一种同时检测多种抗原抗体的方法及其载体制备技术

本发明专利技术涉及一种同时检测多种抗原抗体的方法及其载体制备，将所述待反应样品分别加入抗原载体和抗体载体所在的反应腔内样品反应；对抗原载体和抗体载体所在的反应腔进行初次清洗；将酶标试剂注入抗原载体和抗体载体所在的反应腔进行酶标反应；对抗原载体和抗体载体所在的反应腔进行二次清洗；将发光底物注入抗原载体和抗体载体所在的反应腔；在避光条件下采用CCD获取发光信号。载体制备包括对抗原、抗体和载体进行前处理，将前处理载体置于前处理溶液稀释后制成的包被缓冲液中，得到包被载体；将包被载体清洗封闭，得到抗原载体和抗体载体。本发明专利技术通过将抗原和抗体制备成抗原载体和抗体载体，然后结合检测芯片，可以同时实现多种指标的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测多种抗原抗体的方法及其载体制备
本专利技术涉及生物检测
，并且更具体地，涉及到一种同时检测多种抗原抗体的方法及其载体制备。
技术介绍
弓形虫病又称弓形体病，是由刚地弓形虫所引起的人畜共患病，猫和猫科动物在传染此病时最为重要。孕妇感染弓形虫后，可通过胎盘垂直传播给胎儿，损害胚胎发育，引起胎儿严重的精神系统发育畸形和智力障碍，降低人口素质，甚至引起死亡。TOX-IgM抗体早于TOX-IgG抗体出现，在急性期过后，TOX-IgM抗体较快下降，而TOX-IgG抗体可能长时间存在。故测定TOX-IgM抗体适用于早期诊断，TOX-IgG抗体阳性说明曾经感染过弓形虫，多为慢性感染。风疹病毒属于被膜病毒科风疹病毒属，包含一单股、正链RNA，及三种结构蛋白E1、E2和C，其中糖蛋白E1、E2以异二聚体形式位于包膜上，蛋白C与RNA组成核衣壳。风疹患者是风疹的传染源。人是风疹病毒的唯一宿主，风疹病毒主要通过呼吸道飞沫传播。孕妇感染后，可通过胎盘感染胎儿。临床上以发热、耳后枕部和颈后的淋巴结病变和斑丘疹为主要表现，大量患者表现为隐性感染。妊娠早期(前3月)感染的孕妇易引起死胎、流产或造成胎儿畸形等先天性风疹综合征。风疹IgG抗体(RUB-IgG)通常出现在皮疹出现的时间，在出疹后会仍然存在。巨细胞病毒(CytomegaloVirus，CMV)是一种疱疹病毒组DNA病毒，具有典型的疱疹病毒形态。分布广泛，人对其有广泛的易感性，传播途径多种多样，属于性传播性疾病。其感染主要为无症状的亚临床感染，CMV感染可引起以生殖泌尿系统，中枢神经系统和肝脏疾患为主的各系统感染，从轻微无症状感染直到严重缺陷或死亡。孕妇感染了巨细胞病毒后，病毒可通过胎盘感染胎儿，造成胎儿先天性感染，流产和死胎。CMV-IgG在病毒感染后4～6周出现，并持续终生。单纯疱疹病毒(Herpessimplexvirus，HSV)是一类严重危害人类健康、引起皮肤病和性病的病毒性病原体，可引起如龈口炎、角膜结膜炎、脑炎以及生殖系统感染和新生儿的感染。人类是人HSV的唯一宿主，HSV可存在于病人、恢复者或健康带毒者的水疱疱液、唾液及粪便中，在体内经血液或神经通路播散，感染后HSV以某种形式潜伏于局部感染神经节细胞中。病毒分为两个血清型即I型和II型。其中HSV-I型感染复发率低，发作时间间隔长。患者感染HSV后，针对HSV的抗体在1周左右出现，3-4周达到高峰，并可持续多年，治疗后，抗体水平会相应地下降。HSVII主要通过性生活传播，感染生殖器及腰以下部位，其典型临床表现为外生殖器皮肤黏膜的红斑、丘疹等。孕妇一旦发生感染，可引起胎儿流产、先天性畸形或发育障碍，新生儿致死或永久性的神经系统受损。HSVII-IgG在病毒感染后4～6周出现，且通常持续终生。目前上述疾病检主要检测方法有：酶联免疫法、胶体金法、化学发光法。其中化学发光法具有更高的灵敏度和特异性，检测的准确率高于酶联免疫法、胶体金法，是采用得最多的一种检测方法。现有的试剂盒多为单项检测试剂盒，每个芯片中只内置一种带抗原的微球，而孕前检测时5项疾病均需要检测，检测时间会很长，无法及时给出检测结果，现有的检测装置无法满足同时检测的需求。基于此，现有技术仍然有待改进。
技术实现思路
本专利技术针对上述问题，目的在于提供一种同时检测多种抗原抗体的方法及其载体制备，以解决现有技术无法同时实现多种抗原抗体检测的技术问题。为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一方面，本专利技术的实例公开了一种抗原抗体载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一对抗原、抗体进行前处理，得到前处理溶液，对载体进行前处理，得到前处理载体；步骤二将前处理溶液稀释后作为包被缓冲液，将前处理载体置于包被缓冲液中进行包被，得到包被载体；步骤三将包被载体清洗后进行封闭处理并烘干，得到抗原载体和抗体载体。进一步地，所述载体为玻片、微球或硝酸纤维素膜。进一步地，对抗原、抗体进行前处理包括：将抗原或抗体放入透析袋并置于前处理缓冲液中在2-8℃下保持10-48小时；其中，所述前处理缓冲液为0.02mmol/LPH7.0-8.0的磷酸盐缓冲液、0.05mmol/LPH7.0-10.0碳酸盐缓冲液或0.05-0.1mmol/LPH7.0-9.0Tris盐缓冲液。进一步地，将前处理溶液稀释后作为包被缓冲液包括：将抗原或抗体的前处理处理溶液采用1x磷酸盐缓冲液和/或1x碳酸盐缓冲液稀释至溶液中抗原或抗体含量为0.1-10ug/ml。进一步地，所述包被包括：在温度为35-40℃条件下处理1-4小时，然后再温度为2-8℃下处理8-30小时。进一步地，采用1-3mm的微球作为载体时，每个微球所使用的包被液约为0.1-2.5mL。进一步地，所述将包被载体清洗为使用pH6.5-7.5之间的磷酸盐缓冲液清洗3-5次。进一步地，所述封闭处理包括使用含蛋白的保护液进行封闭，封闭条件为30-40℃温度处理1-4小时。进一步地，所述含蛋白的保护液为含0.1-1％BSA的PBS缓冲液。进一步地，所述抗原包括：弓形虫抗原、风疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、单纯疱疹病毒I型抗原、单纯疱疹病毒II型抗原；所述抗体为抗人IgMμ链抗体。另一方面，本专利技术实施例还公开了一种抗原载体或抗体载体，其采用上述的制备方法制得。第三方面，本专利技术实施例还公开了一种同时检测多种抗原抗体的方法，其包括，将上述的抗原载体和抗体载体分别置于对应的反应腔内；将待测样品处理后加入至样稀储存腔内并混匀，得到待反应样品；将所述待反应样品分别加入抗原载体和抗体载体所在的反应腔内样品反应；样品反应完成后，对抗原载体和抗体载体所在的反应腔进行初次清洗；初次清洗完成后，将酶标试剂注入抗原载体和抗体载体所在的反应腔进行酶标反应；酶标反应完成后，对抗原载体和抗体载体所在的反应腔进行二次清洗；二次清洗完成后，将发光底物注入抗原载体和抗体载体所在的反应腔；发光底物注入完成后，在避光条件下采用CCD获取发光信号，从而得到检测结果；其中，所述酶标试剂为标记了HRP的抗原和抗体。上述方法可用于同时检测优生优育五项IgM和IgG两种抗体10项指标。本专利技术的有益效果是：本专利技术通过将抗原和抗体制备成抗原载体和抗体载体，然后结合检测芯片，可以同时实现多种指标的检测，通过分区控制和特有的抗原抗体包被设计实现多项指标检测，通过采用同步反应过程，达到简化已有10项指标检测耗时的目的，极短时间(30分钟)内实现10项指标可同时出结果。附图说明图1为本专利技术一实施例的检测芯片的结构示意图；图2为本专利技术一实施例的检测芯片的爆炸图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本专利技术实施例进一步详细说明。...

【技术保护点】
1.一种抗原抗体载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一 对抗原、抗体进行前处理，得到前处理溶液，对载体进行前处理，得到前处理载体；/n步骤二 将前处理溶液稀释后作为包被缓冲液，将前处理载体置于包被缓冲液中进行包被，得到包被载体；/n步骤三 将包被载体清洗后进行封闭处理并烘干，得到抗原载体和抗体载体。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗原抗体载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一对抗原、抗体进行前处理，得到前处理溶液，对载体进行前处理，得到前处理载体；
步骤二将前处理溶液稀释后作为包被缓冲液，将前处理载体置于包被缓冲液中进行包被，得到包被载体；
步骤三将包被载体清洗后进行封闭处理并烘干，得到抗原载体和抗体载体。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，对抗原、抗体进行前处理包括：
将抗原或抗体放入透析袋并置于前处理缓冲液中在2-8℃下保持10-48小时；
其中，所述前处理缓冲液为0.02mmol/LPH7.0-8.0的磷酸盐缓冲液、0.05mmol/LPH7.0-10.0碳酸盐缓冲液或0.05-0.1mmol/LPH7.0-9.0Tris盐缓冲液。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将前处理溶液稀释后作为包被缓冲液包括：将抗原或抗体的前处理处理溶液采用1x磷酸盐缓冲液和/或1x碳酸盐缓冲液稀释至溶液中抗原或抗体含量为0.1-10ug/ml。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述包被包括：
在温度为35-40℃条件下处理1-4小时，然后再温度为2-8℃下处理8-30小时。


5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将包被载体清洗为使用pH6.5-7.5之间的磷酸盐缓冲液清洗3-5次。


6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述封闭处理包...

【专利技术属性】
技术研发人员：王东，任晋楷，王旋，张岩，朱家君，李益民，史巧云，吴晓巍，贾雪荣，戚雨婷，张晓磊，张新娟，乔杉，
申请(专利权)人：北京万泰生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11