一株植物乳杆菌LR002及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，尤其涉及一株植物乳杆菌LR002及其应用。本发明专利技术所述的植物乳杆菌LR002，拉丁文名称为：LactobacillusplantarumLR002，保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2021年5月13日，保藏编号为：CCTCCNO：M2021527。本发明专利技术分离得到的植物乳杆菌具有很强的耐胆盐、耐胃液、耐肠液的能力；可抑制有害菌生长；对抗生素敏感、无耐药性，保证其安全；有望作为益生菌用于动物饲料中。

【技术实现步骤摘要】
一株植物乳杆菌LR002及其应用
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一株植物乳杆菌LR002及其应用。
技术介绍
益生菌也称益生素，是能够对动物产生有益作用的微生物制剂。益生菌作为动物饲料的添加剂使用，具有促生长、抗病治病、提高饲料消化率等功能。理想的益生菌应当具有如下功效：(1)对酸、胆盐有抵抗力，经过胃、小肠时能保持自身的活性，即能够耐酸、耐胆盐、耐肠液、耐胃液的能力。(2)能够附植于肠道的黏膜上皮细胞，产生的黏液有利于其在胃肠道的定植。即具有一定的粘附能力。(3)对抗生素敏感，无耐药性，不可能将其携带的耐药基因水平传达给肠道中的致病类菌，导致肠道中的致病类菌获得耐药性，保证其安全性。但是现有技术并未发现这样一株同时具有2种及以上功效的植物乳杆菌。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种同时具备耐酸、耐胆盐、耐肠液、耐胃液，抑制有害菌，具有很好抗生素耐药性的植物乳杆菌。具体涉及一株植物乳杆菌LR002及其应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一株植物乳杆菌LR002，拉丁文名称为：LactobacillusplantarumLR002，保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2021年5月13日，保藏编号为：CCTCCNO：M2021527。作为优选，所述植物乳杆菌LR002的16SrDNA的序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了所述的植物乳杆菌LR002在制备耐酸产品方面的应用。本专利技术还提供了所述的植物乳杆菌LR002在制备耐胆碱产品方面的应用。本专利技术还提供了所述的植物乳杆菌LR002在制备耐胃液产品方面的应用。本专利技术还提供了所述的植物乳杆菌LR002在制备耐肠液产品方面的应用。本专利技术还提供了所述的植物乳杆菌LR002在制备抑菌产品方面的应用。本专利技术还提供了所述的植物乳杆菌LR002在制备无耐药性产品方面的应用。本专利技术提供了一株植物乳杆菌LR002及其应用，本申请的植物乳杆菌LR002具有如下优点：(1)本申请的植物乳杆菌LR002具有很好的耐酸、耐胆碱、耐胃液、耐肠液的作用；(2)本申请的植物乳杆菌LR002还具有对抗生素敏感的特性，无耐药性，不可能将其携带的耐药基因水平传达给肠道中的致病类菌，导致肠道中的致病类菌获得耐药性，保证其安全性；(3)本申请的植物乳杆菌LR002还具有很好的抑菌功能；(4)本专利技术的植物乳杆菌LR002有望作为益生菌用于动物饲料中。附图说明图1为植物乳杆菌LR002菌落形态图。图2为植物乳杆菌LR002革兰氏染色结果图。图3为植物乳杆菌LR00216SrDNA琼脂糖凝胶电泳图。图4为植物乳杆菌LR00216SrDNA系统发育树。图5为植物乳杆菌LR002耐酸能力图。图6为植物乳杆菌LR002耐胆盐能力图。图7为植物乳杆菌LR002耐人工胃液能力图。图8为植物乳杆菌LR002耐人工肠液能力图。图9为植物乳杆菌LR002抑菌图(从左到右依次为枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)。图10为植物乳杆菌LR002对抗生素的敏感实验结果图。保藏说明植物乳杆菌LR002，拉丁文名称为：LactobacillusplantarumLR002，保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2021年5月13日，保藏编号为：CCTCCNO：M2021527。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1菌株的分离、鉴定称取甘南藏族自治州临潭县藜麦茎叶置于MRS固体培养基上覆盖上一层水琼脂进行分离，37℃恒温培养48h。得到菌落，菌落结果见图1。挑取菌落，连续划线分离纯化，最后选择单菌落，经镜检确认为纯种后，接种到斜面培养基培养24h后，置4℃冰箱保存备用。将鉴定为纯种的菌株进行革兰氏染色以及生理生化鉴定，革兰氏染色结果见图2，生理生化结果如表1所示。表1LR002生理生化鉴定结果提取菌株DNA，并进行16SrDNA扩增，将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果见图3。将扩增得到的16SrDNA送至大连美仑生物技术有限公司进行测序，测序结果如SEQIDNO.1所示。然后对测序结果进行比对，构建系统发育树，鉴定菌株的种属关系。系统发育树结果见图4。所述MRS固体培养基包括如下浓度的组分：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠5g/L、吐温-801mL/L、柠檬酸二胺2g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、溴甲酚紫溶液2mL/L、琼脂18g/L。所述MRS固体培养基的pH为6.3。经过上述分离纯化，本专利技术纯化得到的单菌落为乳白色，直径2mm，表面光滑、边缘整齐、中央隆起，菌落周围呈黄色。镜检结果为菌株短杆状，(1～1.2)μm×(1～1.5)μm，单个、成对、短链排列，将分纯菌株命名为LR002。图2显示的革兰氏染色结果为：阳性，兼性厌氧。图4系统发育树构建结果表明：LR002菌株与植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)的同源性为100％。最终将本申请分离到的菌株鉴定为植物乳杆菌LR002。实施例2菌株耐酸实验将菌株活化后制成菌体浓度为107cfu/ml的菌悬液，按4％的接种量接入pH值分别为1、2、3的MRS液体培养基内，37℃静置培养，分别于0、1、2和3h从中吸取菌悬液，进行梯度稀释，涂布至对应的固体培养基上，于37℃恒温培养箱倒置培养48h，选取菌落数30～300之间的平板进行计数，3个平行求平均值。得到菌株对酸的耐受力，结果见图5。图5表明，菌株具有较好的耐酸性，在pH3.0的条件下菌体出现生长现象，pH2.0、pH1.0时，随着培养时间的延长，菌株的存活率有所下降。实施例3菌株耐胆盐实验将菌株活化后制成菌体浓度为108cfu/ml的菌悬液，按4％的接种量分别接入胆盐浓度分别为0.3、1.5、3g/L的MRS液体培养基中，37℃静置培养，分别于0、3h从中吸取菌悬液，进行梯度稀释，涂布至对应的固体培养基上，于37℃恒温培养箱倒置培养48h，选取菌落数30～300之间的平板进行计数，3个平行求平均值。计算菌株对胆盐的耐受能力，耐受结果见图6。所述菌株对胆盐的耐受力的计算公式为：胆盐耐受力(％)＝Nt/N0×100％。式中:Nt：3h含胆盐培养基活菌数(cfu/ml)；N0：0h含胆盐培养基的活菌数(cfu/ml)。图6显示：菌株LR002在胆盐浓度为3g/L时，菌株耐受能力为94.12％，具有较好的耐胆盐能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株植物乳杆菌LR002，其特征在于，拉丁文名称为：LactobacillusplantarumLR002，保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2021年5月13日，保藏编号为：CCTCCNO：M2021527。/n

【技术特征摘要】
1.一株植物乳杆菌LR002，其特征在于，拉丁文名称为：LactobacillusplantarumLR002，保藏单位名称为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2021年5月13日，保藏编号为：CCTCCNO：M2021527。


2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌LR002，其特征在于，所述植物乳杆菌LR002的16SrDNA的序列如SEQIDNO.1所示。


3.权利要求1或2所述的植物乳杆菌LR002在制备耐酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李姿茹，舒文秀，刘梓琦，蒋柳芽，周瑞，徐红伟，臧荣鑫，吴慧昊，
申请(专利权)人：西北民族大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62