一种利用正向调控基因构建高产纤维素酶菌株的方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种利用正向调控基因构建高产纤维素酶菌株的方法及其应用。本发明专利技术首先将PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因连接到质粒载体上得到新的重组质粒，所述PpgdA基因碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述正向调控基因Xyr1基因序列如SEQ ID NO.2所示。再将同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒转化至相应宿主细胞中制得表达转化体。最后将重组表达转化体转化到里氏木霉中，得到重组菌株。与现有技术相比，本发明专利技术通过构建带有强启动子PpgdA的正向调控基因Xyr1的表达元件，将其转化到里氏木霉中，得到一株高产纤维素酶的基因工程菌株，提高了纤维素酶的表达量。

【技术实现步骤摘要】
一种利用正向调控基因构建高产纤维素酶菌株的方法及应用
本专利技术涉及生物工程
，尤其是涉及一种利用正向调控基因构建高产纤维素酶菌株的方法及应用。
技术介绍
随着石油资源日趋短缺、储量日益下降，利用农业秸秆为原料发酵生产燃料乙醇及各种化工产品，以满足人类社会发展需求，被认为是一个可代替石油的清洁化能源来源。专家认为以农作物秸秆为代表的木质纤维素类物质生产乙醇有良好的发展前景，同时有助于解决农业生产废弃物的处理问题，这样不仅缓解了资源危机和粮食危机，对环境污染也有很重要的意义，更为可持续发展提供了保证。目前，世界各国都在积极研究利用非粮食手段生产生物燃料，用以解决日益严重的能源危机、气候问题以及粮食短缺问题。木质纤维素作为地球上储量最丰富的多糖类物质，利用其生产燃料乙醇已成为各国研究的热点领域。木质纤维素主要成分包括纤维素、半纤维素和木质素，以及少量其他组分，例如乙酰基、矿物质和酚醛取代基。根据木质纤维素生物质类型不同，聚合物以不同的聚合度以及不同的组成形成了复杂的三维非均匀结构。经典的理论认为，纤维素降解是在三种纤维素酶组分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种强启动子PpgdA，其特征在于，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种强启动子PpgdA，其特征在于，其基因序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种含有PpgdA基因的重组质粒，其特征在于，将PpgdA基因连接到质粒载体上得到的新的重组质粒，所述PpgdA基因碱基序列如SEQIDNO.1所示。


3.一种含有PpgdA基因的重组表达转化体，其特征在于，将权利要求2所述含有PpgdA基因的重组质粒转化至相应宿主细胞中制得。


4.一种同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒，其特征在于，所述同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒，是指将PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因连接到质粒载体上得到的新的重组质粒，所述PpgdA基因碱基序列如SEQIDNO.1所示，所述正向调控基因Xyr1基因序列如SEQIDNO.2所示。


5.一种如权利要求4所述同时含有PpgdA基因和正向调控基因Xyr1基因的重组质粒的获得方法，其特征在于，
将含有PpgdA基因的重组质粒pGPDA-hph质粒进行EcoRV单酶切，然后对酶切后的质粒进行去磷酸化，最后采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨明，李秋园，代淑梅，
申请(专利权)人：上海中溶科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31