检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组、试剂盒及应用。针对检测南芥菜花叶病毒存在的问题，本发明专利技术设计并筛选了具有高特异性的检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，并进一步设计了试剂盒和检测方法。本发明专利技术提供的试剂盒和方法特异性好，对南方菜豆花叶病毒、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒和菜豆荚斑驳病毒等检疫性病毒都呈阴性反应；灵敏度高，实时荧光检测方法最低可以检测到浓度为5×10

【技术实现步骤摘要】
检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组、试剂盒及应用
本专利技术属于生物
，涉及一种大豆种传检疫性病毒南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组、快速检测试剂盒及应用。技术背景南芥菜花叶病毒是我国进境植物检疫性有害生物，是正义RNA病毒科(Secoviridae)，豇豆花叶病毒亚科(Commovirinae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的成员。南芥菜花叶病毒为单链正义RNA病毒，病毒粒体为球状正二十面体，直径为25～30nm，致死温度为55～61℃，室温下体外可存活1～2周。该病毒寄主范围广泛，可侵染涉及174属215种植物，主要危害的为葡萄、黄瓜、西葫芦、草莓。大豆、番茄、菜豆等经济作物。ArMV引起的最常见症状是叶片斑驳和脱落、植株矮化、严重畸形和耳突等，在葡萄上表现软皮和茎凹症状，在黄瓜上表现斑驳症状，严重影响农作物产量和质量。该病毒目前主要分布在荷兰、比利时等欧洲国家和美国、加拿大、澳大利亚、新西兰、南非、日本等，我国尚未有报道。目前，南芥菜花叶病毒的检测方法主要包括ELISA、RT-PCR和实时荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述交叉引物等温扩增引物组由外围置换引物ArBF2、外围置换引物ArBR2、扩增引物ArDR2、扩增引物ArMBR2、交叉引物ArCPF2组成；/n所述外围置换引物ArBF2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；/n所述外围置换引物ArBR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；/n所述扩增引物ArDR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；/n所述扩增引物ArMBR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；/n所述交叉引物ArCPF2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述交叉引物等温扩增引物组由外围置换引物ArBF2、外围置换引物ArBR2、扩增引物ArDR2、扩增引物ArMBR2、交叉引物ArCPF2组成；
所述外围置换引物ArBF2的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；
所述外围置换引物ArBR2的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
所述扩增引物ArDR2的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；
所述扩增引物ArMBR2的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；
所述交叉引物ArCPF2的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。


2.如权利要求1所述的检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述扩增引物ArDR2的5’端有6-羧基荧光素标记，扩增引物ArMBR2的5’端有生物素荧光基团标记。


3.如权利要求1所述的检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增引物组，其特征在于，所述外围置换引物ArBF2、外围置换引物ArBR2、扩增引物ArDR2、扩增引物ArMBR2和交叉引物ArCPF2的摩尔比为：1：1：3：3：5。


4.一种检测南芥菜花叶病毒的交叉引物等温扩增试剂，其特征在于，包括权利1-3任一项所述的交叉引物等温扩增引物组；
所述外围置换引物ArBF2和所述外围置换引物ArBR2在所述扩增试剂中的终浓度均为0.2μmol/L；
所述扩增引物ArDR2和扩增引物ArMBR2在所述扩增试剂中的终浓度均为0.6μmol/L；
所述交叉引物ArCPF2在所述扩增试剂中的终浓度均为1μmol/L。
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【专利技术属性】
技术研发人员：张蓬军，杨倩倩，王道，俞晓平，孙凯，刘光富，尹传林，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33