细胞焦亡通路在细胞治疗中的用途制造技术

本发明专利技术涉及细胞焦亡通路在细胞治疗中的用途。具体地，本发明专利技术涉及Gasdermin E介导的焦亡通路在细胞因子释放综合征的预测和/或治疗中的用途。具体地，本发明专利技术涉及特异性检测GSDME蛋白质或基因活性或水平的试剂在制备用于预测受试者发生细胞因子释放综合征的风险的试剂盒中的用途，另一方面，本发明专利技术涉及阻断和/或抑制GSDME蛋白质或基因活性或水平的试剂在制备用于抑制和/或降低受试者发生细胞因子释放综合征的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
细胞焦亡通路在细胞治疗中的用途
本专利技术涉及细胞因子释放综合征预测和/或治疗的
具体地，本专利技术涉及GasderminE(GSDME)作为标记物预测细胞因子释放综合征的用途，以及阻断或抑制GasderminE(GSDME)基因表达和/或激活通路来改善细胞因子释放综合征的

技术介绍
运用嵌合抗原受体修饰的基因工程T细胞(CAR-T)在治疗恶性肿瘤，例如B细胞恶性肿瘤的临床治疗取得了显著疗效(参见S.S.Neelapu等人，AxicabtageneCiloleucelCART-CellTherapyinRefractoryLargeB-CellLymphoma.NEnglJMed377,2531-2544(2017)；S.L.Maude等人，TisagenlecleucelinChildrenandYoungAdultswithB-CellLymphoblasticLeukemia.NEnglJ17Med378,439-448(2018)；和M.Sadelain等人,TherapeuticTcellengineering.Nature545,19423-431(2017))，但治疗过程中往往伴发细胞因子释放综合征(CRS)。这种严重的全身性炎症反应阻碍了CAR-T细胞临床治疗的进一步发展(参见，C.L.Bonifant等人ToxicityandmanagementinCART-celltherapy.MolTherOncolytics3,16011(2016)；M.L.Davila,等人Efficacyandtoxicitymanagementof19-28zCARTcelltherapyinBcellacutelymphoblasticleukemia.SciTranslMed6,224ra225(2014))。目前研究表明，CRS是一种急性炎症反应，其特征表现为血清炎性细胞因子升高及相关的发烧，低血压和呼吸功能不全等临床症状(参见N.Frey,Cytokinereleasesyndrome:Whoisatriskandhowtotreat.BestPract8ResClinHaematol30,336-340(2017)；D.T.Teachey,等人IdentificationofPredictiveBiomarkersforCytokineReleaseSyndromeafterChimericAntigenReceptorT-cellTherapyforAcuteLymphoblasticLeukemia.CancerDiscov6,664-679(2016)；和M.L.Davila等人Efficacyandtoxicitymanagementof19-28zCARTcelltherapyinBcellacutelymphoblasticleukemia.SciTranslMed6,224ra225-224ra225(2014))。CAR-T细胞在输注病人体内后快速激活扩增，扩增后的CAR-T细胞在短时间内导致B白血病细胞的迅速大量死亡。CRS的发生率及症状严重程度与B白血病细胞的裂解破坏程度成正相关。但这一急性恶性肿瘤细胞大量坏死与CRS发生的内在关联的分子机制尚未探究清楚。同时，另有研究表明，在CAR-T细胞治疗的人源化小鼠模型中，巨噬细胞参与了CRS的发生(参见T.Giavridis等人，CARTcell-inducedcytokinereleasesyndromeismediatedbymacrophagesandabatedbyIL-1blockade.NatMed24,731-738(2018)；和M.Norelli等人Monocyte-derivedIL-1andIL-6aredifferentiallyrequiredforcytokine-releasesyndromeandneurotoxicityduetoCARTcells.NatMed24,739-748(2018))，但其具体分子机制仍不清楚。细胞有多种死亡方式。凋亡一直被认为是细胞程序性死亡的唯一形式。但目前的研究表明了新形式的程序性死亡的存在，其特征是细胞迅速肿胀，质膜上出现大的胞膜泡以及促炎因子的释放(参见J.Shi,等人,Pyroptosis:Gasdermin-MediatedProgrammedNecroticCellDeath.TrendsBiochemSci42,245-254(2017)；和D.Wallach等人Programmednecrosisininflammation:Towardidentificationoftheeffectormolecules.Science352,aaf2154(2016))。到目前为止，至少已经确定了两个新的介导程序性细胞死亡的分子途径。一种是混合谱系激酶结构域样假激酶(MLKL)介导的坏死性死亡(参见J.Lin等人RIPK1counteractsZBP1-mediatednecroptosistoinhibitinflammation.Nature540,124-128(2016)；和J.Yuan,等人NecroptosisandRIPK1-mediatedneuroinflammationinCNSdiseases.NatRevNeurosci20,19-33(2019))，另一种是gasderminD(GSDMD)或gasderminE(GSDME)介导的细胞焦亡(参见Y.Wang等人，Chemotherapydrugsinducepyroptosisthroughcaspase-3cleavageofagasdermin.Nature547,99-103(2017)；和S.Ruhl等人ESCRT-dependentmembranerepairnegativelyregulatespyroptosisdownstreamofGSDMDactivation.Science362,956-960(2018))。其中，MLKL介导的细胞程序性坏死主要是通过TNF-a受体招募受体蛋白激酶1(RIP1)和3(RIP3)形成死亡复合物，随后激活MLKL以产生膜纳米孔，从而导致坏死性细胞死亡。与MLKL不同的是，GSDMD或GSDME由炎性半胱天冬酶(半胱天冬酶-1、-4、-5和-11)或半胱天冬酶-3激活，可以形成寡聚物并插入细胞膜中形成孔，因此介导细胞焦亡。为了克服现有技术中CART治疗肿瘤时由于细胞因子释放综合征而引起的不良后果，需要新的策略在维持或提高CART细胞疗法功效的同时，控制细胞因子释放综合征，尤其是细胞因子风暴引起的安全性的问题。本专利技术人通过阐述两种新的细胞程序性死亡与CRS之间的关系，为CAR-T诱导的CRS的预测、治疗以及CAR-T细胞的临床应用提供了新的思路。
技术实现思路
我们的研究表明，在患有表达CD19+的恶性B细胞肿瘤中(例如Raji和NALM-6细胞)普遍表达GSDME。此外，在表达HER2+(例如SGC-7901和MCF-7)的肿瘤细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性检测GSDME蛋白质或基因活性或水平的试剂在制备用于预测受试者发生细胞因子释放综合征的风险的试剂盒中的用途；优选地，所述试剂用于检测GSDME蛋白质或mRNA的表达水平。/n

【技术特征摘要】
1.特异性检测GSDME蛋白质或基因活性或水平的试剂在制备用于预测受试者发生细胞因子释放综合征的风险的试剂盒中的用途；优选地，所述试剂用于检测GSDME蛋白质或mRNA的表达水平。


2.根据权利要求1所述的用途，其中如果受试者GSDME蛋白质或基因活性或水平高于参照活性或水平，则预测所述受试者具有发生细胞因子释放综合征的风险，优选地，如果受试者GSDME蛋白质或基因活性或水平高于参照活性或水平的2倍，预测所述受试者具有发生严重细胞因子释放综合征的风险。


3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述受试者是患有癌症的受试者；优选地，所述癌症与CD19和/或HER2表达相关；优选地，所述受试者患有选自以下的癌症：B细胞急性淋巴细胞白血病、T细胞急性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、B细胞早幼粒细胞白血病、胚细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡淋巴瘤、恶性淋巴细胞增生症、MALT淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓发育不良和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、浆胚细胞淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞肿瘤和瓦尔登斯特隆巨球蛋白血症。


4.根据权利要求1或2所述的用途，其中在接受CART细胞疗法之前评估受试者发生细胞因子释放综合征的风险；优选地，所述CART细胞为CD19和/或HER2CART细胞。


5.阻断和/或抑制GSDME蛋白质或基因活性或水平的试剂在制备用于抑制和/或降低受试者发生细胞因子释放综合征的药物中的用途，优选地，所述受试者患有癌症，更优选地，所述受试者患有与CD19和/或HER2表达相关的癌症；优选地，所述受试者患有选自以下的癌症：B细胞急性淋巴细胞白血病、T细胞急性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、B细胞早幼粒细胞白血病、胚细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、毛细胞白血病、小细胞或大细胞滤泡淋巴瘤、恶性淋巴细胞增生症、MALT淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓发育不良和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、浆胚细胞淋巴瘤、浆细胞样树突状细胞肿瘤和瓦尔登斯特隆巨球蛋白血症。


6.根据权利要求5所述的用途，其中所述的阻断和/或抑制GSDME蛋白质或基因活性或水平的试剂选自抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄波，刘玉英，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11