一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法技术

本发明专利技术提供一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法，具体涉及到病毒技术领域。本发明专利技术包括如下步骤：合成肽核酸单体‑树脂；合成寡聚体‑树脂；5’端头荧光团的键合。本发明专利技术提出的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法，能够提高新型冠状病毒的检测速度、灵敏度和准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法
本专利技术属于病毒
，具体涉及一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构及合成方法。
技术介绍
所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。新型冠状病毒是一种仅含有RNA的病毒，病毒中特异性RNA序列是区分该病毒与其他病原体的标志物，即靶序列。检测新型冠状病毒特异序列的方法中最常见的是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)。核酸检测的试剂实际上是一段特异性寡核苷酸序列，该序列是与病毒中特异性RNA靶序列相匹配的，两者通过碱基配对原理杂交后，释放出荧光信号，从而特异性识别病毒。在众多的核酸探针中，荧光核酸探针主要采用荧光强度作为定量分析的信号，具有灵敏度高、设计多样化和定量分析能力强等特点，成为分析化学的研究热点之一。但荧光核酸探针也存在背景噪音大，识别特异性不十分理想，有假阳性信号等缺点。PNA是一种人工合成的具有多肽骨架的DNA类似物，正因为与DNA及其相似的结构，PNA能够通过Watson-Crick碱基互补形式与单链核酸杂交形成双螺旋的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构，其特征在于：以肽核酸(即PNA)为骨架模拟和取代常规DNA或RNA中磷酸戊糖酯骨架，即探针骨架为PNA骨架；PNA侧链上用以杂交识别的碱基序列的正确顺序，即为下列顺序：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'或者5‘-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构，其特征在于：以肽核酸(即PNA)为骨架模拟和取代常规DNA或RNA中磷酸戊糖酯骨架，即探针骨架为PNA骨架；PNA侧链上用以杂交识别的碱基序列的正确顺序，即为下列顺序：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'或者5‘-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3’。


2.根据权利要求1所述的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构的合成方法，其特征在于，制备0.1mmolPNA的方法包括如下步骤：
S1：将0.1g树脂与适量DMF加入柱反应器中，振摇溶胀30min后抽干，DMF洗6次，每次振摇3min，抽干；将Fmoc-肽核酸单体0.5mmol、DCC0.5mmol、HOSU0.5mmol、DMAP0.1mmol用适量DMF溶解，半小时后转移至固相反应器，加入适量DMF避光振摇反应3h，反应结束后抽干，用DMF、DCM、MeOH分别洗3次，每次振摇3min，抽干；
S2：向S1制备的溶液中加入脱保护试剂20％(V/V)哌啶/DMF溶液，振摇30min脱下树脂上的首个PNA单体的保护基Fmoc，抽干，DMF洗6次，每次振摇3min，抽干；将从碱基序列3’→5’第二个Fmoc-PNA单体0.3mmol、DCC0.3mmol、HOSU0.3mmol、DMAP0.1mmol用适量DMF溶解，半小时后转移至装有肽核酸-树脂的固相反应器，加入适量DMF避光振摇反应3h；反应结束后抽干，用DMF、DCM、MeOH分别洗3次，每次振摇3min，抽干；重复S2中的上述步骤，脱去N-末端的Fmoc保护基，进入连接下一个肽核酸单体循环，不断两两缩合，直至合成预期得到的寡聚体；最后一次缩合完成后，得到的寡聚体-树脂以甲醇洗5次，每次振摇2min，抽干，抽真空干燥过夜，称重；
S3：称取S2步骤中制得的一定量寡聚体-树脂复合物放入反应器中，并按比例配好切割试剂，均放入冰箱中冷却数分钟；向反应器中缓慢加入切割剂，室温下磁力搅拌3h；过滤，加入4ml裂解溶液重复切割0.5h；过滤，用10ml90％TFA/DCM洗涤树脂，洗涤液与滤液一并转入烧瓶，35℃减压蒸馏；浓缩液逐滴滴入十倍体积的预冷乙醚，振荡，冰箱静置30min；高速离心，倒去上清液，真空干燥过夜，得粗产品；用重蒸水溶解，冻干，得到白色粉末，称重。


3.根据权利要求2所述的一种检测新型冠状病毒的PNA探针结构的合成方法，其特征在于，5’端头荧光团的键合包括如下步...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘相，茆晨鑫，于桂琴，汪硕硕，刘丽君，魏晓辉，武文君，姜瑞婷，
申请(专利权)人：兰州大学，兰州大学淮安高新技术研究院，
类型：发明
国别省市：甘肃;62