与CD3结合的抗体制造技术

本发明专利技术总体上涉及与CD3结合的抗体，包括例如用于激活T细胞的多特异性抗体。此外，本发明专利技术涉及编码此类抗体的多核苷酸以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步涉及用于生产所述抗体的方法以及在疾病的治疗中使用所述抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与CD3结合的抗体
本专利技术总体上涉及与CD3结合的抗体，包括例如用于激活T细胞的多特异性抗体。此外，本专利技术涉及编码此类抗体的多核苷酸以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本专利技术进一步涉及用于生产所述抗体的方法以及在疾病的治疗中使用所述抗体的方法。
技术介绍
CD3(分化抗原簇3)是由四个亚基，CD3γ链、CD3δ链和两个CD3ε链组成的蛋白质复合物。CD3与T细胞受体和ζ链缔合，以在T淋巴细胞中生成激活信号。CD3已广泛用作药物靶点。靶向CD3的单克隆抗体已被用作自身免疫性疾病(例如I型糖尿病)或治疗移植排斥的免疫抑制剂疗法。CD3抗体莫罗单抗-CD3(OKT3)是第一种获准用于临床的单克隆抗体，于1985年获得批准。CD3抗体的最新应用呈双特异性抗体的形式，其一方面与CD3结合，另一方面与肿瘤细胞抗原结合。此类抗体同时与两个靶点的结合将促使靶细胞与T细胞之间发生临时相互作用，引起任何细胞毒性T细胞激活并且随后使靶细胞裂解。出于治疗目的，抗体必须满足的一个重要要求是在体外(用于储存药物)和体内(向患者施用后)均具有足够高的稳定性。类似于天冬酰胺脱酰胺的修饰是重组抗体的典型降解方式，可同时影响体外稳定性和体内生物学功能。鉴于抗体、特别是双特异性抗体对T细胞激活具有巨大的治疗潜力，因此需要具有优化特性的CD3抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了与CD3结合的抗体，包括多特异性(例如双特异性)抗体，这些抗体对例如天冬酰胺脱酰胺降解具有抗性，因此特别稳定，满足治疗目的的要求。这些(多特异性)抗体进一步结合了良好的功效和可生产性以及低毒性和有利的药代动力学特性。如本文中所示，本专利技术提供的与CD3结合的抗体(包括多特异性抗体)在pH7.4于37℃储存2周后与CD3的结合活性相对于在pH6于-80℃储存2周后的结合活性保留超过约90％，所述结合活性通过表面等离子体共振(SPR)测得。在一个方面，本专利技术提供了一种与CD3结合的抗体，其中该抗体包含第一抗原结合结构域，该第一抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，其包含SEQIDNO:2的重链互补决定区(HCDR)1、SEQIDNO:3的HCDR2和SEQIDNO:5的HCDR3；以及轻链可变区(VL)，其包含SEQIDNO:8的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQIDNO:9的LCDR2和SEQIDNO:10的LCDR3。在一个方面，VH包含与SEQIDNO:7的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且/或者VL包含与SEQIDNO:11的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在进一步方面，本专利技术提供了一种与CD3结合的抗体，其中该抗体包含第一抗原结合结构域，该第一抗原结合结构域包含SEQIDNO:7的VH序列和SEQIDNO:11的VL序列。在一个方面，第一抗原结合结构域为Fab分子。在一个方面，抗体包含由第一亚基和第二亚基组成的Fc结构域。在一个方面，抗体包含与第二抗原结合的第二抗原结合结构域和任选的第三抗原结合结构域。在一个方面，其中第二抗原结合结构域和/或在存在时的第三抗原结合结构域为Fab分子。在一个方面，第一抗原结合结构域为Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH或恒定结构域CL和CH1，特别是可变结构域VL和VH彼此替换。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域为常规的Fab分子。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域为Fab分子，其中在恒定结构域CL中，124位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地置换(根据Kabat编号)，并且123位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地置换(根据Kabat编号)；并且在恒定结构域CH1中，147位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地置换(根据KabatEU索引编号)，且213位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地置换(根据KabatEU索引编号)。在一个方面，第一抗原结合结构域与第二抗原结合结构域彼此融合，任选地经由肽连接基融合。在一个方面，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域各自为Fab分子，并且(i)第二抗原结合结构域在Fab重链的所述C末端与第一抗原结合结构域的Fab重链的所述N末端融合，或者(ii)第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合。在一个方面，第一抗原结合结构域、第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域各自为Fab分子，并且抗体包含由第一亚基和第二亚基组成的Fc结构域；并且其中(i)第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一亚基的所述N末端融合，或者(ii)第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一亚基的N末端融合；并且第三抗原结合结构域在存在时在Fab重链的C末端与Fc结构域的第二亚基的N末端融合。在一个方面，Fc结构域是IgG，特别是IgG1，Fc结构域。在一个方面，Fc结构域是人Fc结构域。在一个方面，Fc包含促进Fc结构域的第一亚基和第二亚基进行缔合的修饰。在一个方面，Fc结构域包含一个或多个氨基酸置换，所述一个或多个氨基酸置换减少与Fc受体的结合和/或降低效应子功能。在一个方面，第二抗原是靶细胞抗原，特别是肿瘤细胞抗原。在一个方面，第二抗原是TYRP-1。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQIDNO:15的HCDR1、SEQIDNO:16的HCDR2和SEQIDNO:17的HCDR3；以及VL，其包含SEQIDNO:19的LCDR1、SEQIDNO:20的LCDR2和SEQIDNO:21的LCDR3。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域包含：VH，其包含与SEQIDNO:18的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和/或VL，其包含与SEQIDNO:22的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一个方面，第二抗原是EGFRvIII。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域包含：VH，其包含SEQIDNO:85的HCDR1、SEQIDNO:86的HCDR2和SEQIDNO:87的HCDR3；以及VL，其包含SEQIDNO:89的LCDR1、SEQIDNO:90的LCDR2和SEQIDNO:91的LCDR3。在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域包含：VH，其包含与SEQIDNO:88的氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与CD3结合的抗体，其中所述抗体包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:2的重链互补决定区(HCDR)1、SEQ ID NO:3的HCDR 2和SEQ ID NO:5的HCDR 3；以及轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:8的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQ ID NO:9的LCDR 2和SEQ ID NO:10的LCDR 3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181221 EP 18214994.81.一种与CD3结合的抗体，其中所述抗体包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含：重链可变区(VH)，其包含SEQIDNO:2的重链互补决定区(HCDR)1、SEQIDNO:3的HCDR2和SEQIDNO:5的HCDR3；以及轻链可变区(VL)，其包含SEQIDNO:8的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQIDNO:9的LCDR2和SEQIDNO:10的LCDR3。


2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述VH包含与SEQIDNO:7的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列，并且/或者所述VL包含与SEQIDNO:11的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。


3.一种与CD3结合的抗体，其中所述抗体包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含SEQIDNO:7的VH序列和SEQIDNO:11的VL序列。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为Fab分子。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体，其包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的抗体，其包含与第二抗原结合的第二抗原结合结构域和任选的第三抗原结合结构域。


7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和/或在存在时的所述第三抗原结合结构域为Fab分子。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH或恒定结构域CL和CH1，特别是可变结构域VL和VH彼此替换。


9.根据权利要求6-8中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域以及在存在时的所述第三抗原结合结构域为常规Fab分子。


10.根据权利要求6-9中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域为Fab分子，其中在恒定结构域CL中，124位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地置换(根据Kabat编号)，并且123位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地置换(根据Kabat编号)；并且在恒定结构域CH1中，147位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地置换(根据KabatEU索引编号)，且213位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地置换(根据KabatEU索引编号)。


11.根据权利要求6-10中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域与所述第二抗原结合结构域彼此融合，任选地经由肽接头融合。


12.根据权利要求6-11中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域各自为Fab分子，并且(i)所述第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，或者(ii)所述第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合。


13.根据权利要求6-12中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域、所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域各自为Fab分子，并且所述抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域；并且其中(i)所述第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且所述第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第一亚基的N末端融合，或者(ii)所述第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且所述第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第一亚基的N末端融合；并且所述第三抗原结合结构域在存在时在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第二亚基的N末端融合。


14.根据权利要求5-13中任一项所述的抗体，其中所述Fc结...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·弗里莫瑟格伦德舍伯，T·霍弗，R·霍斯，E·莫斯纳，V·G·尼科里尼，P·乌马纳，I·瓦尔德豪尔，W·里希特，A·克纳普，H·特罗查诺夫斯卡，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH