SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用、诊断或辅助诊断试剂盒中的应用制造技术

SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用、诊断或辅助诊断试剂盒中的应用属于类风湿关节炎诊断标志物技术领域，特别涉及SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用、诊断或辅助诊断试剂盒中的应用。经过ELISA方法检测和应用联合检测分析，发现其有效。

【技术实现步骤摘要】
SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用、诊断或辅助诊断试剂盒中的应用
本专利技术属于类风湿关节炎诊断标志物
，特别涉及SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用、诊断或辅助诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
类风湿关节炎(RheumatoidArthritis,RA)是一种以骨关节病变为主要症状的慢性自身免疫性疾病，临床症状多表现为关节疼痛、变形及功能障碍，且疾病反复发作，不易治愈。RA病情隐匿、早期症状不典型，若不及时控制和正确治疗，终将甚至可致终生残疾，严重危害患者身心健康，是导致人类丧失劳动力和致残的主要原因之一。流行病学研究发现世界女性类风湿关节炎发病率约为1.16％，男性约为0.44％，类风湿关节炎已成为亟待解决的公共问题，也是临床研究热点。RA的诊治着重在于早期发现，尤其是前3个月病情较为缓解时，尽早合理地应用抗风湿药物，炎症病尚可逆转，因此RA的早期识别和诊断尤为重要。目前，RA诊断依据主要有三方面：临床症状、血清学检测以及影像学(X线)改变，但多侧重于临床症状和影像学表现。然而这些指标通常在疾病发展到一定程度才出现改变，关节软骨往往已经达到了不可逆的损害。因此通过生物指标早期确诊RA对于患者具有非常重要的现实意义。目前RA常用诊断指标为类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸抗体(anti-CCP)和C反应蛋白(CRP)，但这些指标在敏感性和特异性方面仍存在一定的缺陷，因此寻找特异性好，灵敏度高的血清标志物对RA仍尤为重要。专利技术目的本专利技术的一个目的是提供SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用，本专利技术的另一个目的是提供SAA4蛋白在制备类风湿关节炎诊断或辅助诊断试剂盒中的应用，因血清淀粉蛋白A4(SAA4)是血清淀粉样蛋白A(SAA)家族中的成员。SAA是一类高度保守的急性期蛋白家族，1976年从血清中被分离鉴定，其合成的主要部位是肝脏，因在免疫应答和脂质代谢等方面均可发挥作用，被认为是一种炎症的标志物。SAA蛋白可被分为两类：包含可激活先天性和适应性免疫细胞的急性期SAA1/SAA2蛋白和组成型SAA4蛋白。成熟的SAA4蛋白由112个氨基酸组，在没有炎症性病变的情况下占血清SAA总蛋白90％(数量)以上。目前尚没有SAA4蛋白作为类风湿关节炎标志物的研究，本专利技术研究尝试使用SAA4蛋白作为为类风湿关节炎的诊断提供新参考依据，并经过实验验证，其对类风湿关节炎诊断具有良好的临床应用价值，可以克服现有类风湿关节炎诊断标志物特异性、敏感性不高的缺陷和不足，作为一种新的类风湿关节炎诊断标志物。为实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：SAA4蛋白作为类风湿关节炎的诊断标志物的应用，SAA4蛋白在制备类风湿关节炎诊断产品中的应用。进一步的，所述的SAA4蛋白为血清标志物。进一步的，所述的诊断产品的检测样本为血清。进一步的，所述的诊断产品为诊断试剂盒。所述的诊断类风湿关节炎产品包含特异检测所述SAA4蛋白表达水平的检测试剂。具体的，收集类风湿关节炎患者，其他易混淆风湿病患者(系统性红斑狼疮、干燥综合征和强直性脊柱炎患)和健康人血清，将其分为RA组和对照组(易混淆风湿病患者与健康人)。应用ELISA方法检测各组血清中SAA4蛋白水平。发现RA患者血清SAA4蛋白表达水平明显高于对照组血清。同时，利用ROC(接收者操作特征)曲线分析血清中SAA4在类风湿关节炎患者中的诊断作用。ROC结果显示SAA4对类风湿关节炎诊断的敏感度为67.72％，特异度为88.60％，AUC面积为0.83[95％CI:0.79-0.88]，提示具有较好的灵敏度与特异度。与RF、anti-CCP和CRP相比，其特异度最高。此外，我们对SAA4及传统RA诊断标志物进行平行或系列试验的联合检测。1、结果提示当标志物联合检测时，RA检出率提升。当SAA4、CRP、anti-CCP和RF联合检测时，对RA诊断效能最优，其RA的敏感度和特异度可分别达到97.47％和99.37％。2、结果提示当标志物联合检测时，RA检出率提升。当SAA4与anti-CCP联合检测时，从花费最经济来说，对RA诊断效能最优，其RA的敏感度和特异度可分别达到91.14％和98.10％。其优点在于：本专利技术提供了一种新的类风湿关节炎诊断标志物，即SAA4蛋白。证实了类风湿关节炎患者血清中SAA4蛋白水平显著上升。通过ROC曲线分析，结果显示SAA4蛋白对类风湿关节炎诊断的敏感性和特异性分别为67.72％和88.60％。血清SAA4是RA诊断中诊断性能优于RF和CRP的诊断标志物。因此SAA4可作为诊断RA的生物标志物。此外SAA4也可作为RA其他诊断标志物的补充，克服了现有标志物敏感性和特异性不高的缺陷，帮助早期准确地诊断类风湿关节炎，具有良好的临床应用价值。附图说明图1为实施例1中各组血清样本中SAA4蛋白的表达水平图。图2为SAA4、RF、anti-CCP和CRP诊断RA的ROC曲线图。具体实施方式为验证SAA4蛋白能否作为类风湿关节炎诊断标志物，本技术方案采用酶联免疫吸附法(即ELISA法)对研究对象血清中SAA4进行检测同时通过ROC曲线分析评价其在类风湿关节炎中的意义。实施例1血清中SAA4表达水平及其浓度比较：1、血清样本收集：本研究共纳入研究对象316例。RA组为来自中国医科大学附属第一医院类风湿关节炎患者158例。性别和年龄相匹配的对照组(易混淆风湿病非RA疾病组113例和健康人群45例)组来自中国医科大学附属第一医院及其体检中心共158例。其中系统性红斑狼疮49例、干燥综合征14例和强直性脊柱炎患50例。所有研究对象采血5ml，室温静止30min后，3000rpm离心10min获取上清标本，分别给予编号后纳入标本库，需长期保存的分装后冻存于-80℃备用，避免反复冻融。2、实验流程：1)准备样本及主要试剂耗材。ELISA实验试剂盒购于上海乾图生物科技有限公司。实验前血清样本充分解冻，同时将ELISA实验试剂盒从冷藏环境中取出放置在室温平衡20min。所有操作均按说明书严格执行。2)配制洗涤液，采用蒸馏水将20×洗涤缓冲液用蒸馏水按照1：20进行稀释，稀释后洗涤缓冲液留待备用。(此20×洗涤缓冲液为实验试剂盒自带)。3)反应孔设置空白孔，标准品孔和样本孔。4)加样：标准品孔各加不同浓度的标准品50μl(标准品浓度依次为0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL,40μg/mL,80μg/mL)。样本孔底部先加入10μl待测样本，再加入40μl样本稀释液。(此标准品和样本稀释液为实验试剂盒自带)。5)温育：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μl，小心将封板膜封板后放置37℃恒温温育箱温60min。(此辣根过氧化物酶标记的检测抗体为实验试剂盒自带)。6本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用。/n

【技术特征摘要】
1.SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用。


2.根据权利要求1所述的SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用，其特征在于包括下列步骤：应用ELISA方法检测，发现SAA4蛋白具有作为类风湿关节炎诊断标志物的作用。


3.根据权利要求1所述的SAA4蛋白作为类风湿关节炎诊断标志物的应用，其特征在于包括下列步骤：应用联合检测分析，发现SAA4蛋白具有作为类风湿关节炎诊断标志物的作用。


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【专利技术属性】
技术研发人员：付凌雨，李佳慧，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21