用于富集正三十醇结合物的复合体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种用于富集正三十醇结合物的复合物，包括：正三十醇部分和羧基磁珠，羧基磁珠部分能够被磁场驱动以便将复合物或含有该复合物的复合体从混合物体系中分离。本发明专利技术还公开了该复合物的制备方法，步骤为：使正三十醇与羧基磁珠之间发生酯化反应，生成表面分布有正三十醇的磁珠。本发明专利技术还公开了通过前述复合物从植物总蛋白中富集正三十醇互作蛋白的方法。该方法能够富集正三十醇互作蛋白，以便进一步研究正三十醇互作蛋白的生物学功能与相关遗传通路，促进对植物生产性能的提高。高。高。

Complex for enriching n-triacontanol conjugate and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
用于富集正三十醇结合物的复合体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物化学领域，涉及一种用于富集正三十醇结合物的复合物及其制备方法，特别涉及一种基于磁力分离的用于富集正三十醇互作蛋白的复合物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]正三十醇(也叫三十烷醇，1
‑
三十烷醇)的作用主要体现在促进植物发根、促进植物吸收矿质元素、促进叶片光合、促进花芽萌发等。在农业生产中，喷施正三十醇可以增加作物小穗数和每穗粒数等。
[0003]目前还没有关于正三十醇互作蛋白的报道，主要原因是没有有效的办法找到与正三十醇互作的蛋白。
[0004]正三十醇可能与其互作蛋白共同发挥功能，但是其中详细机理目前还没有报道。
[0005]如果能够找到植物组织内与正三十醇相互作用的蛋白等成分，将有利于进一步研究这些成分的组成和性质，进而人工干预正三十醇的合成与分解途径或潜在的正三十醇启动或参与的信号通路，改善农作物的生产性能。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术第一方面提供了一种用于富集正三十醇结合物的复合物，所述复合物包括正三十醇部分和配体部分，所述配体部分能够被驱动以便将所述复合物或含有所述复合物的复合体从混合物体系中分离。
[0007]在一些实施方式中，所述正三十醇结合物为正三十醇互作蛋白。
[0008]在一些实施方式中，所述正三十醇部分和所述配体部分通过共价键连接。
[0009]在一些实施方式中，所述正三十醇部分和所述配体部分直接连接。
[0010]在一些实施方式中，所述配体部分能够与配体结合物特异性结合以便通过所述配体结合物将所述复合物或含有所述复合物的复合体从混合物体系中分离。
[0011]在一些实施方式中，所述配体部分的材料为能够与正三十醇相结合的修饰的生物素分子，所述配体结合物为固定化的链霉亲和素。
[0012]在一些实施方式中，所述配体部分的材料为连接有末端羧基连接臂的生物素。
[0013]在一些实施方式中，所述配体部分的材料为生物胞素。
[0014]在一些实施方式中，所述配体结合物为链霉亲和素琼脂糖凝胶。
[0015]在一些实施方式中，所述正三十醇部分和所述配体部分间接连接。
[0016]在一些实施方式中，所述配体部分是磁性材料，所述配体部分能够通过磁场驱动以便将所述复合物或含有所述复合物的复合体从混合物体系中分离。
[0017]在一些实施方式中，所述配体部分是磁珠，所述磁珠的表面修饰有末端基团能够与醇羟基反应结合的活性臂。
[0018]在一些实施方式中，所述磁珠为顺磁磁珠。
[0019]在一些实施方式中，所述磁珠的粒径为30
‑
100微米(比如，40微米、微米、50微米、60微米、70微米、80微米、90微米)。
[0020]在一些实施方式中，所述磁珠为羧基磁珠。
[0021]在一些实施方式中，所述活性臂的末端为羧基。
[0022]在一些实施方式中，所述活性臂为C
10
‑
15
的烃链羧酸。
[0023]本专利技术第二方面提供了本专利技术第一方面所述复合物的制备方法，所述制备方法为：将所述正三十醇和所述配体部分原料进行化学反应，形成包括所述正三十醇部分和所述配体部分的所述复合物。
[0024]在一些实施方式中，所述化学反应为酯化反应。
[0025]在一些实施方式中，所述酯化反应为正三十醇与连接有末端羧基连接臂的生物素之间发生酯化反应。
[0026]在一些实施方式中，所述酯化反应为正三十醇与生物胞素之间发生酯化反应。
[0027]在一些实施方式中，所述酯化反应为正三十醇与羧基磁珠之间发生酯化反应。
[0028]在一些实施方式中，所述酯化反应为：将正三十醇溶液与羧基磁珠溶液混合，进行酯化反应，得到所述复合物粗品。
[0029]在一些实施方式中，所述正三十醇溶液为正三十醇溶液的乙醇溶液。
[0030]在一些实施方式中，所述正三十醇溶液与乙醇的用量质量比为2
‑
6:1(比如，3:1、4:1、5:1)。
[0031]在一些实施方式中，所述正三十醇溶液中含有表面活性剂。
[0032]在一些实施方式中，所述表面活性剂为Tween
‑
20。
[0033]在一些实施方式中，所述正三十醇溶液中，所述表面活性剂与所述乙醇的用量体积比为0.5
‑
2:1。
[0034]在一些实施方式中，所述羧基磁珠溶液的溶剂为MES溶液。
[0035]在一些实施方式中，所述MES溶液为浓度10
‑
30g/L的2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸水溶液。
[0036]在一些实施方式中，所述羧基磁珠溶液的浓度为30
‑
70毫克/毫升(比如，35毫克/毫升、40毫克/毫升、45毫克/毫升、50毫克/毫升、55毫克/毫升、60毫克/毫升、65毫克/毫升)。
[0037]在一些实施方式中，将所述羧基磁珠清洗后使用。
[0038]在一些实施方式中，用MES溶液将所述羧基磁珠清洗后使用。
[0039]在一些实施方式中，所述羧基磁珠溶液的溶剂为MES
‑
Mix溶液。
[0040]在一些实施方式中，所述MES
‑
Mix溶液为含有10
‑
30毫克/毫升2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸和3
‑
7毫克/毫升1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺的水溶液。
[0041]在一些实施方式中，所述羧基磁珠溶液的浓度为15
‑
35毫克/毫升(比如，18毫克/毫升、20毫克/毫升、22毫克/毫升、24毫克/毫升、26毫克/毫升、28毫克/毫升、30毫克/毫升、32毫克/毫升)。
[0042]在一些实施方式中，所述酯化反应中，所述正三十醇与所述羧基磁珠的用量质量比为：1:20
‑
40(比如，1:22、1:24、1:26、1:28、1:30、1:32、1:34、1:36、1:38)。
[0043]在一些实施方式中，所述酯化反应的温度20
‑
30℃(比如，22℃、24℃、26℃、28℃)。
[0044]在一些实施方式中，所述酯化反应的时间为60
‑
180min(比如，80min、100min、
120min、140min、160min)。
[0045]在一些实施方式中，在所述酯化反应过程中，间隔3
‑
10min混匀一次。
[0046]在一些实施方式中，在所述酯化反应过程中，间隔10
‑
30分钟，向反应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于富集正三十醇结合物的复合物，所述复合物包括正三十醇部分和配体部分，所述配体部分能够被驱动以便将所述复合物或含有所述复合物的复合体从混合物体系中分离。2.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述正三十醇结合物为正三十醇互作蛋白。3.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述正三十醇部分和所述配体部分通过共价键连接；优选地，所述正三十醇部分和所述配体部分直接连接；优选地，所述配体部分能够与配体结合物特异性结合以便通过所述配体结合物将所述复合物或含有所述复合物的复合体从混合物体系中分离；优选地，所述配体部分的材料为能够与正三十醇相结合的修饰的生物素分子，所述配体结合物为固定化的链霉亲和素；优选地，所述配体部分的材料为连接有末端羧基连接臂的生物素；优选地，所述配体部分的材料为生物胞素；优选地，所述配体结合物为链霉亲和素琼脂糖凝胶；优选地，所述正三十醇部分和所述配体部分间接连接；优选地，所述配体部分是磁性材料，所述配体部分能够通过磁场驱动以便将所述复合物或含有所述复合物的复合体从混合物体系中分离；优选地，所述配体部分是磁珠，所述磁珠的表面修饰有末端基团能够与醇羟基反应结合的活性臂；优选地，所述磁珠为顺磁磁珠；优选地，所述磁珠的粒径为30
‑
100微米；优选地，所述磁珠为羧基磁珠；优选地，所述活性臂的末端为羧基；优选地，所述活性臂为C
10
‑
15
的烃链羧酸。4.权利要求1
‑
3中任一项所述的复合物的制备方法，所述制备方法为：将所述正三十醇和所述配体部分原料进行化学反应，形成包括所述正三十醇部分和所述配体部分的所述复合物。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述化学反应为酯化反应；优选地，所述酯化反应为正三十醇与连接有末端羧基连接臂的生物素之间发生酯化反应；优选地，所述酯化反应为正三十醇与生物胞素之间发生酯化反应；优选地，所述酯化反应为正三十醇与羧基磁珠之间发生酯化反应；优选地，所述酯化反应为：将正三十醇溶液与羧基磁珠溶液混合，进行酯化反应，得到所述复合物粗品；优选地，所述正三十醇溶液为正三十醇溶液的乙醇溶液；优选地，所述正三十醇溶液与乙醇的用量质量比为2
‑
6:1；优选地，所述正三十醇溶液中含有表面活性剂；优选地，所述表面活性剂为Tween
‑
20；
优选地，所述正三十醇溶液中，所述表面活性剂与所述乙醇的用量体积比为0.5
‑
2:1；优选地，所述羧基磁珠溶液的溶剂为MES溶液；优选地，所述MES溶液为浓度10
‑
30g/L的2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸水溶液；优选地，所述羧基磁珠溶液的浓度为30
‑
70毫克/毫升；优选地，将所述羧基磁珠清洗后使用；优选地，用MES溶液将所述羧基磁珠清洗后使用；优选地，所述羧基磁珠溶液的溶剂为MES
‑
Mix溶液；优选地，所述MES
‑
Mix溶液为含有10
‑
30毫克/毫升2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸和3
‑
7毫克/毫升1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺的水溶液；优选地，所述羧基磁珠溶液的浓度为15
‑
35毫克/毫升；优选地，所述酯化反应中，所述正三十醇与所述羧基磁珠的用量质量比为：1:20
‑
40；优选地，所述酯化反应的温度20
‑
30℃；优选地，所述酯化反应的时间为60
‑
180min；优选地，在所述酯化反应过程中，间隔3
‑
10min混匀一次；优选地，在所述酯化反应过程中，间隔10
‑
30分钟，向反应体系中添加一次Mix溶液，每次添加量与反应体系的体积比为：1:10
‑
25；优选地，所述Mix溶液为含有10
‑
30毫克/毫升2
‑
(N
‑
吗啡啉)乙磺酸和30
‑
90毫克/毫升1
‑
(...

【专利技术属性】
技术研发人员：周扬颜，许鹏昊，莫翱玮，陈文秀，孙卫健，郭鹏，
申请(专利权)人：山东大丰园农业有限公司，
类型：发明
国别省市：