一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，往预先包被人白介素2可溶性受体捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并此地洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下被转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的sCD25呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度，可将测定时间缩短至120分钟。

【技术实现步骤摘要】
一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法
本专利技术属于生命科学和生物
，特别一种用于人白介素2可溶性受体(sIL-2R_sCD25)ELISA检测方法。
技术介绍
嗜血细胞综合征(HPS)，是一种免疫介导的危及生命的疾病。可以影响各个年龄人群，不仅发生在先天性遗传易感性免疫缺陷患者，也越来越多的发生在自身免疫性疾病，持续性感染、恶性肿瘤或免疫抑制的患者中发生。主要由淋巴细胞单核细胞和巨噬细胞系统异常激活、增殖，分泌大量炎性细胞因子而引起的一系列炎症反应。临床以持续发热、肝脾肿大、全血细胞减少以及骨髓、肝、脾、淋巴结组织发现嗜血现象为主要特征。根据嗜血细胞综合征中国专家联盟，中华医学会儿科学分会发表的《嗜血细胞综合征诊治中国专家共识》诊断标准中，分子诊断该病相关的8个基因发生病理性突变，或者临床中8条中符合5条即可诊断。其中临床8条的诊断标准中，明确提出sCD25即可溶性白鞋吧介素-2受体升高，是为其中的一条诊断标准。关于sCD25的水平，根据国内协作组研究结果和梅奥医学中心的结果推荐，sCD25水平≥6400pg/ml可作为诊断标准之一。传统夹心ELISA利用的是一对能够结合于靶蛋白上至少两个不同位点的抗体。捕获抗体预包被于微孔板的微孔表面，并与靶蛋白选择性结合。清洗后，加入检测抗体，连接到靶蛋白的第二位点，形成夹心复合物。传统检测方法时间长，操作复杂。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供了一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，采用单步清洗方案，同时将待测品、标记HRP的抗体一起孵育，孵育后，只清洗板一次，可将测定时间缩短至120分钟。一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；(2)加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，温育后洗涤；(3)加入底物TMB显色；(4)用酶标仪在450nm处测吸光值。本专利技术采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，往预先包被人白介素2可溶性受体捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并此地洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下被转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的sCD25呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。进一步地，上述检测方法的具体步骤如下：(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；(2)设置标准孔(S1-S6)、空白孔(B)和样本孔(1-14)；在标准孔中各加入标准品50ul，空白孔不加(3)样本孔中加入待测品10ul，再加入样本稀释液40ul；(4)标准品孔和样本孔中加入抗体-HRP50ul，贴好封板膜，37℃温浴60min；(5)弃去液体，拍干，每孔加满稀释好的洗涤液，静置1min，拍干；重复洗板5次；(6)所有孔加入底物TMB50ul，37℃温浴60min；(7)每孔加入终止液50ul；(8)15分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。本专利技术采用单步清洗方案，同时将待测品、标记HRP的抗体一起孵育，孵育后，只清洗板一次，可将测定时间缩短至120分钟。附图说明图1是标准曲线图。具体实施方式测试前准备：1、试剂盒室温平衡20min(不用的板条放在冰箱)，保温箱开启37度。2、稀释标准品(10ng/ml、5、2.5、1.25、0.625、0)表1：标准品制备注：梯度稀释每个浓度都充分混匀，至少震荡1分钟，才能吸出至下一管检测过程1.室温平衡20min后，取出酶标板。2.设置标准孔(S1-S6)、空白孔(B)和样本孔(1-14)。在标准孔中各加入标准品50ul，空白孔不加。3.样本孔中加入待测品10ul，再加入样本稀释液40ul。4.标准品孔和样本孔中加入抗体-HRP50ul，贴好封板膜，37℃温浴60min。5.弃去液体，拍干，每孔加满稀释好的洗涤液，静置1min，拍干。重复洗板5次。6.所有孔加入底物50ul，37℃温浴60min。7.每孔加入终止液50ul。8.15分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果分析标准品标准曲线的制作以标准品浓度为横坐标，去空白OD值为纵坐标，使用软件作图，拟合标准曲线(如图1所示)。根据计算公式计算待检样本的浓度，下表为检测结果：表2检测结果本专利技术采用单步清洗方案，同时将待测品、标记HRP的抗体一起孵育，孵育后，只清洗板一次，可将测定时间缩短至120分钟。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；/n(2)加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，温育后洗涤；/n(3)加入底物TMB显色；/n(4)用酶标仪在450nm处测吸光值。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于人白介素2可溶性受体的ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；
(2)加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，温育后洗涤；
(3)加入底物TMB显色；
(4)用酶标仪在450nm处测吸光值。


2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将人白介素2可溶性受体捕获抗体包被于微孔中；
(2)设置标准孔(S1-S6)、空白孔(B...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙翠莲，
申请(专利权)人：武汉艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42