【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法
本专利技术涉及分子生物学
，特别涉及一种基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法。
技术介绍
长链非编码IncRNA(longnon-codingRNA)是一类长度超过200nt的RNA分子，位于细胞核或胞质内；其只转录不翻译的RNA分子，其参与细胞分化、凋亡、免疫应答、生长发育、糖脂代谢、炎症以及肿瘤等多种生命过程。长链非编码RNA按照其来源可分为AntisenselncRNA(反义长非编码RNA)，Intronictran(内含子非编码RNA)，LongintergencnoncodingRNA(lincRNA)，Promoter-associatedlncRNA(启动子相关lncRNA)，UTRassociatedlncRNA(非翻译区lncRNA)五种类型。lncRNA在转录前、转录水平与转录后水平上均具有重要作用。在整个基因组转录产物中，lncRNA所占的比例远远超过编码RNA所占的比例，与人类和动物相比，植物l...
【技术保护点】
1.一种基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法，其特征在于，所述方法包括：/n选取所述lncRNA转录起始位点上下游100bp序列范围用于设计CRISPRi系统使用的向导sgRNA序列；/n获取用于所述CRISPRi系统使用的sgRNA核苷酸链Oligo；/n切割慢病毒lenti-sgRNA载体，利用T4-DNA连接酶将修改后所述sgRNA序列对应的所述Oligo连接到所述慢病毒sgRNA载体上；/n针对标靶细胞系，利用慢病毒包装试剂盒包装所述慢病毒sgRNA载体及crspr-dcase9载体，分别制备红色荧光lenti-dcase9-mche...
【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法，其特征在于，所述方法包括：
选取所述lncRNA转录起始位点上下游100bp序列范围用于设计CRISPRi系统使用的向导sgRNA序列；
获取用于所述CRISPRi系统使用的sgRNA核苷酸链Oligo；
切割慢病毒lenti-sgRNA载体，利用T4-DNA连接酶将修改后所述sgRNA序列对应的所述Oligo连接到所述慢病毒sgRNA载体上；
针对标靶细胞系，利用慢病毒包装试剂盒包装所述慢病毒sgRNA载体及crspr-dcase9载体，分别制备红色荧光lenti-dcase9-mcherry慢病毒以及蓝色荧光lenti-sgRNA-BFP慢病毒；
所述lenti-dcase9-mcherry慢病毒和所述lenti-sgRNA-BFP慢病毒转染所述标靶细胞系，分选红色荧光蛋白mcherry、蓝色荧光蛋白BFP双重阳性细胞；
筛选转染后的标靶细胞以获得稳定转染慢病毒sgRNA及dcase9载体的单克隆标靶细胞系。
2.根据权利要求1所述的基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法，其特征在于，所述选取所述lncRNA转录起始位点上下游100bp序列范围用于设计CRISPRi系统使用的向导sgRNA序列的步骤之前，所述方法还包括：
获取目标细胞核内长链非编码lncRNA全长DNA序列。
3.根据权利要求1所述的基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法，其特征在于，所述切割慢病毒sgRNA载体，利用T4-DNA连接酶将修改后所述sgRNA序列对应的所述Oligo连接到所述慢病毒sgRNA载体上的步骤之前，所述方法包括：
根据所使用的慢病毒sgRNA载体修改所述sgRNA5’端及3’端序列。
4.根据权利要求1所述的基于CRISPR-dCase9系统抑制细胞核内lncRNA表达的方法，其特征在于，所述SgRNA的Oligo是根据以下sgRNA核心序列片段以及所连接载体修饰后所得的：
sgRNA核心序列1:GAAACCGAAGGCCCGAGCGGAGG；
sgRNA核心序列2:CCAGCCGGCCTGCGCACCGGCGG；
sgRNA核心序列3:CTGGGGACTCGCCT...
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