一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一株新的枯草芽孢杆菌ZB1（

【技术实现步骤摘要】
一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其应用
本专利技术涉及功能微生物筛选与应用
，具体涉及一种用于防治线虫病害的枯草芽孢杆菌及其在农业生产中的应用。
技术介绍
农作物在生长过程中会发生病害，给现代农业生产造成较大影响。防止农作物病害就变得迫在眉睫，防控病害的主要途径有化学防治、物理防治、生物防治等。20世纪80年代开始，人们已经将生物防治用于农作物病除害处理和应用，生物防治是指用一种生物与另一种生物进行对抗，从而达到防治农作物病害的目的。它具有高效、安全、环境友好等特点，已被国内外研究者关注。关于生防菌防治农作物病害的报道非常多，已在农作物病害防治中取显著效果。目前应用较多生防菌种主要包括细菌、真菌及放线菌3大类。关于芽孢杆菌和假单胞杆菌的报道较多，芽孢杆菌中用于植物病虫害防治的主要有枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌等，其中苏云金芽孢杆菌是开发最成功的细菌杀虫剂，可用于防治园林植物上的多种昆虫，特别是鳞翅目害虫；假单胞杆菌能在植物根系周围的土壤中大量增殖，保护植物免遭受病原的侵害，其中荧光假单胞菌是近几十年来研究报道最多一类生防菌，但较少能制作成为生防制剂广泛应用和批量生产。例如，王勤英等公开了一株对鳞翅目害虫广谱高效的苏云金芽孢杆菌菌株及其可湿性粉剂的制备和应用，该菌株含有等多个杀虫基因，对梨小食心虫、棉铃虫、美国白蛾、苹小卷叶蛾、舟型毛虫、苹果蠹蛾、棉铃虫、斜纹夜蛾、小菜蛾、甜菜夜蛾等多种鳞翅目害虫具有高效的致死作用。侯园园利用绿针假单胞菌G5菌株对苦瓜枯萎病SG－15菌株和黄瓜枯萎病菌FOC菌株试验，具有明显拮抗作用，抑制率分别达到60％以上和78.39％。木霉菌是一种重要的植物病害生防因子，自被发现能抑制植物病原菌增殖以来，各国科研人员对其进行了大量的试验，目前在农业生产中应用较普遍，随着对木霉菌在农业上的不断研究和对其作用机制的日臻完善，木霉菌和它的代谢产物在园林植物上的应用也将会有良好的发展前景。有研究报道，其对杨树叶枯病、烂皮病、泡溃疡等多种病菌有较好的抑制作用。毛壳菌在防治植物病害方面表现也比较突出，对多种农作物的种子腐烂和种苗猝倒都有明显的抑制作用，对番苹果黑星菌、百合灰霉病等也能表现出较好的抑制效果。放线菌是细菌的特殊分支，应用最多的是链霉菌和它的变种，已有许多的生防制剂广泛地应用在工农业和医药等领域，如井冈霉菌素、阿维菌素等。阿维菌素是目前应用最普遍的生物农药，能防治鞘翅目、鳞翅目、蜱螨目的百余种害虫，园林上可用来防治各类植物叶螨、蚜虫、木虱、蓟马等病虫害。未来利用微生物防治植物病虫害会有广阔的前景，尤其是在增强植物对病虫害的防御、促进植物生长、改善土壤以及增加营养物质的吸收利用率等方面。通过对生防微生物全面系统的研究，并借助于生物技术等多门学科的研究方法和手段，进一步完善其基础理论，筛选出优良的生物防治菌株，可以进一步促进生防微生物的研究工作不断深入。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)及其在农业生产中的应用。所述枯草芽孢杆菌能有效防治根结线虫病害，对黄瓜白粉病等真菌性病害也有较好的防治效果，应用前景广泛。本专利技术一方面提供了一种枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌ZB1(BacillussubtilisZB1)，已于2020年11月16日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCCNO：M2020741。本专利技术一方面提供了所述枯草芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。所述植物病害为线虫病、白粉病或根腐病。本专利技术一方面提供了一种微生物制剂，包含上述枯草芽孢杆菌ZB1。所述微生物制剂还包含芽孢杆菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或两种或多种的组合。所述的芽孢杆菌优选地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌或暹罗芽孢杆菌。所述微生物制剂中枯草芽孢杆菌ZB1的活菌量至少为109CFU/g。本专利技术还提供了上述微生物制剂在植物病害防治中的应用。本专利技术还提供了一种肥料，包含上述微生物制剂。本专利技术所述枯草芽孢杆菌ZB1可有效提高作物的长势及产量，同时对黄瓜、甜瓜、丝瓜等葫芦科作物易发的根结线虫病害的防治效果显著。其中，枯草芽孢杆菌ZB1发酵液在24h时对线虫的触杀死亡率达100％；枯草芽孢杆菌ZB1可有效抑制线虫虫卵孵化和线虫幼虫生长，并且具有很好的杀线虫效果，在接种后第7天时对线虫虫卵的孵化抑制率高达91.67％，第12天时线虫的死亡率高达91.11％；枯草芽孢杆菌ZB1对黄瓜根结线虫病的防治效率高达86.5％，且枯草芽孢杆菌ZB1处理组黄瓜苗期长势明显优于对照组，根系也比对照组发达，根结数显著减少，取得了意料不到的技术效果。枯草芽孢杆菌ZB1对立枯丝核菌、白粉病菌、锈病菌和草藤仓赤霉菌具有较强的抑菌效果，抑菌带宽度超过31mm。该菌株可显著降低黄瓜白粉病的发生，防治效率最高可达84.5％，效果显著。此外，所述枯草芽孢杆菌ZB1具有较高的产酶水平，发酵3d时产几丁质酶活性最高达3.34U/mL，产蛋白质酶活性最高达12.4U/mL。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌ZB1可单独，或与其他芽孢杆菌、假单胞菌、土壤杆菌、固氮菌、根瘤菌、青霉菌、曲霉菌、根霉菌、链霉菌中的任意一种或多种进行组合，作为生防菌剂，或添加到有机肥、化肥等肥料中使用，广泛应用于农业种植生产中，有效防治根结线虫病、白粉病、根霉病等作物常发的真菌性病害，应用前景广阔。附图说明图1为ZB1菌株菌落图；图2为ZB1菌株蛋白质谱峰图；图3为ZB1菌株基因指纹图谱；图4为黄瓜盆栽苗期长势及根结情况对比。具体实施方式对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本专利技术技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本专利技术实施例的具体记载。下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术。实施例1菌株的分离与筛选1、样品来源：山东省青岛市即墨区蔬菜种植大棚黄瓜根际土壤。2、菌株分离：采用梯度稀释涂布法称取10g土壤样品装入有无菌玻璃珠和90mL无菌水的250mL锥形瓶中，充分摇匀。静置后于超净工作台上进行梯度稀释，得到10-4、10-5、10-6三个梯度的稀释液，各取100μL涂布于营养琼脂平板上，重复3次。后置于37℃培养箱中培养，24h后观察生长情况，根据菌落大小、形状和颜色等特征进行分类，挑取单菌落进行纯化培养。最终挑选其中的4株菌，将其编号为A1-A4，并进行液体甘油保种。3、菌株筛选：采用菌株发酵液对线虫的触杀实验取分离纯化到的4株菌接种于装有营养肉汤培养基的试管中，37℃、200r/min摇床中培养48h后，用移液枪取上清液于培养皿中备用。挑取15条实验室保存的线虫于培养皿的发酵液中，置于16℃恒温培养箱内，分别在12h、24本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M2020741。/n

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏号为CCTCCNO：M2020741。


2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的16srDNA序列为SEQIDNO:1。


3.权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌在植物病害防治中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的植物病害为线虫病、白粉病或根腐病。


5.一种微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂包含权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌。


6.如权利要求5的微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂还包含芽孢杆菌、假单胞菌、土...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌红丽，吕宾，苑伟伟，张浩，周英俊，梁莉，赵磊，
申请(专利权)人：山东蔚蓝生物科技有限公司，山东康地恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37