一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法技术

本发明专利技术公开了一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法，包括如下步骤：(1)病毒原液制备；(2)病毒载体的制备：取适量事先配制好的粘附基质加至1.5*1.5cm的正方形载体上，后再加100ul上述病毒原液至表面，然后送入安全柜内干燥；(3)化学淋浴；(4)采样、稀释待测病毒液以及接种培养；(5)观察细胞病变、计数以及计算lgTCID

【技术实现步骤摘要】
一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法
本专利技术涉及实验室生物安全领域，特别涉及一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法。
技术介绍
BSL-4实验室是防护水平最高的实验室，是国之重器，通常用于开展危险度1级微生物分离培养、诊断、鉴定、疫苗研发和评价等等研究工作。正压防护服是BSL-4实验室关键个人防护装备，正压防护服一般与生命支持系统一起使用，正压防护服内的正压差一般超过+100Pa，这样既满足了实验人员的呼吸要求，也保证了实验人员的安全。实验人员穿着正压防护服完成实验后要经过化学淋浴消毒后才能脱去正压防护服，才能保证实验室生物安全。CNAS-CL53:2004中第5.10.2项正压防护服表面(头部、前胸、后背、腋下、裤裆、脚底)消毒验证，所有样本的杀灭对数值均≥3。TCID50对数值≥3即可满足消毒要求。消毒技术规范2002版中2.1.2.9消毒剂对其它表面消毒模拟现场鉴定试验中评价规定试验重复3次，阳性对照组菌数符合要求，阴性对组无菌生长，所有样本的杀灭对数值均≥3.00，可判为消毒合格。与此同时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)病毒原液制备/n(2)病毒载体的制备：取适量事先配制好的粘附基质加至1.5*1.5cm的正方形载体上，后再加100ul上述病毒原液至表面，然后送入安全柜内干燥；/n(3)化学淋浴：将干燥好的病毒载体粘粘在正压防护服头部、左腋下、前胸、后背、裤裆、右脚底、左手臂、右膝盖以及左膝盖位置处，同时设置阴性对照点；人穿着正压防护服进入化学淋浴间，按照化学淋浴程序进行化学淋浴消毒；/n(4)采样、稀释待测病毒液以及接种培养：对经化学淋浴结束以后的病毒载体进行采样，并对所采样进行稀释，将稀释以后的样液进行接种培养；/n(...

【技术特征摘要】
1.一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)病毒原液制备
(2)病毒载体的制备：取适量事先配制好的粘附基质加至1.5*1.5cm的正方形载体上，后再加100ul上述病毒原液至表面，然后送入安全柜内干燥；
(3)化学淋浴：将干燥好的病毒载体粘粘在正压防护服头部、左腋下、前胸、后背、裤裆、右脚底、左手臂、右膝盖以及左膝盖位置处，同时设置阴性对照点；人穿着正压防护服进入化学淋浴间，按照化学淋浴程序进行化学淋浴消毒；
(4)采样、稀释待测病毒液以及接种培养：对经化学淋浴结束以后的病毒载体进行采样，并对所采样进行稀释，将稀释以后的样液进行接种培养；
(5)观察细胞病变、计数以及计算lgTCID50：对步骤(4)中接种培养后的病毒，在显微镜下面观察细胞病变率；计数以后计算lgTCID50；
其中，所述粘附基质为5％BSA+7％蛋白胨+20％黏蛋白，且1.5*1.5cm的正方形载体其材质与步骤(3)化学淋浴步骤中所穿的正压防护服材质相同。


2.根据权利要求1所述的一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法，其特征在于，所述步骤(1)中病毒原液制备具体流程为：将细胞接种于T75细胞培养瓶中，待形态良好、长成单层时，去除原始培养基，用PBS液洗3遍，每管加入病毒后放置在二氧化碳培养箱中孵育1h，每瓶加20ml维持液，细胞培养箱中培养，每日观测并记录细胞病变(CPE)，待CPE出现+++～++++号时，将细胞冻融1-2次，收集上清，离心，超滤，收集病毒上清液，即得病毒原液。


3.根据权利要求1所述的一种四级生物安全实验室病毒化学淋浴消毒验证方法，其特征在于，所述步骤(3)中化学淋浴消毒程序为消毒剂160s-暴露维60s-清水淋浴220s+洗刷辅助。

【专利技术属性】
技术研发人员：王云川，郑吟秋，李静美，朱凡丽，杨梦莉，孙强明，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53