一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，属于化学发光体外诊断技术领域。本发明专利技术的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，包括：R1试剂为链酶亲和素磁微粒，R2试剂为化学发光物质标记的新型冠状病毒S蛋白RBD、化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物，R3试剂为生物素标记的ACE2，校准品和质控品。本发明专利技术的试剂盒采用竞争法检测新型冠状病毒中和抗体，通过RBD蛋白‑hACE2蛋白相互作用模拟病毒与宿主的相互作用，检测结果完全可以代表新型冠状病毒中和抗体结果。本发明专利技术的试剂盒采用直接化学发光法进行检测，成本较低，且无放射性污染，试剂种类少方便运输，操作简单，检测速度快，可满足实现医院大规模临床样本检测需求。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒
本专利技术属于化学发光体外诊断
，具体涉及一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒。
技术介绍
新型冠状病毒属于冠状病毒β属，是单链RNA病毒，可引起急性呼吸道疾病(coronavirusdisease-2019，COVID-19)。2019-nCoV具有多种结构蛋白，包括棘突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)。在这些蛋白质中，棘突蛋白和核衣壳蛋白是主要的免疫原。S蛋白是一种主要的保护性抗原，能诱导产生高效的中和抗体(NAbs)，在病毒的附着、融合、进入和传播中起着重要作用。S蛋白包含负责病毒与受体结合的N末端S1亚单位和负责病毒与细胞膜融合的C末端S2亚单位。S1亚单位又分为N末端结构域(NTD)和受体结合结构域(RBD)。S1的RBD直接与宿主受体相互作用，人血管紧张素转化酶2(hACE2)是2019-nCoV进入宿主受体细胞的关键受体。感染2019-nCoV引发免疫反应产生抗体，并非所有抗体都能阻断2019-nCoV侵入宿主细胞并进行复制。能阻断病毒细胞浸入和复制的抗体亚群称为NAbs。S1亚单位内的RBD是2019-nCoV-NAbs最关键的靶点。因此，人血中的2019-nCoV-NAbs水平与从2019-nCoV感染中恢复的个体的保护性免疫应答相关，也反映了人群群体免疫水平，为过去或正在进行的COVID-19感染患者的临床管理提供信息。然而，中和抗体的产生需要多长时间，以及它们是否总是在2019-nCoV感染后产生，目前尚不清楚。目前中国专利202010919164.X提供一种新型冠状病毒中和性抗体滴度检测ELISA试剂盒，ELISA检测方法需要封闭、显色和终止等操作步骤和相关试剂，检测时间较长，人工操作步骤复杂，试剂种类多不利于运输。
技术实现思路
本专利技术要解决现有技术中的技术问题，提供一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，本专利技术的试剂盒采用直接化学发光法进行检测，成本较低，且无放射性污染，试剂种类少方便运输，操作简单，检测速度快，可满足实现医院大规模临床样本检测需求。为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案具体如下：本专利技术提供一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，包括：R1试剂、R2试剂、R3试剂、校准品和质控品；所述R1试剂为链酶亲和素磁微粒；所述R2试剂为化学发光物质标记的新型冠状病毒S(棘突)蛋白RBD(受体结合结构域)；所述化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物；所述R3试剂为生物素标记的ACE2(血管紧张素转化酶2)。在上述技术方案中，优选的是：所述R1试剂的链酶亲和素磁微粒，粒径为1～3μm，试剂缓冲液为50mMMES、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300，pH6.5。在上述技术方案中，进一步优选的是：所述R1试剂的浓度为0.072％。在上述技术方案中，优选的是：所述R2试剂包括0.1μg/mL～2μg/mL化学发光物质标记的新型冠状病毒S蛋白RBD；试剂缓冲液为100mmol/LPB，0.01％～0.2％NaCl，0.01％～1％Tween-20，0.1％～0.3％proclin-300，0.01％～0.2％NaN3，2mmol/LEDTA*2Na，0.1％～2％BGG，0.1％～5％BSA，0.1％～2％酪蛋白，pH6.0。在上述技术方案中，优选的是：所述R2试剂中化学发光物质与新型冠状病毒S蛋白RBD的标记摩尔比例为1：1～10：1。在上述技术方案中，进一步优选的是：所述R2试剂为化学发光物质标记的新型冠状病毒S蛋白RBD，浓度为1.0μg/mL，化学发光物质为吖啶酯，化学发光物质与新型冠状病毒S蛋白RBD的摩尔比为3：1；试剂缓冲液为100mmol/LPB，0.9％NaCl，0.05％Tween-20，0.2％proclin-300，0.1％NaN3，2mmol/LEDTA*2Na，1％BGG，2％BSA，0.5％酪蛋白，pH6.0。在上述技术方案中，优选的是：所述R3试剂包括0.1μg/mL～2μg/mL生物素标记的ACE2；试剂缓冲液为100mmol/LPB，0.01％～0.2％NaCl，0.01％～1％Tween-20，0.01％～0.3％proclin-300，0.01％～0.2％NaN3，1～5mmol/LZnCl2，0.05～0.2μg/mLACE2抑制剂，0.1％～2％BGG，0.1％～5％BSA，pH7.4。在上述技术方案中，进一步优选的是：所述R3试剂浓度为0.7μg/mL，生物素：ACE2摩尔比为5：1；试剂缓冲液为100mmol/LPB，0.9％NaCl，0.05％Tween-20，0.05％proclin-300，0.02％NaN3，2mmol/LZnCl2，0.1μg/mLACE2抑制剂，0.1％BGG，0.1％BSA，pH7.4。在上述技术方案中，优选的是：所述R3试剂中的ACE2抑制剂，包括(1)含有巯基(SH)的巯甲丙脯酸，(2)含有羧基(COO-)的苯酯丙脯氨酸、雷米普利、培哚普利、贝那普利，(3)含有膦酸基(POO-)的福辛普利；所述ACE2抑制剂为以上ACE2抑制剂的一种或多种。其中，优选巯甲丙脯酸和/或苯酯丙脯氨酸。本专利技术的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒用于新型冠状病毒中和抗体检测时，先测试产品校准品，校准合格后再测试质控品，质控品测试结果落在靶值范围内认为试剂质控合格。质控合格后开始测试样本，根据样本发光值计算样本浓度。这种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成新型冠状病毒中和抗体的检测。本专利技术的有益效果是：本专利技术的试剂盒使用链酶亲和素磁微粒—生物素—吖啶酯体系，竞争法检测血清、血浆中新型冠状病毒中和抗体。本专利技术的试剂盒旨在通过直接RBD蛋白-hACE2蛋白相互作用模拟病毒与宿主的相互作用。这种高度特异性的相互作用，与传统的病毒中和试验(VNT)相同。本专利技术不应用于诊断急性2019-nCoV感染。具体优点如下：1、本专利技术采用竞争法检测新型冠状病毒中和抗体，通过RBD蛋白-hACE2蛋白相互作用模拟病毒与宿主的相互作用，检测结果完全可以代表新型冠状病毒中和抗体结果。2、本专利技术通过在R3试剂中添加稳定剂，稳定了ACE2的结构，有效地改善了试剂盒的稳定性。所述的稳定剂为ACE2抑制剂和Zn2+，既稳定了ACE2的结构，又不影响ACE2与RBD结合，在确保试剂性能的同时，提高了检测试剂的稳定性。3、与新型冠状病毒中和抗体免疫层析检测试剂相比，具有更高的灵敏度，检出率更高。4、本专利技术采用吖啶酯直接发光，降低了本底空白，提高了灵敏度。5、本专利技术的试剂盒可直接用于全自动化学法光免疫分析仪上，无需大型仪器设备配合，成本较低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附表和具体实例对本专利技术的具体实施方式做详细的说本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，包括：R1试剂、R2试剂、R3试剂、校准品和质控品；/n所述R1试剂为链酶亲和素磁微粒；/n所述R2试剂为化学发光物质标记的新型冠状病毒S蛋白RBD；所述化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物；/n所述R3试剂为生物素标记的ACE2。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，包括：R1试剂、R2试剂、R3试剂、校准品和质控品；
所述R1试剂为链酶亲和素磁微粒；
所述R2试剂为化学发光物质标记的新型冠状病毒S蛋白RBD；所述化学发光物质为吖啶酯或吖啶酯衍生物；
所述R3试剂为生物素标记的ACE2。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的链酶亲和素磁微粒，粒径为1～3μm，试剂缓冲液为50mMMES、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300，pH6.5。


3.根据权利要求2所述的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的浓度为0.072％。


4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R2试剂包括0.1μg/mL～2μg/mL化学发光物质标记的新型冠状病毒S蛋白RBD；试剂缓冲液为100mmol/LPB，0.01％～0.2％NaCl，0.01％～1％Tween-20，0.1％～0.3％proclin-300，0.01％～0.2％NaN3，2mmol/LEDTA*2Na，0.1％～2％BGG，0.1％～5％BSA，0.1％～2％酪蛋白，pH6.0。


5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中化学发光物质与新型冠状病毒S蛋白RBD的标记摩尔比例为1：1～10：1。


6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒中和抗体测定试剂盒，其特征在于，所述R2试剂的浓度为1.0μg/mL，化学发光物质为吖啶酯，化学发光物质...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐仁陶，胡雪凇，于猛，孟令敏，高威，孙成艳，齐琳，丛凡淏，刘春平，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22