猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及检测技术领域，具体涉及一种猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR(分子信标‑MGB)检测试剂盒及其检测方法，主要包括EMCV PCR反应液和EMCV引物探针的混合液、EMCV酶系、EMCV阴性对照、EMCV阳性对照和EMCV定量标准品。采用该试剂盒可以实现EMCV基因的定量检测。试剂盒的检测灵敏度高，最低检测限为10

【技术实现步骤摘要】
猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法
本专利技术涉及检测
，具体涉及一种猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
脑心肌炎是由猪脑心肌炎病毒引起的猪、某些哺乳动物(包括灵长类动物)的以脑炎、心肌炎或心肌周围炎以及母猪的繁殖障碍等为主要临床特征的一种急性传染病。EMCV是单股正链RNA病毒，属微RNA病毒科心病毒属的唯一成员，病毒颗粒直径25-30nm，呈二十面立体对称结构，无囊膜，具有独特的单一血清型，其基因组全长约7.8kb，含有一个开放性阅读框(ORF)。该病毒可以感染多种动物，猪感染EMCV后可导致怀孕母猪流产、产死胎、弱胎、木乃伊胎，但通常不发生母猪死亡或以亚临床感染的形式存在。自1945年首次分离得到第一株EMCV以来，世界各国相继有该病发生的报道,人体内也已检测到相应的抗体，其公共卫生学意义受到关注。猪脑心肌炎病毒的自然宿主是鼠和其它多种哺乳动物，在自然感染发病病例中猪是最易感的家畜。因猪血浆生物制品如白蛋白、凝血酶和纤维蛋白原成分越来越多的被应用于替代人血液相应活性因子，用于治疗多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，包括EMCV引物探针混合液，其特征在于：/nEMCV引物的核苷酸序列如下所示：/n引物EMCV-F：/n5’-CAGCAAAGCTATGGGATCAGC-3’，(SEQ ID NO：1)，/n引物EMCV-R：/n5’-TCATTGCTTTTTGGGCGTC-3’，(SEQ ID NO：2)，/nEMCV探针的核苷酸序列如下所示：/n探针EMCV-P：5’-

【技术特征摘要】
1.一种猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，包括EMCV引物探针混合液，其特征在于：
EMCV引物的核苷酸序列如下所示：
引物EMCV-F：
5’-CAGCAAAGCTATGGGATCAGC-3’，(SEQIDNO：1)，
引物EMCV-R：
5’-TCATTGCTTTTTGGGCGTC-3’，(SEQIDNO：2)，
EMCV探针的核苷酸序列如下所示：
探针EMCV-P：5’-CGCACGTTGGCATCGAGCAAAGCCGTATGCG-3’，(SEQIDNO：3)，
探针具有分子信标结构：5’端具有荧光基团F和CGCA结构；3’端具有TGCG和淬灭基团Q结构，形成茎-环结构；
探针序列5’端荧光基团Q为FAM、HEX、ROX、VIC、CY5、TET中一种，探针序列3’端淬灭基团F为MGB、TAMRA、BHQ1和BHQ2中一种。


2.根据权利要求1所述的猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括EMCVPCR反应Buffer和EMCV引物探针的混合液、EMCV酶系、EMCV阴性对照、EMCV阳性对照和EMCV定量标准品。


3.根据权利要求2所述的猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的EMCV阳性对照为含有确定拷贝数的EMCV重组质粒；EMCV定量标准品为含有不同拷贝数的重组质粒；所述的EMCV酶系为热启动TaqDNA聚合酶、逆转录酶MMLV、RNA酶抑制剂RNasin和dNTPs的混合液。


4.根据权利要求1所述的猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：探针序列的5’端标记FAM、ROX、VIC、CY5、TET荧光素中的一种，探针序列3’端标记TAMRA、MGB、BHQ1和BHQ2等淬灭基团中一种。


5.根据权利要求1或2或4所述的猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：引物浓度200nmol/L，探针浓度120nmol/L。


6.根据权利要求2所述的猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：EMCVPCR反应Buffer中包括HEPES缓冲液，在PCR反应中的终浓度HEPES为20mmol/L，(NH4)2SO4的反应终浓度为10mmol/L，KCl的反应终浓度为50mmol/L，蔗糖的终浓度为25mmol/L，Mg2+的终浓度为2.5mmol/L。


7.根据权利要求2所述的猪脑心肌炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的EMCV酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：余美伦，朱佳伟，秦香芹，李常禄，孟庆雪，宫佳欣，高丹，范宝祥，赵君，
申请(专利权)人：哈尔滨瀚邦医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23