粉中左旋肉碱含量与纯度的分析。

【技术实现步骤摘要】
基于超高效合相色谱的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法
本申请肉碱对映体拆分方法和婴幼儿配方奶粉中的肉碱含量检测方法，尤其涉及基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和定量测定方法。
技术介绍
肉碱（Carnitine），化学名称为β-羟基-γ-三甲胺基丁酸，是一种类氨基酸，属于季铵阳离子复合物，可以通过生物合成方法从赖氨酸及蛋氨酸两种氨基酸合成产生，在体内与脂肪代谢成能量有关。研究表明，肉碱具有1个手性碳原子，存在一对对映体，为右旋对映体（D-肉碱）与左旋对映体（L-肉碱）。肉碱不同对映体之间的生物活性差异较大，其中D-肉碱不但没有功效，甚至大剂量使用的情况下会对人有害[1]，L-型肉碱具有功效，是哺乳动物能量代谢中必需的体内天然物质，可以促使脂肪转化为能量。婴儿左旋肉碱合成能力较弱，无法满足其正常的代谢，因此需要在婴儿配方奶粉中补充L-肉碱。目前，市售婴幼儿配方奶粉中所用的左旋肉碱主要来源于工业上的化学合成法，但该方法生产出来的L-肉碱纯度通常达不到要求，导致标签中标示含有左旋肉碱的婴幼儿配方奶粉含有D-肉碱。添本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法，该方法包括样品提取和标准溶液制备步骤，所述的样品提取由提取、净化和衍生步骤构成；其特征在于，该方法还包括将标准溶液和样品溶液分别进行超高效合相色谱分析，并制作标准曲线并通过标准曲线计算样品溶液中L-肉碱、D-肉碱的含量与纯度；/n超高效合相色谱分析条件如下：/n色谱柱：Acquity Trefoil CEL1 ，填料为纤维素-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）；/n流动相：A为CO

【技术特征摘要】
20210115 CN 2021100522302;20210208 CN 2021101832391.基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法，该方法包括样品提取和标准溶液制备步骤，所述的样品提取由提取、净化和衍生步骤构成；其特征在于，该方法还包括将标准溶液和样品溶液分别进行超高效合相色谱分析，并制作标准曲线并通过标准曲线计算样品溶液中L-肉碱、D-肉碱的含量与纯度；
超高效合相色谱分析条件如下：
色谱柱：AcquityTrefoilCEL1，填料为纤维素-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）；
流动相：A为CO2，B为1%（v/v）氨水-甲醇溶液；
梯度洗脱程序：0~7min，流动相90%（v/v）A-10%（v/v）B；7~9min，流动相90-72%（v/v）A-10%～28%（v/v）B；9～12min，流动相72%（v/v）A-28%（v/v）B；12～13min，流动相72-90%（v/v）A-28%～10%（v/v）B；13～14min，流动相90%（v/v）A-10%（v/v）B；流速：1.0mL/min；
系统背压：13.8MPa；柱温：40℃；进样量：5µL；检测波长：244nm。


2.根据权利要求1所述的基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法，其特征在于，提取步骤如下：
称取5g奶粉样品于50mL容量瓶中，加入20mL0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋混匀1min，超声5min充分溶解样品，加入5mL1mol/L氢氧化钾溶液，涡旋混匀1min，以0.1mol/L盐酸溶液定容至50mL；取1mL提取液于15mL离心管中，加入9mL乙腈，涡旋混匀1min后，15000r/min离心5min，所得上清液待净化。


3.根据权利要求2所述的基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法，其特征在于，净化步骤如下：
取1mL待净化溶液于活化好的MCX阳离子固相萃取柱中，上样后，用3mL10mmol/L的盐酸水溶液淋洗，弃去淋洗液，真空抽干1min，用2mL4%氨水-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于15mL离心管中，40℃下氮气吹干，所得残渣待衍生。


4.根据权利要求3所述的基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法，其特征在于，衍生步骤如下：
在所得残渣中加入0.5mL衍生试剂，超声1min溶解残渣并混匀，再依次加入0.5mL催化剂Ⅰ和0.5mL催化剂Ⅱ，涡旋混匀3min，20℃静置衍生反应60min后，加入2.0mL反应终止液，涡旋混匀1min后，5000r/min离心5min，移取上层水相于100mL圆底烧瓶中，浓缩至近干，向浓缩瓶中加入1mL无水乙醇，涡旋溶解充分，过0.22µm滤膜入进样小瓶；
所述的衍生试剂为4.5g/LL-丙氨酸-β萘胺乙腈溶液，所述的催化剂Ⅰ为5.0g/L三乙胺三氯甲烷溶液，所述的催化剂Ⅱ为5.0g/L氯甲酸丁酯三氯甲烷溶液，反应终止液为50mmol/L碳酸氢钠水溶液。


5.根据权利要求1所述的基于超高效合相色谱技术的婴幼儿配方奶粉中肉碱对映体拆分和测定方法，其特征在于，提取步骤如下：
称取5.00g奶粉样...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文华，谢文，侯建波，邹学权，汪鹏，张雅琴，胡晓莉，徐敦明，
申请(专利权)人：杭州海关技术中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33