一种测定噬菌体对抗生素敏感性的方法技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种噬菌体对抗生素敏感性的评价方法。本发明专利技术评价方法建立了菌液OD

【技术实现步骤摘要】
一种测定噬菌体对抗生素敏感性的方法
本专利技术涉及生物分析检测
，尤其涉及一种测定噬菌体对抗生素敏感性的方法。
技术介绍
采用抗生素治疗细菌性疾病是公认的有效方式；但抗生素长期使用会打破肠道菌群平衡，破坏肠道屏障，进而影响动物免疫力，导致疾病难以控制。2015年华中农大刘建华教授和中国农大沈建忠教授联名发表关于硫酸粘杆菌耐药性的文章，证明了人类病原菌的耐药性与动物使用促生长抗生素有关。耐药菌可通过食物链从动物传递到人类，每年有超过2万人死于超级细菌，所以我国2016年开启了抗生素禁用之旅。噬菌体可以感染并裂解相应的宿主菌，具有特异性强、自我增殖快、繁殖能力强等优点，且噬菌体会随着宿主的死亡而死亡，动物体内不会有残留，与抗生素相比更加的安全。近年来，噬菌体在畜禽群细菌性疾病的控制与治疗方面取得许多成果，越来越受到人们的关注。巴氏噬菌体可用于治疗猪巴氏杆菌病，但实际养殖中，在利用巴氏噬菌体治疗猪巴氏杆菌病的同时存在使用抗生素的现象，故需要评估猪养殖过程抗生素是否会对噬菌体的杀菌效果产生影响，检测噬菌体效价在抗生素的干扰下会发生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种噬菌体对抗生素敏感性的评价方法，其特征在于，包括：/n步骤1：将噬菌体接种至含抗生素的生理盐水中，培养0～72h，分别取0h、24h、48h、72h的培养液，得待测样液；/n步骤2：将噬菌体接种至不加抗生素的生理盐水中，培养0～72h，分别取0h、24h、48h、72h的培养液，得对照样液；/n步骤3：按照步骤(1)～(3)测定待测样液和对照样液中噬菌体的效价，比较同一培养时间下待测样液和对照样液的噬菌体效价，判定噬菌体对所述抗生素的敏感性高低：/n(1)向玻璃平板中加入第一培养基，凝固，得下层平板；/n(2)将病原菌接种至第二培养基中，培养至OD

【技术特征摘要】
1.一种噬菌体对抗生素敏感性的评价方法，其特征在于，包括：
步骤1：将噬菌体接种至含抗生素的生理盐水中，培养0～72h，分别取0h、24h、48h、72h的培养液，得待测样液；
步骤2：将噬菌体接种至不加抗生素的生理盐水中，培养0～72h，分别取0h、24h、48h、72h的培养液，得对照样液；
步骤3：按照步骤(1)～(3)测定待测样液和对照样液中噬菌体的效价，比较同一培养时间下待测样液和对照样液的噬菌体效价，判定噬菌体对所述抗生素的敏感性高低：
(1)向玻璃平板中加入第一培养基，凝固，得下层平板；
(2)将病原菌接种至第二培养基中，培养至OD600＝0.8～1.3，获得病原菌培养液；取第三培养基，加入所述病原菌培养液和与所述病原菌培养液等体积的马血清，迅速、均匀地加入到步骤(1)的下层平板上，凝固，得双层平板；
(3)取待测样液和对照样液，分别稀释，取稀释液分别按照双层平板法测定噬菌体的效价；
所述步骤(2)中，病原菌培养液的加入量V以μL计，每8ml第三培养基中所述病原菌培养液的加入量V由以下公式计算得到：
560＝病原菌菌液OD600×V。


2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述待测样液中，噬菌体浓度为7～15亿PFU/ml。


3.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，所述培养为37℃、100～140rpm恒温振荡培养。


4.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国强，朱琳，李海超，
申请(专利权)人：河南兴华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41