一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法技术

一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，包括松茸蛋白粉的提取和水解松茸蛋白粉，所述松茸蛋白粉的提取是将松茸子实体预处理后，溶解在pH为9.5的碱溶液中，进行超声提取，最后调节pH至8.7~9.2，在72~76℃下进行碱提取1.3~1.6h，离心取上清液进行盐析，再进行透析和冷冻干燥。本发明专利技术在pH为9.5下超声，然后进行碱提的复合提取蛋白方式提取的松茸蛋白的提取率为8.34%，松茸蛋白粉制备抗氧化水解肽的水解度达到85.8%。本发明专利技术制备的抗氧化水解肽对DPPH自由基的清除率的IC50为0.38mg/mL；对ABTS自由基的清除率的IC50为64.6μg/mL；对羟基自由基的清除率的IC50为60.4μg/mL。mL。mL。

【技术实现步骤摘要】
一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及抗氧化肽制备
，具体涉及一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法。

技术介绍

[0002]食品在贮存过程中产生的自由基主要通过氧化脂类、蛋白质类物质从而导致食品的风味、香气、质地、颜色等品质的恶化。细胞内，自由基通过氧化修饰DNA、蛋白质、脂质等分子从而引发人类的癌症、动脉硬化和衰老等相关疾病。抗氧化剂是一种化合物，可通过延缓脂质过氧化过程来延长保质期，同时可以预防自由基引起的相关疾病的发生。人造抗氧化剂，如丁基羟基茴香醚（BHA）、丁基羟基甲苯（BHT）等对几种氧化系统表现出很强的抗氧化活性，但它们会带来潜在的健康风险，因此使用受到严格管制。所以，从天然物质中寻找和开发抗氧化剂以取代食品和药材中使用的合成抗氧化剂十分必要。
[0003]松茸（Tricholoma matsutake）是一种与松科植物共生的菌根真菌，其子实体具有十分重要的商业价值，不仅因其具有独特的美味，而且还因其具有降低胆固醇、抗氧化和免疫调节活性等多种生物学活性。但是，松茸蛋白酶解肽是否具有抗氧化潜能尚未见报道。
[0004]现有技术中在蛋白提取过程中，采用了多种手段复合进行提取，比如：超声辅助酶解提取、超声辅助碱提取、酶解法与碱提法复合提取、酶解法与超声辅助碱提法复合提取等方法，但是不同原料体系中的蛋白结构、性质差异很大，其适用的提取方法也不同，且不同的提取方法，在同一体系中提取的蛋白中氨基酸组成、流变性质、热变性温度及微观结构等产生不同，导致其最终蛋白质性能、发挥的效果也不同。目前研究中存在的问题是，松茸子实体蛋白提取困难，提取过程中容易发生变性，导致蛋白提取率较低，提取的蛋白质制得的水解肽的抗氧化性能不高。

技术实现思路

[0005]基于目前存在的技术问题，本专利技术目的在于提供一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，显著提高蛋白提取率，提取的蛋白制备的蛋白酶水解肽具有优异的抗氧化性。
[0006]本专利技术目的通过如下技术方案实现：一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，包括松茸蛋白粉的提取和水解松茸蛋白粉，其特征在于：所述松茸蛋白粉的提取是将松茸子实体预处理后，溶解在pH为9.5的碱溶液中，进行超声提取，最后调节pH至8.7~9.2，在72~76℃下进行碱提取1.3~1.6h，离心取上清液进行盐析，再进行透析和冷冻干燥。
[0007]本专利技术采用在碱性环境下进行超声处理，裂解细胞壁的同时，促进了细胞颗粒薄膜的破裂和溶解，有利于蛋白质的溶出， 同时改变了蛋白质的带电状况，从而改变了蛋白质和蛋白质之间、蛋白质和溶液之间的相互作用，之后停止超声，将pH调节至8.7~9.2，并提高温度至72~76℃，进行单一碱提，进一步破坏细胞壁结构，并促进较短时间内碱和蛋白质
实现正负电荷的结合，从而提高对蛋白的溶解，该方法有效防止蛋白质在提取过程中发生变性，提高了松茸蛋白的提取率，调控了提取的蛋白质的结构、性能和稳定性，使其水解生成的水解肽具有优异的抗氧化性。
[0008]优选的，上述调节pH具体是采用氢氧化钠调节pH至9，在74℃下进行碱提1.5h。
[0009]进一步，上述超声是在功率为200~250W下进行超声处理15~20min。
[0010]进一步，上述盐析具体是在所述上清液中加入饱和度为90%的硫酸铵，在4℃下静置盐析12~24h，盐析后的溶液得沉淀物，所述透析是用PBS磷酸盐缓冲液溶解沉淀物，得松茸粗蛋白溶液，将松茸粗蛋白溶液在10kDa透析袋中进行透析除盐，4℃下静置24h，收集透析袋中溶液即为松茸蛋白溶液。
[0011]进一步，上述水解松茸蛋白，具体是将所述松茸蛋白粉溶解在缓冲液中形成溶液，依次经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的酶解后离心、取上清液冷冻干燥，其中碱性蛋白酶的添加量为松茸蛋白粉质量的2%，酶解环境是pH为9.5，温度为50℃，酶解2h，风味蛋白酶的添加量为松茸蛋白粉质量的2%，酶解环境的pH为7，酶解温度为50℃，酶解时间为2h。
[0012]最具体的，一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：步骤一、松茸蛋白的提取（1）将松茸子实体在60℃下烘干，粉碎后过60目筛后，溶解在pH为9.5的碱溶液中，进行超声，超声功率为200~250W，超声时间为15~20min，然后调节pH至8.7~9.2，在72~76℃下进行碱提取1.3~1.6h，得蛋白提取液；（2）向蛋白提取液中加入饱和度为90%的硫酸铵，在4℃下静置盐析12~24h，盐析后的溶液在10000rpm下离心20min得沉淀物，用PBS磷酸盐溶液溶解沉淀物，得松茸粗蛋白溶液；（3）将松茸粗蛋白溶液在10kDa透析袋中，在4℃下静置24h，收集透析袋中的溶液，将溶液进行冻干，得松茸蛋白粉；步骤二、水解松茸蛋白将步骤1制备的松茸蛋白粉溶解在PBS磷酸盐缓冲溶液中，形成底物质量浓度为5%的溶液，调节溶液pH值为9.5，加入松茸蛋白粉质量2%的碱性蛋白酶，酶解温度为50℃，酶解2h，然后升温煮沸15min，调节溶液pH值至7，温度维持在50℃，加入松茸蛋白粉质量2%的风味蛋白酶，酶解2h，升温煮沸15min，在10000rpm下离心15min，取上清液冷冻干燥。
[0013]本专利技术具有如下技术效果：本专利技术通过pH为9.5时进行超声，然后进行碱提的复合提取蛋白方式提取的松茸蛋白粉提取率为8.34%，松茸蛋白粉制备的抗氧化水解肽的水解度达到85.8%，且整个碱提时间缩短，降低了碱对蛋白的破坏。本专利技术制备的抗氧化水解肽对DPPH自由基清除率的IC50为0.38mg/mL；对ABTS自由基清除率的IC50为64.6μg/mL；对羟基自由基清除率的IC50为60.4μg/mL，具有优异的抗氧化能力，浓度为0.1mg/mL的松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的铁螯合率达到96.4%，在浓度均为10mg/mL，总还原力分别为87.5%。
附图说明
[0014]图1：单一超声法和超声辅助常温碱提法时间对松茸蛋白提取率的影响。
[0015]图2：单一碱提法各因素对松茸蛋白的提取率的影响。
[0016]图3：松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽对DPPH自由基的清除率曲线图。
[0017]图4：松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽对ABTS自由基的清除率曲线图。
[0018]图5：松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽对羟基自由基的清除率曲线图。
[0019]图6：松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽总还原能力测定曲线图。
[0020]图7：松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽螯合铁能力测试曲线图。
具体实施方式
[0021]下面通过实施例对本专利技术进行具体的描述，本专利技术实施例不能理解为对本专利技术保护范围的限制，只是对于本专利技术技术方案的进一步说明，在不脱离本专利技术原理前提下，本领域的技术人员可以根据上述本
技术实现思路
对本专利技术做出一些非本质的改进和调整。
[0022]实施例1一种松茸子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，包括松茸蛋白粉的提取和水解松茸蛋白粉，其特征在于：所述松茸蛋白粉的提取是将松茸子实体预处理后，溶解在pH为9.5的碱溶液中，进行超声提取，最后调节pH至8.7~9.2，在72~76℃下进行碱提取1.3~1.6h，离心取上清液进行盐析，再进行透析和冷冻干燥。2.如权利要求1所述的一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于：所述超声是在功率为200~250W下进行超声处理15~20min。3.如权利要求1或2所述的一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于：所述盐析是在所述上清液中加入饱和度为90%的硫酸铵，在4℃下静置盐析12~24h，盐析后的溶液得沉淀物，所述透析是用PBS磷酸盐缓冲液溶解沉淀物，得松茸粗蛋白溶液，将松茸粗蛋白溶液在10kDa透析袋中进行透析除盐，4℃下静置24h，收集透析袋中溶液即为松茸蛋白溶液。4.如权利要求1
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3任一项所述的一种松茸子实体蛋白源性抗氧化水解肽的制备方法，其特征在于：所述水解松茸蛋白，具体是将所述松茸蛋白粉溶解在缓冲液中形成溶液，依次经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的酶解后离心、取上清液冷冻干燥，其中碱性蛋白酶的添加量为松茸蛋白粉质量的2%，酶解环境是pH为9.5，温度为50℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳丽，赖雨微，陈光，王刚，孙旸，高俊鹏，陈欢，张斯童，张倩，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：